慢性乙型肝炎病毒攜帶者血清GP73水平與肝組織病理學(xué)變化的關(guān)系研究*

周志凌，印倩

2016年我國1～59歲人群HBsAg攜帶率為7.18%[1-3]。高爾基體蛋白 73（golgiprotein-73，GP73）是Ⅱ型高爾基體跨膜蛋白，被認為是肝細胞癌（HCC）潛在的血清標志物[4]。近年來，研究發(fā)現(xiàn)GP73蛋白在急慢性肝病患者血清水平升高，并與慢性肝臟疾病的病情進展有關(guān)[5-8]。本研究檢測了慢性HBV感染者血清GP73水平，旨在探討血清GP73水平對患者肝組織炎癥損傷的預(yù)測價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2014年1月～2016年12月在我院治療的慢性HBV感染者450例，其中慢性HBV攜帶者150例，男性105例，女性45例，年齡為21～62歲，平均年齡（36.5±9.8）歲；慢性乙型肝炎患者150例，男性109例，女性41例，年齡25～68歲，平均年齡（36.0±8.0）歲；乙型肝炎肝硬化患者150例（失代償期90例，代償期60例），男性113例，女性 37例，年齡 34～70歲，平均年齡（40.1±10.3）歲；符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版)》的診斷標準[9]。納入患者，1）血清HBsAg陽性＞6個月；2）血清 HBV DNA＞1×104copies/ml；3）在 1 年內(nèi)連續(xù)隨訪慢性HBV攜帶者3次以上，肝功能正常；4）失代償期肝硬化患者Child-Pugh評分為B級或C級，代償期患者Child-Pugh評分為A級。排除標準：1）合并妊娠或哺乳期婦女；2）有嚴重的心、腎和腦疾?。?）自身免疫學(xué)肝??；4)藥物或酒精性肝?。?）入組前6個月內(nèi)應(yīng)用過核苷（酸）類似物或其他免疫調(diào)節(jié)劑。另選同期在我院體檢的健康人50例作為對照，男性35例，女性15例，年齡26～65歲，平均年齡（35.1±6.9）歲。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準，患者均簽署知情同意書。

1.2 血清GP73水平測定采用ELISA法檢測[10]（試劑盒購于上海江萊生物科技有限公司，美國伯騰儀器有限公司Synergy2酶標儀），在450 nm波長下讀取OD值，繪制標準曲線，計算GP73水平。

1.3 肝活檢 使用16 G穿刺針（美國巴德公司），進行肝組織活檢，標本長度至少在1.5 cm，標本經(jīng)5%甲醛固定，石蠟包埋，使用切片機（德國萊卡公司）切片，行蘇木精-伊紅染色。在顯微鏡（奧林巴斯BX50）下觀察至少6個匯管區(qū)。采用Metavir評分對肝臟炎癥和纖維化程度進行評價。肝臟炎癥活動度分為5級：即G0：無炎癥活動；G1：輕度炎癥活動；G2：中度炎癥活動；G3：中 /重度炎癥活動；G4：重度炎癥活動；肝纖維化分為4級：即S0：纖維化形成；S1：輕度纖維化；S2：纖維化超過匯管區(qū)；S3：橋接纖維化；S4：肝硬化。炎癥活動度分級＞G2和肝纖維化分期＞S2，提示肝組織炎癥或纖維化程度顯著[11，12]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料以%表示，組間比較采用x2檢驗。計量資料以（±s）表示，組間比較采用方差分析。采用Logistic回歸分析影響肝組織炎癥和纖維化的因素，P＜0.05被認為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 各組慢性HBV感染者生化、血清和病毒學(xué)指標（%，±s）的比較

與HBV攜帶者比，①P<0.05；與慢性乙型肝炎比，②P<0.05

例數(shù)HBV攜帶者 150乙型肝炎 150肝硬化 150 TBIL（μmol/L）12.5±4.2 15.6±7.0 98.4±36.8①②ALB（g/L）43.2±2.1 37.5±5.1①32.9±9.2①②ALT（IU/L）25.2±5.1 321±80.3①86.2±23.5①②AST（IU/L）24.1±6.8 235±101.5①106.5±86.7①②HBeAg陽性121（80.7）99（66.0）①41（27.3）①②HBV DNA（×104copies/ml）8.2±0.5 7.2±0.4①5.3±0.7①②

2 結(jié)果

2.1 各組慢性HBV感染者生化、血清和病毒學(xué)指標的比較 三組生化、血清學(xué)和病毒學(xué)指標的比較具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05，表1）。

2.2 各組血清GP73水平比較 慢性HBV攜帶者血清GP73水平為（46.5±7.8）ng/ml，慢性乙型肝炎組為（90.2±10.9）ng/ml，乙型肝炎肝硬化組為（231.6±20.1） ng/ml，均顯著高于健康人組的（36.7±6.6） ng/ml，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），肝硬化患者血清GP73水平也顯著高于慢性乙型肝炎或HBV攜帶者（P＜0.05）。

2.3 不同肝組織炎癥分級和纖維化分期的慢性HBV攜帶者血清GP73水平比較 經(jīng)肝組織檢查，150例慢性HBV攜帶者肝內(nèi)炎癥活動度分級和纖維化分期情況見表2。肝組織炎癥活動度分級和纖維化分期嚴重的患者血清GP73水平顯著升高，與分級或分期輕的人群比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=16.8，F(xiàn)=19.2，P 均＜0.05）。

2.4 肝組織顯著炎癥和顯著纖維化的危險因素分析 經(jīng)Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，血清GP73水平升高是肝組織顯著炎癥和纖維化的高危因素（P均＜ 0.05，表3）。

表2 不同炎癥分級和纖維化分期的慢性HBV攜帶者血清GP73(ng/ml，±s)比較

表2 不同炎癥分級和纖維化分期的慢性HBV攜帶者血清GP73(ng/ml，±s)比較

與 G0～G1或 S0～S1組比，①P＜0.05；與 G2或 S2組比，②P＜0.05

例數(shù) GP73 G0～G1 105 45.2±12.8 G2 30 63.8±15.0①G3～G4 15 83.7±20.1①②S0～S1 98 45.1±16.8 S2 30 67.3±16.4③S3～S4 22 72.0±18.4④⑤

表3 肝組織顯著炎癥和纖維化的危險因素分析

3 討論

在慢性HBV感染者，血清ALT可表現(xiàn)為正常，但是部分患者可能已經(jīng)出現(xiàn)了肝臟炎癥性損傷，因此血清ALT不能完全反映肝組織炎癥和纖維化程度[7，13-15]。GP73是Ⅱ型高爾基體膜蛋白。既往研究發(fā)現(xiàn)，血清GP73水平在各種病毒性或非病毒性良性肝臟疾病患者顯著升高[5]。Block et al[16]在2005年首次指出GP73與慢性乙型肝炎的肝組織病理學(xué)損傷進展密切相關(guān)。目前，關(guān)于GP73的研究多集中在肝細胞癌，如肝細胞癌患者外周血GP73水平和肝組織GP73表達明顯增高，在肝癌的診斷方面有較高的準確性[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，血清GP73水平與慢性HBV攜帶者肝組織炎癥分級和纖維化分期有關(guān)，或可作為預(yù)測慢性HBV攜帶者肝組織炎癥和纖維化的潛在標志物。

本研究觀察了慢性HBV攜帶者肝組織炎癥和纖維化程度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，G0～G1患者占70.0%，G2以上占30.0%；S0?S1期患者占65.3%，S2期以上占34.7%。本研究還提示，盡管部份慢性HBV攜帶者血清ALT水平正常，但是可能已經(jīng)出現(xiàn)了肝組織炎癥損傷和纖維化。慢性乙型肝炎防治指南[18]指出，盡管慢性HBV攜帶者血清ALT水平正常，也應(yīng)進行肝穿刺活檢，否則將錯過抗病毒治療的時機。但是，在抗病毒治療前對所有人群進行肝穿刺是不可行的。因此，臨床上需要可以反映肝組織炎癥損傷的其他生物學(xué)標記物，以便篩選高危人群。本研究發(fā)現(xiàn)，血清GP73水平與慢性HBV攜帶者肝組織炎癥和纖維化有關(guān)，經(jīng)Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，血清GP73水平是預(yù)測肝組織炎癥和纖維化的獨立危險因素。結(jié)果表明，血清GP73檢測是一個比血清ALT更為敏感的能反映肝組織炎癥和纖維化的生物標記物，并可以彌補慢性HBV攜帶者僅檢測血清ALT的不足。我們認為，應(yīng)對慢性HBV攜帶者進行肝穿刺活檢，早期發(fā)現(xiàn)病情，以便及時地給予抗病毒治療，這樣可以避免因血清ALT水平正常而延誤了治療時機。

本研究還發(fā)現(xiàn)，隨著慢性HBV感染病程的進展，肝組織炎癥和纖維化程度加重，血清GP73水平逐漸升高，這可能是一個很值得關(guān)注的現(xiàn)象。在150例慢性HBV攜帶者中，血清GP73水平隨著肝組織炎癥活動分級和纖維化分期嚴重而升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。血清GP73水平升高預(yù)示著肝組織炎癥活動分級和纖維化分期嚴重。本研究結(jié)果與Zheng et al[19]研究一致，該研究小組發(fā)現(xiàn)在急慢性肝病患者，血清GP73水平升高與肝組織炎癥和纖維化程度有關(guān)。在無明顯肝組織炎癥（≤G1）和纖維化（≤S1）的患者，血清GP73水平較低，但是一旦出現(xiàn)肝組織炎癥或纖維化，肝細胞釋放GP73蛋白入血增多，導(dǎo)致血清GP73水平升高。既往研究發(fā)現(xiàn)，慢性肝炎病毒，特別是HBV感染患者血清GP73水平會顯著升高，其升高的程度與肝細胞壞死的嚴重程度相關(guān)[20-22]。

綜上所述，血清GP73水平隨著慢性HBV攜帶者肝組織炎癥分級和纖維化分期加重而升高。臨床上，有部分慢性HBV攜帶者血清ALT水平在正常范圍內(nèi)，但是肝組織卻已經(jīng)發(fā)生了明顯的炎癥和纖維化，若僅根據(jù)血清ALT水平作出判斷，將延誤抗病毒治療的時機。本研究結(jié)果顯示，血清GP73水平似乎比血清ALT能更敏感地反映肝組織炎癥和纖維化程度，是否可作為預(yù)測慢性HBV攜帶者肝組織炎癥和纖維化的潛在標志物，還需要進一步研究。