周期療法對乳腺增生模型大鼠性激素的影響

張小花，申劍，武權(quán)生*，蘇珊珊

(1.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 730000；2.山東省淄博市桓臺縣中醫(yī)院，山東 淄博 256400)

乳腺增生病(Hyperplasin of Mammary Gland，HMG)是指乳腺導(dǎo)管、乳腺小葉、腺泡上皮、纖維組織的單項或多項良性增生。以周期性加重的乳房脹痛和多發(fā)性乳房腫塊為主要臨床特點。國內(nèi)報道其發(fā)病率在10%左右，且多發(fā)于30～50歲婦女，男子亦有發(fā)生。本病原因迄今尚未明確，主要認(rèn)為與人體的內(nèi)分泌功能紊亂，特別是與婦女的卵巢功能失調(diào)有關(guān)。

武權(quán)生教授是甘肅省名中醫(yī)，博士研究生導(dǎo)師，在長期的醫(yī)療實踐中積累了豐富的治療乳腺增生病經(jīng)驗，認(rèn)為乳腺增生病主要為肝腎失養(yǎng)、肝郁氣滯所致，癥狀伴隨月經(jīng)周期性發(fā)作，治療時應(yīng)遵循月經(jīng)周期中氣血陰陽變化的不同而遣藥組方，臨床常以疏肝散結(jié)、補(bǔ)腎柔肝周期療法治療[1]，療效頗佳。為了探討武權(quán)生教授治療乳腺增生病經(jīng)驗方的作用機(jī)制，特進(jìn)行了本次實驗，現(xiàn)報道如下。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

甘肅中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心SPF級實驗室選購SPF級健康雌性SD大鼠90只，3～4月齡、體質(zhì)量(200±20)g，批號SYXK(甘)2011-0001-62001000000069。

1.2 主要試劑、藥品

苯甲酸雌二醇注射液(杭州動物藥品廠，批號140429)；生理鹽水(辰欣藥業(yè)股份有限公司，批號1206191101)；黃體酮注射液(浙江仙琚制藥股份有限公司，批號130702)；三苯氧胺(揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號14042911)；逍遙丸(蘭州佛慈制藥股份有限公司，批號14A28)。

中藥(I號方：柴胡、赤芍、枳實、川楝子、夏枯草、白蒺藜、全瓜蔞、鱉甲、王不留行、當(dāng)歸、生地黃、海藻、昆布。II號方：柴胡、醋香附、元胡、王不留行、川楝子、夏枯草、當(dāng)歸、杭白芍、海藻、昆布、何首烏、菟絲子、肉蓯蓉、巴戟天、知母、黃柏)均購自甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥房。

P(批號20130610)、E2(批號20130611)及PRL ELISA分析藥盒(批號20130530)(北京市福瑞生物工程公司)。

2 實驗方法

從90只大鼠中隨機(jī)抽取20只，為空白組，右下肢肌肉注射生理鹽水0.2 ml/(kg·d)，共30天,其余70只大鼠進(jìn)行造模[2]。具體方法:大鼠右下肢肌注苯甲酸雌二醇注射液0.5 mg/(kg·d),25天，再肌注黃體酮注射液4.5 mg/(kg·d),5天。實驗第31天隨機(jī)從造模組和空白組分別抽取10只大鼠，脫臼處死大鼠后，剜下其第3對的左側(cè)乳房，觀察組織形態(tài)學(xué)變化，判斷造模是否成功。待造模成功后將其余60只大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為模型組、逍遙丸組、三苯氧胺組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組。空白組和模型組給予生理鹽水0.2 ml/(kg·d)灌胃，其余5組分別灌服不同藥物，藥物劑量根據(jù)人與動物每公斤體質(zhì)量劑量換算系數(shù)表換算。逍遙丸組灌服逍遙丸混懸液0.8 g/(kg·d)；三苯氧胺組灌服三苯氧胺水溶劑3.6 mg/(kg·d)；中藥組先灌服I號方10天，低、中、高劑量組分別為11.1 g/(kg·d)、22.2 g/(kg·d)、44.4 g/(kg·d)，后灌服Ⅱ號方20天，低、中、高劑量組分別為9.6 g/(kg·d)、19.2 g/(kg·d)、38.4 g/(kg·d)。

于造模后31天、灌服藥物30天后，測量大鼠第3對乳房左側(cè)乳頭的直徑。末次灌胃24 h后，大鼠腹腔麻醉，股動脈采血，室溫靜置2 h后3 000 r/min離心3 min，吸取上部取血清，-20℃保存待測。隨后脫臼處死大鼠。

實驗期間所有實驗動物分籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食飲水。

3 統(tǒng)計學(xué)方法

4 結(jié)果

4.1 各組大鼠一般情況比較

于造模第12日起，各造模組大鼠出現(xiàn)喜聚集、毛發(fā)粗糙、具有攻擊性、乳房色紅，造模結(jié)束后出現(xiàn)精神不振、易激惹、乳房色紅、腫大；用藥后大鼠有不同程度的好轉(zhuǎn)，活動增加，易激惹、乳房紅腫現(xiàn)象基本消失。各造模組間表現(xiàn)無明顯差異。

4.2 用藥前后乳頭直徑的變化情況比較

造模31天后，各造模組大鼠的乳頭直徑與空白組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，各造模組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。用藥30天后大鼠的乳頭直徑縮小，與造模后相比較除空白組、模型組外，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；中藥高劑量組與空白組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，各用藥組與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。說明造模成功后大鼠乳頭直徑增大，用藥可使增大的乳頭縮小，尤其是在序貫應(yīng)用Ⅰ號方、Ⅱ號方后，其中又以中藥高劑量組作用最明顯(與空白組比較,P>0.05)。

表1 用藥前后各組大鼠乳頭直徑的變化情況比較

注：與空白組比較，#P<0.05；與模型組比較，*P<0.05；與本組造模后相比較，△P<0.05

4.3 各組大鼠血清E2、P和PRL的變化情況比較

從表2可以看出，模型組大鼠血清E2升高，與空白組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。與模型組相比較，各用藥組大鼠血清E2下降，其中中藥中劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，三苯氧胺組及中藥低、中、高劑量組與空白組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，中藥中劑量組與逍遙丸組相比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，說明HMG模型大鼠血清E2升高，灌服藥物后可使HMG模型大鼠升高的血清E2回落。

表2 血清激素含量變化情況比較

注：與空白組比較，#P<0.05；與模型組比較，*P<0.05；與逍遙丸組比較，△P<0.05

模型組大鼠血清P下降，與空白組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。與模型組比較，各組大鼠血清P升高，以逍遙丸組最明顯，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，與空白組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，說明灌服逍遙丸、三苯氧胺及低、中劑量中藥后可使HMG模型大鼠血清P升高。

模型組大鼠血清PRL升高，與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。與模型組相比較，逍遙丸組和中藥低、中、高劑量組血清PRL下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而逍遙丸組、低劑量組與空白組比無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，說明灌服逍遙丸及中藥低、中、高劑量可使HMG模型大鼠血清PRL下降。

5 討論

HMG的發(fā)病可以是從青春期至絕經(jīng)期的任一年齡，其中以25～45歲為多見，35～45歲為高峰年齡，約占全部乳腺疾病的70%以上。中醫(yī)稱其為“乳癖”，沖任失調(diào)、肝郁腎虛為其發(fā)病之本，血瘀氣滯痰凝為其發(fā)病之標(biāo)，病屬本虛標(biāo)實，與肝脾腎三臟密切相關(guān)[3-4]。通過多年臨床觀察和總結(jié)，武權(quán)生教授依據(jù)月經(jīng)節(jié)律中沖任、胞宮氣血由滿盈、溢瀉至空虛的變化和本病有隨月經(jīng)周期發(fā)作的特點,從而分段周期論治，強(qiáng)調(diào)“經(jīng)前勿補(bǔ)，經(jīng)后勿瀉”的原則，經(jīng)前治標(biāo)，經(jīng)后固本，常見顯效[1]。因此，針對乳腺增生病在月經(jīng)的不同時期擬定了經(jīng)后用II號方補(bǔ)腎柔肝、調(diào)補(bǔ)沖任，經(jīng)前及經(jīng)期I號方疏肝清熱、軟堅散結(jié)。

P、E2、PRL對女性乳腺的發(fā)育發(fā)揮了重要作用，E2促進(jìn)乳腺腺管增生，P促進(jìn)乳腺腺泡發(fā)育，PRL促進(jìn)乳腺腺泡、腺管的發(fā)育。但是，E2過高或PRL升高，P與雄激素分泌不足，使乳腺組織長期過度刺激導(dǎo)致HMG的發(fā)生。徐巍等發(fā)現(xiàn)，乳腺增生患者的血清雌激素水平明顯升高，孕激素水平顯著下降[5]；邵淑麗[6]等研究發(fā)現(xiàn)，與正常組比較，絕經(jīng)前HMG患者血清催乳素(Prolactin，PRL)明顯增高。本次實驗中大鼠造模后血清PRL、E2升高，P降低，與文獻(xiàn)報道相一致[7]。而在對HMG模型大鼠灌服三苯氧胺、逍遙丸及中藥I號方、II號方后，出現(xiàn)不同程度的血清PRL與E2降低、P升高，其中中藥中劑量組血清E2和中藥低、中、高劑量組血清PRL與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，提示中藥I號方、II號方可通過調(diào)節(jié)血清PRL、E2、P水平，從而達(dá)到治療HMG的目的。