羅雪,李然,阿比克哈莫,湯承,岳華
(西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,四川 成都 610041)
腹瀉是犢牛的常發(fā)疾病,其既可由細(xì)菌、病毒、寄生蟲等引起,也可由營養(yǎng)因素、環(huán)境因素引發(fā),一般病原微生物感染是引發(fā)犢牛腹瀉的主要原因。腹瀉嚴(yán)重影響犢牛成活率,幸存犢牛的生長(zhǎng)發(fā)育和生產(chǎn)性能也會(huì)受到影響。
某養(yǎng)殖戶的4頭犢牦牛發(fā)生以急性腹瀉為特征的疾病。病牛精神沉郁、被毛粗糙、呼吸短促,水樣腹瀉,糞便呈灰白色,其中3頭牛的糞便混有鮮血。
2.1 糞便處理及核酸提取 采集病牛糞便按1∶5(V/V)加入生理鹽水制成懸液,-80℃反復(fù)凍融3次,5000r/min離心10min,按照和酚-氯仿法提取DNA,按照Trizol法提取RNA,并參照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明合成cDNA。
2.2 PCR檢測(cè) 檢測(cè)牛輪狀病毒(BRV)、牛冠狀病毒(BCV)、牛病毒性腹瀉/黏膜病病毒(BVDV)、大腸桿菌K99、沙門菌的特異性PCR,以糞便DNA和cDNA為模板,參照相關(guān)文獻(xiàn)方法進(jìn)行PCR擴(kuò)增和凝膠電泳鑒定。
PCR從4份糞便樣本中擴(kuò)增出4個(gè)BRV的特異條帶和2個(gè)BCV的特異性條帶,與陽性對(duì)照條帶大小一致。未檢出BVDV、大腸桿菌K99和沙門菌。
根據(jù)臨床癥狀,結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),確診犢牦牛腹瀉是由BRV、BCV混合感染所致。
細(xì)菌和病毒感染是導(dǎo)致犢牛腹瀉的常見原因,臨床上常見兩種及兩種以上的病原混合感染。本實(shí)驗(yàn)對(duì)患牛糞便中BRV、BCV、BVDV、大腸桿菌K99、沙門菌5種常見病原進(jìn)行了檢測(cè),結(jié)果顯示牦牛腹瀉由BRV、BCV混合感染所致。
BRV是常見的導(dǎo)致犢牛腹瀉的病原,BCV也是引起犢牛腹瀉的主要病原,且可引起成年牛冬痢和呼吸道疾病。