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    坤舒康顆??勾笫竺耷蛉庋磕[形成及其作用機(jī)制

    2017-03-18 18:29:01張忠蘇紅寧劉姣任艷青
    關(guān)鍵詞:棉球肉芽腫脾臟

    張忠++蘇紅寧++劉姣+++任艷青

    [摘要] 目的 觀察坤舒康顆粒對(duì)大鼠棉球肉芽腫的抑制作用,初步探討其作用機(jī)制。 方法 將SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、陽(yáng)性藥地塞米松組(陽(yáng)性組)及坤舒康顆粒高劑量組、中劑量組、低劑量組,每組10只。除假手術(shù)組外,其余大鼠麻醉后,于左前肢腋下植入滅菌棉球20 mg。坤舒康各劑量組大鼠分別灌胃不同劑量坤舒康混懸液(20、10、5 g/kg體重),陽(yáng)性藥組大鼠灌胃地塞米松混懸液(0.08 g/kg體重),連續(xù)給藥14 d。末次給藥后麻醉,取出棉球,干燥稱重;取胸腺、脾臟,稱重,計(jì)算胸腺、脾臟指數(shù);股動(dòng)脈取血,分別檢測(cè)血漿6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)、血栓烷B2(TXB2)及血清白介素-1β(IL-1β)、一氧化氮(NO)水平。 結(jié)果 與假手術(shù)組比較,模型組大鼠的胸腺及脾臟指數(shù)明顯降低(P < 0.01),血漿6-keto-PGF1α、TXB2及血清IL-1β、NO水平均明顯升高(P < 0.01)。與模型組比較,坤舒康顆粒高劑量組棉球肉芽腫重量明顯降低(P < 0.05),胸腺、脾臟指數(shù)則無(wú)明顯變化(P > 0.05),坤舒康顆粒高劑量、中劑量組大鼠血漿6-keto-PGF1α、TXB2及血清IL-1β、NO水平均明顯降低(P < 0.01或P < 0.05)。 結(jié)論 坤舒康顆粒對(duì)慢性肉芽腫性炎癥具有抑制作用,其抗炎作用機(jī)制與抑制炎癥介質(zhì)釋放有關(guān)。

    [關(guān)鍵詞] 坤舒康顆粒;棉球肉芽腫;6-酮前列腺素F1α;血栓素B2;白介素-1β;一氧化氮

    [中圖分類號(hào)] R9 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210(2017)01(b)-0012-04

    Inhibitive effect and mechanism of Kunshukang Granules on the formation of cotton ball granuloma in rats

    ZHANG Zhong1 SU Hongning2 LIU Jiao3 REN Yanqing3 ZHANG Hongzhu3

    1.Dispensary of Traditional Chinese Medicine, Tangshan Qianxi Traditional Chinese Medicine Hospital, Hebei Province, Qianxi 064300, China; 2.Dispensary of Traditional Chinese Medicine, the Forth Hospital of Shijiazhuang, Hebei Province, Shijiazhuang 050000, China; 3. Department of Pharmacology, School of Pharmacy, Hebei College of Traditional Chinese Medicine Hebei Traditional Chinese Medicine Dispensing Granule Engineering Technology Research Center, Hebei Province, Shijiazhuang 050200, China

    [Abstract] Objective To study the inhibitive effect and possible mechanism of Kunshukang (KSK) Granules on cotton ball granuloma model. Methods Sixty SD rats were randomly divided into 6 groups: control group, model group, Dexamethasone group, high dose KSK group, middle dose KSK group and low dose KSK group. All groups except control group rats were implanted 20 mg cotton ball in left armpit. The rats in every dose KSK groups were administrated KSK suspension (20, 10, 5 g/kg), and the rats in Dexamethasone group were administrated Dexamethasone suspension(0.08 g/kg) for 14 days. Then the cotton ball were removed, dried and weighed. All rats were fetched and weighed thymus and spleen, taken blood into analysis 6-keto-PGF1α, TXB2, IL-1β and NO. Results Compared with sham-operated group rats, the thymus and spleen index of model group rats were significantly reduced (P < 0.01), and the level of 6-keto-PGF1α,TXB2, IL-1β and NO of model group rats were significantly raised (P < 0.01). Compared with model group rats, the cotton ball weight of high dose KSK group rats were significantly reduced (P < 0.05), and the level of 6-keto-PGF1α, TXB2, IL-1β and NO of high and middle dose KSK groups were significantly reduced (P < 0.01 or P < 0.05). Conclusion Kunshukang Granules can inhibit cotton ball granuloma by inhibiting the release of inflammatory mediators.

    [Key words] Kunshukang Granules; Cotton ball granuloma; 6-keto-PGF1α; TXB2; IL-1β; NO

    坤舒康顆粒為石家莊第四醫(yī)院制劑,是河北省新版農(nóng)合藥品目錄品種。本品主要由丹參、蒲公英、赤芍等藥組成,具有清熱利濕、解毒活血、化瘀止痛功效,主要用于腹痛帶下、癥瘕積聚、小腹脹滿疼痛等病癥的治療[1]。本品在臨床應(yīng)用多年,顯示其對(duì)慢性盆腔炎的治療效果顯著,但其作用機(jī)制不明[2]。本研究通過(guò)建立大鼠棉球肉芽腫慢性炎癥模型,觀察坤舒康顆粒的抗炎作用,并初步探討其作用機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    SD大鼠,清潔級(jí),雌性,體重180~200 g,由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK(冀)2011-0047,動(dòng)物合格證號(hào)1509046。動(dòng)物在河北中醫(yī)學(xué)院中藥藥理實(shí)驗(yàn)室分籠飼養(yǎng),恒溫恒濕,普通飼料,自由飲水。

    1.2 藥物與試劑

    坤舒康顆粒(石家莊第四醫(yī)院,批號(hào)20150825)。取200 g坤舒康顆粒,加0.5% CMC-Na混勻,定容至100 mL,即得坤舒康顆粒高劑量混懸液(2 g/mL);將坤舒康顆粒高劑量混懸液稀釋1/2,即得坤舒康顆粒中劑量混懸液(1 g/mL);將坤舒康顆粒中劑量混懸液稀釋1/2,即得坤舒康顆粒低劑量混懸液(0.5 g/mL)。慶大霉素注射液(8萬(wàn)U,河南潤(rùn)弘制藥股份有限公司,批號(hào)1506172)。醋酸地塞米松(0.75 mg,天津天藥藥業(yè)股份有限公司,批號(hào)150114)。將醋酸地塞米松片研碎,精密稱取800 mg,加0.5% CMC-Na混勻,定容至100 mL。血栓烷B2(TXB2)放射免疫分析藥盒(北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司),6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)放射免疫分析藥盒(北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司),白介素-1β(IL-1β)放射免疫分析藥盒(北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司),一氧化氮(NO)分析試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

    1.3 實(shí)驗(yàn)器材

    ML204分析天平(瑞士Mettler toledogo公司),DHG-9023A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海合恒儀器設(shè)備有限公司),5417R型離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司),756MC型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司),全自動(dòng)γ放免分析儀(北京金泉水科技有限公司)等。

    1.4 模型建立、分組給藥

    將60只大鼠隨機(jī)分成6組,分別為坤舒康顆粒高劑量組(20 g/kg體重)、中劑量組(10 g/kg體重)、低劑量組(5 g/kg體重),陽(yáng)性藥地塞米松組(陽(yáng)性組)(0.08 g/kg體重),模型組,假手術(shù)組,每組10只。除假手術(shù)組外,其余各組大鼠以10%水合氯醛麻醉后,于左前肢腋下近背部位置以碘酒消毒,切開(kāi)1 cm長(zhǎng)小口。取滅菌棉球約20 mg,另加慶大霉素1 mL,從小切口植入皮下,隨即縫合皮膚,建造慢性炎癥模型。假手術(shù)組大鼠僅施以手術(shù)操作,但不植入棉球。從手術(shù)當(dāng)日開(kāi)始,各組大鼠灌胃給藥或蒸餾水,容量為10 mL/kg體重,連續(xù)14 d。剖開(kāi)胸腔、腹腔,采集胸腺、脾臟,腹主動(dòng)脈取血,用于指標(biāo)的檢測(cè)。

    1.5 指標(biāo)檢測(cè)

    1.5.1 稱取肉芽干重 末次給藥后禁食12 h,對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉,打開(kāi)大鼠原手術(shù)切口,將棉球同周圍結(jié)締組織一起取出,剔除脂肪組織,放置于60℃干燥箱中烘干12 h,稱重。將稱得的重量減去棉球重量即得肉芽干重。

    1.5.2 計(jì)算胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù) 迅速剖開(kāi)大鼠腹腔和胸腔,切取胸腺和脾臟,稱重,并計(jì)算與體重之比,為胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。

    1.5.3 檢測(cè)血液生化指標(biāo) 大鼠股動(dòng)脈取血5~10 mL,置于放有0.1 mL 1%肝素生理鹽水溶液的試管中,制備血漿,檢測(cè)6-keto-PGF1α及TXB2含量;另取股動(dòng)脈血,置于離心管中,靜置,待血液凝固后,將其離心分離血清(3000 r/min,10 min),小心吸出上清,檢測(cè)白介素1β(IL-1β)及一氧化氮(NO)含量。

    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。各組間采用單因素方差分析,均數(shù)間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 坤舒康顆粒對(duì)大鼠棉球肉芽腫的影響

    坤舒康顆粒高劑量組及陽(yáng)性組大鼠的肉芽干重明顯低于模型組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.05)。見(jiàn)表1。

    2.2 坤舒康顆粒對(duì)大鼠胸腺及脾臟指數(shù)的影響

    與假手術(shù)組比較,坤舒康顆粒各劑量組、陽(yáng)性組及模型組大鼠的胸腺、脾臟指數(shù)均顯著降低(P < 0.01)。與模型組比較,陽(yáng)性組的胸腺及脾臟指數(shù)顯著降低(P < 0.01),坤舒康顆粒各劑量組則無(wú)顯著性差異(P > 0.05)。見(jiàn)表2。

    2.3 坤舒康顆粒對(duì)大鼠血漿6-keto-PGF1α及TXB2含量的影響

    與假手術(shù)組比較,模型組大鼠血漿6-keto-PGF1α及TXB2水平顯著升高(P < 0.01)。與模型組比較,坤舒康顆粒高劑量及中劑量組大鼠血漿6-keto-PGF1α含量明顯降低(P < 0.05),陽(yáng)性組大鼠血漿6-keto-PGF1α含量顯著降低(P < 0.01),低劑量組則無(wú)明顯差異(P > 0.05);坤舒康顆粒高劑量組、中劑量組及陽(yáng)性組TXB2含量均顯著降低(P < 0.01),坤舒康顆粒低劑量組則明顯降低(P < 0.05)。見(jiàn)表3。

    2.4 坤舒康顆粒對(duì)大鼠血清IL-1β及NO含量的影響

    與假手術(shù)組比較,模型組大鼠血清IL-1β及NO水平顯著升高(P < 0.01)。與模型組比較,坤舒康顆粒高劑量組及陽(yáng)性組大鼠血清IL-1β含量均顯著降低(P < 0.01),中劑量組明顯降低(P < 0.05),低劑量組則無(wú)明顯差異(P > 0.05);坤舒康顆粒高劑量組、中劑量組及陽(yáng)性組大鼠血清NO含量均顯著降低(P < 0.01),低劑量組也明顯降低(P < 0.05)。見(jiàn)表4。

    3 討論

    慢性盆腔炎是指女性內(nèi)生殖器官及周圍的結(jié)締組織、盆腔腹膜發(fā)生的炎癥,為女性的常見(jiàn)病、多發(fā)病,發(fā)病率高達(dá)30%[3-4]。此病因?yàn)榉磸?fù)發(fā)作、纏綿難愈,可引起盆腔粘連、盆腔痛、異位妊娠、不孕等后遺癥,給患者及家屬帶來(lái)極大痛苦[5]?,F(xiàn)西醫(yī)多以抗生素進(jìn)行治療,此法對(duì)盆腔炎急性發(fā)作期效果較好[6-7]。而慢性盆腔炎發(fā)展過(guò)程中已無(wú)病原體存在,其機(jī)制主要與炎性浸潤(rùn)造成局部組織抗氧化能力下降,代謝減慢,血流障礙有關(guān),患處發(fā)生粘連或水腫[8]。因此抗生素對(duì)慢性盆腔炎療效并不顯著[9]。

    近年來(lái),中醫(yī)藥治療慢性盆腔炎因療效顯著,不良反應(yīng)輕微受到廣泛關(guān)注[9-10]。中醫(yī)認(rèn)為,慢性盆腔炎多屬濕熱之邪侵襲沖、任、帶脈,以致沖任失調(diào)、帶脈失約。濕邪侵襲機(jī)體,多因飲食不節(jié),過(guò)食辛辣肥甘之品,損傷脾土,脾失健運(yùn)之職,水谷精微不能上輸以生血,反聚為濕。濕邪郁久化熱,流注下焦,損傷任、帶二脈而為帶下病。濕熱內(nèi)蘊(yùn),最易阻遏氣機(jī)。氣為血之帥,能夠行血,氣機(jī)不利,不能運(yùn)血暢行,以致血行受阻。婦人以血為本,氣血調(diào)和則五臟安和,經(jīng)脈通暢,沖任充盈。若氣滯血瘀,則沖任胞脈不暢,經(jīng)血滯于胞宮?;驖駸嶂扒址赴麑m血海,破血妄行,沖任被擾,則行經(jīng)日久不止,造成月經(jīng)不調(diào)。濕邪停聚日久,凝聚而成痰飲,痰飲、血瘀、氣滯蘊(yùn)結(jié)胞宮而成癥瘕,沖任受阻,不通則痛。治療多以用清熱、祛濕、理氣、活血為法[11]。石家莊市第四醫(yī)院院內(nèi)制劑坤舒康顆粒,是由蒲公英、當(dāng)歸、赤芍、丹參、川芎、醋三棱、醋莪術(shù)、黃芩和澤瀉組方而成。其中,蒲公英清熱解毒,消腫散結(jié);黃芩清熱燥濕,瀉火解毒;澤瀉利水消腫,滲濕,泄熱;三藥共用以清下焦?jié)駸?。?dāng)歸補(bǔ)血活血,通經(jīng)活絡(luò);赤芍能清血分實(shí)熱,散瘀血留滯;丹參活血調(diào)經(jīng),祛瘀止痛;川芎活血行氣;四藥同用活血補(bǔ)血兼用。三棱為血中氣藥長(zhǎng)于破血中之氣,莪術(shù)為氣中血藥,善破氣中止血;二藥伍用,氣血同治,活血化瘀,行氣止痛,化積消癥。全方具有清熱利濕、解毒活血、化瘀止痛功效,臨床主要用于慢性盆腔炎的治療,但其作用機(jī)制不清[12-13]?,F(xiàn)代研究顯示,坤舒康顆粒組方中包含的清熱藥、活血化瘀藥、祛風(fēng)濕藥均有抗炎作用,推測(cè)本藥治療慢性盆腔炎的作用應(yīng)該與抑制慢性炎癥反應(yīng)過(guò)程有關(guān)[14-16]。因此,本實(shí)驗(yàn)采用大鼠棉球肉芽腫模型,觀察坤舒康顆粒的抗炎作用,并分析其可能的機(jī)制。

    棉球肉芽腫為常用慢性炎癥模型,是在局部植入異物(棉球)連續(xù)造成刺激,引起遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng),形成幼稚的結(jié)締組織即肉芽腫[17]。本研究通過(guò)觀察藥物對(duì)肉芽重量的影響,以判斷其抑制慢性炎癥反應(yīng)的效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,坤舒康顆粒高劑量組大鼠棉球肉芽腫重量明顯低于模型組,可見(jiàn)本藥有較好的抑制慢性炎癥作用。

    在慢性炎癥反應(yīng)的過(guò)程中,存在著炎癥細(xì)胞和免疫細(xì)胞功能的紊亂[18]。其中,IL-β及NO的合成和釋放均會(huì)出現(xiàn)異常。IL-β能夠促進(jìn)炎癥細(xì)胞的趨化和黏附,吸引并活化中性粒細(xì)胞滲出到炎癥區(qū),還能夠增加血管壁通透性、刺激血小板活化因子和前列腺素類物質(zhì)的釋放[19]。NO是炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答中關(guān)鍵性的調(diào)節(jié)物質(zhì),能夠影響炎癥反應(yīng)的進(jìn)程。NO通過(guò)促使白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生黏聚,產(chǎn)生過(guò)氧化物造成細(xì)胞損傷,擴(kuò)張血管平滑肌,使血管通透性增加,造成組織水腫,從而加重炎癥反應(yīng)。TXA2和PGE2均為花生四烯酸(AA)的代謝產(chǎn)物,同屬前列腺素類,是重要的炎癥因子。其中PGE2能夠舒張小血管,增加微血管通透性,引起水腫;PGE2還是一種重要的止痛物質(zhì),是引起炎性疼痛的主要原因。TXA2除能引起炎癥反應(yīng)外,還能促進(jìn)血小板聚集,加重血管損傷。但TXA2和PGE2均不穩(wěn)定,半衰期很短,極易代謝為更為穩(wěn)定的TXB2和6-keto-PGF1α[20]。在本研究中,所復(fù)制的棉球肉芽腫大鼠模型血漿TXB2、6-keto-PGF1α及血清IL-β、NO水平明顯升高,符合慢性炎癥反應(yīng)的病理改變,表示造模成功。

    本研究結(jié)果顯示,坤舒康顆粒各劑量組大鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)與模型組相比,無(wú)顯著性差異,而陽(yáng)性組則顯著降低,表示坤舒康顆粒應(yīng)用14 d對(duì)胸腺、脾臟這兩個(gè)免疫器官?zèng)]有顯著影響,初步證實(shí)本藥的安全性高于地塞米松。以坤舒康顆粒進(jìn)行治療,可使棉球肉芽腫模型大鼠血漿TXB2、6-keto-PGF1α及血清IL-β、NO水平明顯降低,證實(shí)該藥的抗炎作用機(jī)制與抑制炎癥介質(zhì)釋放有關(guān)。

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    (收稿日期:2016-09-27 本文編輯:王紅雙)

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