響應(yīng)面法優(yōu)化合浦珠母貝糖胺聚糖 咀嚼片的制備工藝

張 磊,王錦旭,楊賢慶,*,魏 涯,岑劍偉

(1.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所,農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 國家水產(chǎn)品加工技術(shù)研發(fā)中心,廣東廣州 510300; 2.上海海洋大學(xué)食品學(xué)院,上海 201306)

合浦珠母貝(Pinctadamartensii)又名馬氏珠母貝,是我國南方海水珍珠養(yǎng)殖的主要品種之一,廣泛分布在廣東、廣西和海南等沿海地區(qū)[1-2],隨著海水珍珠養(yǎng)殖面積的不斷增大,其產(chǎn)量逐年增加。珠農(nóng)采珠后,每年所余的加工副產(chǎn)物珍珠貝肉約達(dá)3500～4000 t,大多為新鮮或粗加工后食用,以鮮品銷售為主,價(jià)格低廉,深加工率較低、貯藏期短,導(dǎo)致珍珠貝肉的開發(fā)利用受到限制,造成資源的巨大浪費(fèi),采珠后產(chǎn)生的大量珍珠貝肉急需進(jìn)行高值化利用[3]。合浦珠母貝貝肉除了富含優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)和多種礦物質(zhì)之外,其中的糖胺聚糖作為一種天然來源的具有免疫調(diào)節(jié)功能的生物活性多糖也越來越引人關(guān)注。

糖胺聚糖(Glycosaminoglycans,GAGs),也稱氨基多糖或酸性粘多糖,是由重復(fù)的二糖單位構(gòu)成的長鏈多糖,存在于多數(shù)海洋動物的組織中,具有增強(qiáng)免疫功能、抗凝血、降血糖、抗腫瘤等多種作用[4-5]。有文獻(xiàn)證實(shí),糖胺聚糖可通過刺激機(jī)體的各種免疫活性細(xì)胞(樹突狀細(xì)胞[6]、B淋巴細(xì)胞)的成熟、分化和繁殖,增加巨噬細(xì)胞非特異性細(xì)胞毒性,誘導(dǎo)IL-1、IL-2、TNF-α、IFN-γ、IL-8等細(xì)胞因子的產(chǎn)生和細(xì)胞因子受體的表達(dá),具有促進(jìn)抗原遞呈、抗體形成,活化補(bǔ)體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑及變更途徑等作用,備受醫(yī)藥界和食品界的關(guān)注[7-12]。因此,從合浦珠母貝全臟器中提取糖胺聚糖[13],開發(fā)出新型產(chǎn)品,實(shí)現(xiàn)合浦珠母貝高值化利用,可以豐富其食品種類和資源轉(zhuǎn)化途徑,對貝類養(yǎng)殖業(yè)健康持續(xù)發(fā)展和人類健康有重要意義。

咀嚼片是指于口腔中咀嚼或吮服使片溶化后吞服的片劑,服用方便,可吞服、咀嚼含吮或用水溶解后服用。片劑經(jīng)嚼碎后表面積增大,可促進(jìn)活性成分在體內(nèi)的溶解和吸收,即使在缺水狀態(tài)下,也可以保證按時(shí)服用,尤其適合老人、小孩、吞服困難及胃腸功能差的人群,具有生物利用度高[14]、減少胃腸道負(fù)擔(dān)等優(yōu)勢,因此越來越多的營養(yǎng)健康食品被開發(fā)制成咀嚼片,如燕麥膳食纖維咀嚼片[15]、氨基酸螯合鈣奶味咀嚼片[16]、納豆咀嚼片[17]等。

目前關(guān)于合浦珠母貝糖胺聚糖的研究局限在制備工藝優(yōu)化和對免疫器官、淋巴細(xì)胞的增殖作用等,而對其在食品工業(yè)方面的應(yīng)用尚未被報(bào)道[18]。針對這種不足,本文旨在開發(fā)出糖胺聚糖系列的營養(yǎng)健康食品,以實(shí)驗(yàn)室自制的合浦珠母貝糖胺聚糖為主料,通過加入輔料制備成咀嚼片,在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,以感官評價(jià)為指標(biāo),采用響應(yīng)面法試驗(yàn)優(yōu)化出最優(yōu)的配方工藝,為糖胺聚糖咀嚼片制備工藝提供了參數(shù)依據(jù),為合浦珠母貝的充分開發(fā)提供新的方法和思路。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

合浦珠母貝(總重25～35 g,全臟器) 廣東省徐聞縣,-18 ℃保存;糖胺聚糖 自合浦珠母貝全臟器中提取,置于4 ℃條件下冷藏待用;羥丙基甲基纖維素(HPMC) 美國陶氏化學(xué)公司;微晶纖維素(MCC) 浙江省湖州展望藥業(yè)有限公司;乳糖 德國Meggle公司;硬脂酸鎂 上海吉天食品有限公司;檸檬酸、甘露糖、阿斯巴甜 均為食品級,廣州齊云生物技術(shù)有限公司;中性蛋白酶(100 U/mg)、胰蛋白酶(250 U/mg)、透析袋、DEAE-52纖維素填料 廣州齊云生物技術(shù)有限公司;SD大鼠 SPF級,雌雄各半,體重180～200 g,廣東省醫(yī)學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心,動物生產(chǎn)許可證號SCXK(粵)2013-0003,實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量合格證明號No. 44007200037911,動物飼養(yǎng)于廣東省醫(yī)學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心SPF級動物實(shí)驗(yàn)設(shè)施[許可證號SYXK(粵)2013-0002,動物實(shí)驗(yàn)證明號No. 00165703]。

Milli-Q超純水機(jī) 美國Millipore公司;DS-1高速組織搗碎機(jī) 上海標(biāo)本模型廠;HWS24電熱恒溫水浴鍋 上海一恒科學(xué)儀器有限公司;Delta320精密pH計(jì) 梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;紫外分光光度計(jì) 日本Shimadzu公司;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠;DEAE-52纖維素陰離子柱 上海寶曼生物科技有限公司;Alpha1-4冷凍干燥機(jī) 德國Christ;DHG-9145A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海一恒科學(xué)儀器有限公司;TDP-1單沖壓片機(jī) 上海天凡藥機(jī)制造廠;78X-3片劑四用測試儀 上海黃海藥檢儀器廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 合浦珠母貝糖胺聚糖提取工藝 參照周小雙[13]和孫曉朋[19]的方法,并稍加修改。將合浦珠母貝全臟器常溫下自然解凍,用高速組織搗碎機(jī)制成肉泥備用。取一定量肉泥加2倍體積水,55 ℃浸提4 h,4 ℃浸提12 h。加入中性蛋白酶和胰蛋白酶,調(diào)節(jié)pH7.6,復(fù)合酶解4 h,煮沸10 min滅酶,10000 r/min離心20 min,取上清液,重復(fù)離心操作直至除去雜質(zhì)蛋白。上清液pH調(diào)至7.0,加70%乙醇4 ℃醇沉12 h,8000 r/min離心取沉淀,對沉淀抽濾,無水乙醇、丙酮分別交替洗滌沉淀,冷凍干燥48 h得糖胺聚糖粗制品,粗多糖經(jīng)過透析,DEAE-52纖維素陰離子柱層析分離得到合浦珠母貝糖胺聚糖精制品。

1.2.2 合浦珠母貝糖胺聚糖咀嚼片制備工藝 工藝流程:糖胺聚糖、輔料→過篩→制軟材→造?！稍铩！訚櫥瑒浩|(zhì)量檢測→咀嚼片。

準(zhǔn)確稱取糖胺聚糖及配方中其它輔料,過100目篩混勻后,緩慢噴灑10%的羥丙基甲基纖維素水溶液,同時(shí)不斷攪拌均勻制成軟材,20目篩造粒,于60 ℃干燥至含水量小于3%,加適量硬脂酸鎂混勻后過16目篩整粒,確定片重,采用直徑8 mm單沖壓片即得糖胺聚糖咀嚼片(規(guī)格200 mg/片)。將片劑置于紫外燈下照射15～20 min,用食品級阻濕包裝袋按20片每小袋的規(guī)格包裝,再將小袋包裝按照一定數(shù)量裝成大包裝[20-22]。

1.2.3 單因素實(shí)驗(yàn) 根據(jù)前期糖胺聚糖活性評價(jià)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和成人—小鼠劑量換算公式,合浦珠母貝糖胺聚糖的小鼠起效劑量為0.25 mg/d,按照公式換算為成人起效劑量為200 mg/d,按照每天服用六片咀嚼片計(jì)算,每片中的糖胺聚糖添加量為17%[18]。實(shí)驗(yàn)選擇甘露糖為矯味劑、MCC為填充劑、HMPC為粘合劑、硬脂酸鎂為潤滑劑,適量乳糖調(diào)節(jié)片重,對影響糖胺聚糖咀嚼片品質(zhì)的四個(gè)主要因素,分別進(jìn)行單因素試驗(yàn)。

矯味劑添加量的選擇:在糖胺聚糖17%、填充劑40%、粘合劑3%、潤滑劑2%的情況下,考察矯味劑添加量分別為15%、20%、25%、30%、35%時(shí)，對咀嚼片感官分值的影響。

填充劑添加量的選擇:在糖胺聚糖17%、矯味劑20%、粘合劑3%、潤滑劑2%的情況下,考察填充劑添加量分別為35%、40%、45%、50%、55%時(shí)，對咀嚼片感官分值的影響。

粘合劑添加量的選擇:在糖胺聚糖17%、矯味劑20%、填充劑40%、潤滑劑2%的情況下,考察粘合劑添加量分別為1%、2%、3%、4%、5%時(shí)，對咀嚼片感官分值的影響。

潤滑劑添加量的選擇:在糖胺聚糖17%、矯味劑20%、填充劑40%、粘合劑3%的情況下,考察潤滑劑添加量分別為0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%時(shí)，對咀嚼片感官分值的影響。

1.2.4 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn) 根據(jù)Box-Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理,建立三因素三水平的模型,運(yùn)用統(tǒng)計(jì)分析軟件Design-expert 8.0.6對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,優(yōu)化糖胺聚糖咀嚼片配方參數(shù)。基于單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,綜合考慮各因素對感官分值的影響,選取以矯味劑(A)、填充劑(B)、粘合劑(C)為自變量,自變量的水平以-1、0、1作為編碼值,實(shí)驗(yàn)共有17組,其中包含12個(gè)析因點(diǎn)和5個(gè)零點(diǎn),這5個(gè)零點(diǎn)實(shí)驗(yàn)用于誤差估計(jì),其因素水平編碼見表1。

表1 響應(yīng)面試驗(yàn)因素及水平表Table 1 Factors and levelsTable of response surface experiment

1.2.5 感官評價(jià)方法 由10位具有一定經(jīng)驗(yàn)及鑒別能力的品嘗者組成評定小組,依據(jù)評分標(biāo)準(zhǔn),分別對咀嚼片的色澤、組織狀態(tài)、硬度和口感4個(gè)項(xiàng)目進(jìn)行評分,取其平均值為最終感官分值。感官評分標(biāo)準(zhǔn)見表2[23-24]。

表2 感官評分標(biāo)準(zhǔn)(分)Table 2 Sensory evaluation standards(score)

1.2.6 其他指標(biāo)的測定方法 水分指標(biāo)測定:采用GB 5009.3-2016中的直接干燥法對片劑的水分進(jìn)行測定[25];糖胺聚糖測定:1,9-二甲基亞甲基藍(lán)法[13];蛋白質(zhì)測定:BCA試劑盒法;總糖測定:苯酚-硫酸法;重金屬污染物測定:濕法消解ICP-MS;微生物指標(biāo)測定:菌落總數(shù)的測定參照GB 4789.2-2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測定》[26],大腸菌群的測定參照GB 4789.3-2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)》[27]、霉菌和酵母菌的測定參照GB 4789.15-2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)》[28]、金黃色葡萄球菌的測定參照GB 4789.10-2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》[29]、沙門氏菌的測定參照GB 4789.4-2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》[30]。

表3 急性經(jīng)口毒性的評價(jià)規(guī)定Table 3 Evaluation regulations of acute oral toxicity

1.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1.1 矯味劑的篩選 咀嚼片一般經(jīng)口中嚼碎后咽下,因此口味的好壞至關(guān)重要,甘露醇有甜味,因溶解時(shí)吸熱而使口腔有舒服感,所以選擇甘露醇為咀嚼片的矯味劑[32]。從圖1可知,當(dāng)添加量小于25%時(shí),隨著添加量的增加,咀嚼片感官分值增加;在添加量為25%時(shí),咀嚼片達(dá)到較適宜的爽口度和甜度,感官分值為78.3分;超過25%之后,隨著添加量的增加,咀嚼片感官分值降低,此時(shí)咀嚼片爽口度雖然繼續(xù)增加,但甜度開始過大。另外,矯味劑對感官分值的影響比較明顯,添加量為25%與20%、30%、35%之間均存在顯著性差異(p<0.05),綜合考慮選擇矯味劑添加量為25%。此外,采用阿斯巴甜和檸檬酸進(jìn)行配伍實(shí)驗(yàn),當(dāng)阿斯巴甜添加量為0.5%,檸檬酸添加量為0.1%時(shí),可以調(diào)出愉悅綿延的酸甜的口感,輔助矯味的效果更佳。

圖1 矯味劑添加量對咀嚼片感官分值的影響Fig.1 Effects of additive amount of flavoring agent on sensory score of chewable Tablets

2.1.2 填充劑的篩選 在制備咀嚼片時(shí),加入填充劑,使片劑的質(zhì)量增加,體積增大,可使主料成分劑量偏差減少,解決因其用量小致壓片困難的問題[33-34]。糖胺聚糖具有一定粘性,加入填充劑來分散主料,降低其粘性,更便于制粒。由預(yù)實(shí)驗(yàn)得知,MCC作為填充劑時(shí),片劑成形性最好,而淀粉制得的咀嚼片難以成型,且其糊口感嚴(yán)重,麥芽糊精成形性介于上述兩者之間[32];因此,選用MCC作為填充劑,MCC添加量對咀嚼片感官分值的影響結(jié)果見圖2。由圖2可知,咀嚼片感官分值隨著MCC添加量的增加先緩慢升高后降低,并在添加量為45%時(shí)達(dá)到最高值,感官分值為75.0分。當(dāng)添加量繼續(xù)增加,制得片劑的感官分值顯著降低(p<0.05),可能是由于片劑硬度增大、不易咀嚼等原因?qū)е赂泄俜种迪陆礫32],故選擇MCC添加量為45%。此外,需添加適量乳糖調(diào)節(jié)片重,乳糖不僅耐壓性好,安全性高,而且甜度低,添加量對整個(gè)片劑的口感影響較小。

圖2 填充劑添加量對咀嚼片感官分值的影響Fig.2 Effects of additive amount of filler on sensory score of chewable Tablets

2.1.3 粘合劑的篩選 濕法造粒可有效防止粉塵飛揚(yáng),也可有效提高填充效率[24]。本文選擇聚乙烯吡咯烷酮、HMPC和淀粉漿進(jìn)行黏合劑篩選預(yù)實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,淀粉漿黏結(jié)效果不好、片劑入口松散;聚乙烯吡咯烷酮不溶于水,在乙醇溶液中溶解緩慢,操作復(fù)雜;HMPC口感無異味,有一定的粘合效果,宜采用[35]。實(shí)驗(yàn)以HPMC水溶液為粘合劑,考察不同HPMC添加量對咀嚼片感官分值的影響,結(jié)果如圖3所示。由圖3可知,當(dāng)HPMC添加量為1%～3%時(shí),咀嚼片感官分值有所增加，但無顯著性差異(p>0.05)，當(dāng)HPMC添加量為3%時(shí),咀嚼片感官分值最高,而隨著HPMC含量的降低,感官分值緩慢下降,可能是因?yàn)樵斐鲱w粒的緊密程度降低,粉劑增多,出現(xiàn)碎片的頻率增大[24];在實(shí)際操作過程中,當(dāng)添加量為3%時(shí),制得的軟材適合造粒,造出的顆粒緊密,硬度適合壓片,且無碎片、裂片現(xiàn)象發(fā)生,這與劉明華等提出的當(dāng)以HMPC為粘合劑,添加量為3%時(shí),制得的咀嚼片圓整光潔、硬度適中、咀嚼性好的結(jié)果一致[36]。此外,當(dāng)HPMC添加量高于3%時(shí),其感官分值較添加量低于3%時(shí)的感官分值顯著降低(p<0.05),因此,實(shí)驗(yàn)選擇1%、2%、3% HPMC添加量進(jìn)行后續(xù)的響應(yīng)面試驗(yàn)。

圖3 粘合劑添加量對咀嚼片感官分值的影響Fig.3 Effect of additive amount of adhesive on sensory score of chewable Tablets

2.1.4 潤滑劑的篩選 在壓片前,為使咀嚼片表面光滑,易從模板上脫落,需在混合后的物料中加入一定量的潤滑劑,常用的疏水性潤滑劑有硬脂酸鎂、微分硅膠和滑石粉等。由預(yù)實(shí)驗(yàn)可知,硬脂酸鎂作為潤滑劑進(jìn)行壓片時(shí),既可提高咀嚼片外觀亮度,又能防止粘沖[37],因此,實(shí)驗(yàn)選擇硬脂酸鎂作為潤滑劑,考察潤滑劑添加量對咀嚼片感官分值的影響,結(jié)果如圖4所示。由圖4可知,隨著硬脂酸鎂添加量增加,感官分值逐漸增加,當(dāng)添加量為1.0%時(shí),感官分值為75.2分,且脫模效果好,推測是潤滑劑增加了顆粒的流動性、潤滑性,減少了物料的黏性[24];而當(dāng)潤滑劑添加量繼續(xù)增加時(shí),感官分值呈緩慢下降的趨勢,這一結(jié)果與馮大偉等[24]在制備菊粉咀嚼片時(shí)，提出的當(dāng)硬脂酸鎂添加量為1%時(shí)，潤滑效果好、片面光滑美觀的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符。因此,實(shí)驗(yàn)選用硬脂酸鎂添加量為0.5%、1.0%、1.5%進(jìn)行后續(xù)的響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)。

圖4 潤滑劑添加量對咀嚼片感官分值的影響Fig.4 Effect of additive amount of lubricant on sensory score of chewable Tablets

2.2 響應(yīng)面法優(yōu)化咀嚼片配方結(jié)果分析

2.2.1 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果 依據(jù)響應(yīng)面Box-behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),最終完成17組試驗(yàn),試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見表4。

表4 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 4 Design and results of response surface experiment

2.2.2 回歸方程的建立與方差分析 運(yùn)用Design-expert 8.0.6軟件對表4實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析,對模型進(jìn)行方差分析及顯著性檢驗(yàn),采用逐步回歸的方法對設(shè)計(jì)進(jìn)行優(yōu)化,建立的二次響應(yīng)面回歸模型為:感官分值Y=78.50+0.86A-1.59B+0.63C+1.64AB-0.91AC+1.00BC-2.01A2-3.10B2-1.23C2。

表5 回歸方程的方差分析Table 5 Variance analysis of regression equation

根據(jù)回歸方程可繪制出相應(yīng)的等高線和響應(yīng)曲面,具體見圖5～圖7。所擬合的響應(yīng)曲面的形狀直觀地反映了各因素對響應(yīng)值的影響趨勢,等高線的形狀可反映出兩變量交互作用的顯著程度,橢圓形表示兩因素交互作用明顯,而圓形則與之相反[38]。圖5是矯味劑和填充劑添加量對響應(yīng)值的影響圖,可以看出隨著矯味劑和填充劑添加量的增加,感官分值呈先升后降的趨勢,響應(yīng)曲面圖形陡峭,表示兩因素對感官分值的影響顯著,與方差分析結(jié)果吻合。由等高線圖形可以看出,圖5等高線呈橢圓形,表明矯味劑與填充劑的交互作用對感官分值的影響極為顯著,由圖6～圖7等高線圖形可知,矯味劑與粘合劑以及填充劑與粘合劑的交互作用對響應(yīng)值的影響均不顯著,這也與回歸分析的結(jié)果吻合。

圖5 矯味劑和填充劑添加量對咀嚼片感官分值的影響Fig.5 Effect of additive amout of flavoring agent and filler on sensory score of chewable Tablets

圖6 矯味劑和粘合劑添加量對咀嚼片感官分值的影響Fig.6 Effect of additive amout of flavor agent and adhesive on sensory score of chewable Tablets

圖7 填充劑和粘合劑添加量對咀嚼片感官分值的影響Fig.7 Effect of additive amout of filler and adhesive on sensory score of chewable Tablets

以感官分值為指標(biāo),經(jīng)Design-expert軟件分析可得到咀嚼片的最優(yōu)工藝條件為:矯味劑添加量25.49%、填充劑添加量43.96%、粘合劑添加量2.13%,對應(yīng)的預(yù)測值高達(dá)78.75分,雖略低于響應(yīng)面結(jié)果中的79.30分,但誤差小于0.7%,模型合理。為了檢驗(yàn)?zāi)Ｐ皖A(yù)測的準(zhǔn)確性,按最佳工藝稍作調(diào)整,即各組分添加量分別為糖胺聚糖17%、矯味劑25%、填充劑44%、粘合劑2%,在此條件下重復(fù)制作3個(gè)批次,感官分值為78.5±0.8分,與理論預(yù)測值相比相對誤差為1.35%,說明該模型能很好地預(yù)測糖胺聚糖咀嚼片配方工藝。

2.3 糖胺聚糖咀嚼片質(zhì)量指標(biāo)檢測結(jié)果

制得咀嚼片均重約200 mg,直徑約8 mm,形狀完整,根據(jù)《中國藥典》(2015年版)[39]檢測方法,對糖胺聚糖咀嚼片的感官、重量差異、硬度、脆碎度、重金屬和微生物限度等質(zhì)量指標(biāo)進(jìn)行,檢測結(jié)果見表6。結(jié)果表明,糖胺聚糖咀嚼片質(zhì)量指標(biāo)檢測結(jié)果均符合營養(yǎng)健康食品的相關(guān)要求,能有效保障產(chǎn)品質(zhì)量[40]。

表6 糖胺聚糖咀嚼片理化指標(biāo)檢測結(jié)果Table 6 Physic-chemical index of glycosaminoglycan chewable Tablets

2.4 糖胺聚糖咀嚼片急性經(jīng)口毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

急性經(jīng)口毒性實(shí)驗(yàn)是指一次或24 h內(nèi)多次染毒的實(shí)驗(yàn),主要測定受試物的半數(shù)致死量或濃度,并觀察試驗(yàn)動物的中毒表現(xiàn)。該實(shí)驗(yàn)中,合浦珠母貝糖胺聚糖咀嚼片組、溶劑對照組各20只SD大鼠，在給予受試物過程及14 d觀察期內(nèi),大鼠表現(xiàn)行為、活動狀況、呼吸、姿勢等均未見異常,無大鼠死亡。動物解剖后,肉眼觀察大鼠的心臟、肝臟、脾、胃、腸、腎及生殖腺等臟器外形、顏色、大小與比例,均未見任何異常,大鼠臟器未發(fā)生病變。大鼠體質(zhì)量正常增長,合浦珠母貝糖胺聚糖咀嚼片組的大鼠體質(zhì)量在各測定時(shí)間點(diǎn)與溶劑對照組比較均無顯著性差異(p>0.05),如表7所示。因此,在該實(shí)驗(yàn)條件下,合浦珠母貝糖胺聚糖咀嚼片對SD大鼠經(jīng)口最大耐受劑量(MTD)高于15 g/kg,毒性分級為無毒。

表7 SD大鼠急性經(jīng)口毒性實(shí)驗(yàn)體重結(jié)果Table 7 Results of acute oral toxicity experiments in SD rats on body weight

3 結(jié)論

合浦珠母貝糖胺聚糖咀嚼片的感官品質(zhì)受矯味劑、填充劑、粘合劑及潤滑劑等多種因素的影響,本文得出最佳工藝配方(以質(zhì)量百分比計(jì))為:糖胺聚糖17%,甘露醇25%,微晶纖維素44%,羥丙基甲基纖維素2%、硬脂酸鎂1%,其余為乳糖,在此條件下感官分值為78.5±0.8分,與理論預(yù)測值的相對誤差為1.35%,說明配方工藝具有可行性。質(zhì)量指標(biāo)檢測結(jié)果顯示,制得的白色雙平面圓形片劑形狀完整、表面光滑、色澤均勻一致、口感細(xì)膩,咀嚼片質(zhì)量指標(biāo)檢測結(jié)果均符合《中國藥典》和營養(yǎng)健康食品的相關(guān)要求。急性經(jīng)口毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,咀嚼片對SD大鼠經(jīng)口最大耐受劑量(MTD)高于15 g/kg,毒性分級為無毒。合浦珠母貝糖胺聚糖咀嚼片質(zhì)量安全、無毒副作用,不僅有助于維持人體正常的免疫功能,還有利于解決合浦珠母貝高值化利用的問題,提高低值珍珠貝肉的附加值,促進(jìn)我國珍珠養(yǎng)殖及加工產(chǎn)業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展。