中藥藥材真?zhèn)舞b定中半顯微狀鑒定應(yīng)用分析

李華麗　王小龍　葉曉亞

【摘 要】 目的：[HTSS]觀察半顯微狀鑒定對(duì)中藥藥材真?zhèn)蔚蔫b定與區(qū)別效果，分析半顯微狀鑒定對(duì)中藥區(qū)分的應(yīng)用價(jià)值。[HTH]方法：[HTSS]分別選取平頂山市中醫(yī)院外觀相似、無(wú)法用肉眼區(qū)別的藥材2組，分別作為A組和B組，其中A組選擇虞美人、罌粟，B組選擇鶴虱、蛇床子，上述藥物在藥性、配伍方面均存在較大差異，但外觀相似，需嚴(yán)格區(qū)分避免混用，分別對(duì)兩組進(jìn)行半顯微狀鑒定與掃描儀鑒定，分別將兩種鑒定方法所得結(jié)果進(jìn)行記錄和對(duì)比，并計(jì)算兩種鑒定方法的準(zhǔn)確率差異，分析兩種鑒定方法的應(yīng)用價(jià)值。[HTH]結(jié)果：[HTSS]掃描儀鑒定準(zhǔn)確率A組60.15%，B組67.96%，半顯微狀鑒定準(zhǔn)確率A組92.96%，B組93.75%，藥品整體鑒定準(zhǔn)確率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。[HTH]結(jié)論：[HTSS]中藥藥材由于性狀用法有較大差異，在用藥前需要明確藥材種類，才能夠得做到安全用藥，半顯微狀鑒定能夠有效觀察到藥物的區(qū)別，且操作簡(jiǎn)單值得臨床應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】 半顯微狀鑒定；中藥藥材；掃描儀鑒定；鑒定準(zhǔn)確率

【中圖分類號(hào)】R927 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2018）10-0128-03

中藥是我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的主要內(nèi)容之一，中藥藥材的制備、使用不斷傳承，在臨床上得到廣泛的應(yīng)用。但由于中藥藥材種類繁多，形態(tài)相似，對(duì)藥品的分類僅靠肉眼無(wú)法有效區(qū)分，且一些植物根莖等部位與中藥相似，出現(xiàn)制假販假的可能性高，對(duì)臨床用藥安全產(chǎn)生較大的威脅[1]。為減少中藥應(yīng)用風(fēng)險(xiǎn)，臨床從購(gòu)藥、用藥過(guò)程中把握中藥的用藥安全，對(duì)容易出現(xiàn)混淆、假冒的中藥藥品進(jìn)行鑒別。我國(guó)傳統(tǒng)中藥鑒別方式是利用放大鏡觀察，區(qū)別藥物之間的細(xì)微差異，挑選出假冒藥品。但放大鏡觀察對(duì)檢驗(yàn)員的檢驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)要求較高，無(wú)法在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)廣泛推廣[2]。隨著臨床檢驗(yàn)技術(shù)的不斷提高，掃描儀鑒定逐步應(yīng)用在中藥的鑒別當(dāng)中，作為技術(shù)性鑒別手段，掃描儀鑒定的應(yīng)用效果較放大鏡觀察的效果明顯改善。顯微技術(shù)的興起與發(fā)展，我國(guó)認(rèn)識(shí)到顯微技術(shù)對(duì)中藥外觀、成分鑒別的有利因素，將顯微技術(shù)與掃描技術(shù)向結(jié)合，應(yīng)用在中藥藥材真?zhèn)舞b定當(dāng)中[3]。目前臨床較少使用放大鏡檢驗(yàn)手段，多以技術(shù)性檢驗(yàn)為主。筆者對(duì)所選兩組易混淆藥物的檢驗(yàn)資料進(jìn)行對(duì)比，分析半顯微狀鑒定與掃描儀鑒定的效果差異，分析半顯微狀鑒定在中藥藥材真?zhèn)舞b定中的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2016年1月至2017年12月的部分中藥藥材，包括虞美人種子、罌粟、鶴虱、蛇床子。將虞美人種子、罌粟作為A組，鶴虱、蛇床子作為B組，兩組各128粒，各組中兩種藥材均占半數(shù)，各64粒。另選取中醫(yī)院及我所的中藥藥劑師12名，男8名，女4名，年齡31～52歲，平均年齡（46.31±5.69）歲，工作時(shí)間8～24年，平均工作時(shí)間（18.63±5.38）年，兩組標(biāo)本均為雙盲法收集和檢驗(yàn)，避免人為因素影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，兩組一般資料無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。

納入標(biāo)準(zhǔn)： ①均為中醫(yī)院正規(guī)渠道購(gòu)買(mǎi)藥材；②藥劑師自愿參與實(shí)驗(yàn)并簽署同意書(shū)；③使用儀器均為我所現(xiàn)有器材。

排除標(biāo)準(zhǔn) ： ①排除變質(zhì)藥材；②藥劑師均具有國(guó)家承認(rèn)資質(zhì)；③排除實(shí)驗(yàn)中途調(diào)崗、轉(zhuǎn)院藥劑師。

1.2 方法

1.2.1 藥物選擇 A組中虞美人種子與罌粟均存在相同外形，且制備后表面紋路相似。B組鶴虱、蛇床子的外形相似且均存在羽邊，容易造成混淆，因此選擇上述四種藥物作為實(shí)驗(yàn)藥材，各選擇虞美人種子、罌粟、鶴虱、蛇床子64粒，將虞美人種子與罌粟混合，鶴虱與蛇床子混合，混合后作為A、B組分別進(jìn)行檢驗(yàn)和區(qū)別。

1.2.2 檢驗(yàn)方法 分別對(duì)A、B兩組進(jìn)行掃描儀鑒定法與半顯微狀鑒定法對(duì)藥材進(jìn)行鑒定。掃描儀鑒定方法是將兩組分別放置在掃描儀的掃描臺(tái)上，利用掃描儀對(duì)藥材利用貝靈巧DR-2020型掃描儀進(jìn)行鑒定，用電腦連接掃描儀，并將藥品放在掃描儀的掃描位置上，利用電腦操作取景框，攝取藥材的部分位置，儀器色彩選擇24bit，像素選擇2400，在拍攝時(shí)盡量拍攝藥材的部分位置，避免照片過(guò)大影響處理速度。根據(jù)藥材攝片的亮度、顏色選擇是否重新攝片，對(duì)亮度滿意的藥材照片進(jìn)行處理，直到觀察到藥材的細(xì)微差異。通過(guò)掃描圖像對(duì)A、B兩組的不同藥材進(jìn)行區(qū)分，觀察和記錄鑒定準(zhǔn)確率。

半顯微鑒定法則利用體視顯微鏡與電子目鏡進(jìn)行觀察，將電子目鏡與電腦連接，在電腦上操作調(diào)整至可以攝片，將藥物放在體視顯微鏡下，利用電腦攝片，并截取圖片，通過(guò)調(diào)節(jié)亮度、對(duì)比度、色度增加圖像的清晰度，待清晰度良好后保存圖片至電腦，在電腦上打開(kāi)圖像進(jìn)行藥物外觀的觀察，直至發(fā)現(xiàn)藥物區(qū)別，并將藥物編號(hào)、分類保存。進(jìn)行下一項(xiàng)藥物鑒定，則重復(fù)攝片步驟。

1.2.3 鑒定方法 由12名藥劑師對(duì)兩組藥物分別進(jìn)行觀察和區(qū)分，并最終對(duì)鑒定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)一后，分別計(jì)算掃描儀鑒定與半顯微狀鑒定的結(jié)果差異。

1.3 觀察指標(biāo) 對(duì)比掃描儀鑒定、半顯微狀鑒定的鑒定準(zhǔn)確率差異，并詳細(xì)區(qū)分兩種檢驗(yàn)鑒定方法下A、B兩組觀察效果的差異。鑒定準(zhǔn)確率=準(zhǔn)確鑒定粒數(shù)/總數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本次研究均由SPSS17.0軟件包處理分析數(shù)據(jù)資料，計(jì)量資料用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x[TX-*3]±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組鑒定準(zhǔn)確率比較 掃描儀鑒定準(zhǔn)確率A組平均60.15%，B組平均67.96%，半顯微狀鑒定準(zhǔn)確率A組平均92.96%，B組平均93.75%，藥品整體鑒定準(zhǔn)確率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.2 不同檢驗(yàn)方法下A、B兩組藥材檢驗(yàn)差異分析 掃描儀鑒定方法下A組虞美人種子、罌粟的檢查結(jié)果與半顯微狀鑒定有明顯差異。利用掃描儀檢驗(yàn)攝片的圖片分辨率相對(duì)較差，無(wú)法完全對(duì)比虞美人種子與罌粟見(jiàn)的區(qū)別，兩種藥材的差異無(wú)法完全通過(guò)掃描儀完全鑒別，存在一定的鑒定差異，利用半顯微鑒定方法，能夠明顯觀察到虞美人的種子略長(zhǎng)、顏色呈褐暗色，并且能夠觀察到淺網(wǎng)狀表皮。罌粟則外形相對(duì)較圓，具有較亮的色澤，且有深窩狀表面，二者通過(guò)半顯微鑒定法能夠得到顯著的區(qū)別。B組鶴虱、蛇床子利用掃描儀鑒定方法進(jìn)行觀察，對(duì)兩種藥物的表面差異觀察相對(duì)準(zhǔn)確，但無(wú)法完全有效區(qū)別兩種藥材，對(duì)出現(xiàn)外觀破損的B組藥物的混淆性較高，利用半顯微鑒定法，則能夠明顯觀察到鶴虱存在棘狀邊緣，蛇床子的邊緣則是光滑的，且呈現(xiàn)出脊?fàn)钸吘?，即便B組藥物出現(xiàn)破損，也能夠明顯觀察到蛇床子脊?fàn)钸吘?，?duì)兩種藥材的區(qū)分效果明顯。

3 討論

中藥藥材的鑒定與鑒別，一直是中藥臨床應(yīng)用的關(guān)鍵問(wèn)題。自古我國(guó)就存在由于用藥安全性差的問(wèn)題，主要由于中藥的藥材種類繁多、易混淆。多數(shù)外形相似的中藥存在藥性藥理不同的情況，一旦出現(xiàn)誤用、混用，對(duì)患者疾病的治療產(chǎn)生影響，嚴(yán)重時(shí)危及患者的生命[4]。此外，一些不法商販將沒(méi)有藥用價(jià)值的植物部分當(dāng)作藥物販賣，對(duì)中藥的用藥安全也有較大的影響，為減少患者的用藥風(fēng)險(xiǎn)，改善臨床中藥用藥安全，對(duì)不同藥物進(jìn)行區(qū)分，鑒別藥物真?zhèn)我饬x重大[5]。

目前我國(guó)基層中藥鑒定、使用機(jī)構(gòu)多應(yīng)用放大鏡、掃描儀鑒定藥材的真?zhèn)?，操作?jiǎn)單方便，但鑒定準(zhǔn)確率相對(duì)較低，對(duì)檢驗(yàn)師的臨床經(jīng)驗(yàn)要求相對(duì)較高。臨床利用實(shí)驗(yàn)室鑒定方法，則多利用顯微鏡進(jìn)行鑒定，能夠明確鑒定出藥品的細(xì)胞差異，是最為準(zhǔn)確的鑒定方法，但顯微鏡儀器相對(duì)較沉，且儀器昂貴，需在專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)使用。使用靈活性相對(duì)較低，且為安置顯微鏡等相關(guān)配套儀器，對(duì)鑒定環(huán)境的要求也較高[9-10]，臨床為配套使用顯微鏡，需耗費(fèi)大量的財(cái)力與物力，不利于基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)的發(fā)展。因此多數(shù)基礎(chǔ)醫(yī)療機(jī)構(gòu)與鑒定機(jī)構(gòu)利用顯微鏡鑒定的普及能力相對(duì)較差。半顯微狀鑒定是利用體視顯微鏡開(kāi)展的鑒定措施，半顯微狀鑒定能夠通過(guò)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論，利用微觀技術(shù)對(duì)藥材進(jìn)行微觀觀察，且在傳統(tǒng)掃描儀鑒定的基礎(chǔ)上更加明確的觀察到藥物表面的差異，與顯微鏡相比操作更加簡(jiǎn)單，需為保證鑒定技術(shù)實(shí)施效果建設(shè)專門(mén)的實(shí)驗(yàn)室或購(gòu)進(jìn)相應(yīng)的配套器材，在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)、臨床的普及能力較好，多數(shù)藥材檢驗(yàn)師能夠通過(guò)短期培訓(xùn)熟練操作半顯微鑒定儀器與電腦，不但對(duì)藥材檢驗(yàn)師的經(jīng)驗(yàn)要求相對(duì)較低，還能夠短時(shí)間培養(yǎng)熟練的鑒定人才。

本研究對(duì)所選A、B兩組中藥藥材進(jìn)行真?zhèn)舞b定，選擇半顯微狀鑒定與掃描儀鑒定，鑒定結(jié)果中以半顯微狀鑒定的準(zhǔn)確率更高，兩組鑒定準(zhǔn)確率均超過(guò)90%，掃描儀鑒定的結(jié)果準(zhǔn)確率相對(duì)較低?？梢?jiàn)利用半顯微狀鑒定能夠有效提高藥材真?zhèn)舞b定的準(zhǔn)確率，增加用藥的安全性，減少中醫(yī)臨床藥材分配、鑒定工作的困難。

綜上所述，中藥藥材真?zhèn)舞b定中，利用半顯微狀鑒定的效果更加顯著，能夠減少中醫(yī)臨床用藥風(fēng)險(xiǎn)，為中藥藥材鑒定提供更加詳細(xì)的區(qū)別特點(diǎn)，幫助臨床盡快培養(yǎng)出熟練的鑒定人才，減少中藥使用過(guò)程中的錯(cuò)誤，增加用藥安全性，值得臨床應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]許亞春，熊超，姜春麗，等.DNA條形碼技術(shù)在動(dòng)物類藥材熊膽粉及其混偽品鑒定中的應(yīng)用[J].中國(guó)中藥雜志，2018，43（4）：645-650.

[2]石達(dá)理，王孟虎，陳思有，等.基于ITS2序列多種龍膽屬植物及藥材的DNA條形碼鑒定研究[J/OL].中藥材，2018（1）：80-84.

[3]任旻瓊，樊青玲，張平，等.對(duì)接崗位需求的高職藥學(xué)專業(yè)中藥鑒定技術(shù)課程改革與實(shí)踐[J].衛(wèi)生職業(yè)教育，2018，36（2）：135-136.

[4]王桂梅，王世偉，席嘯虎，等.基于COⅠ基因的羚羊角及其混偽品的DNA條形碼鑒定方法的研究[J].中國(guó)藥房，2018，29（1）：77-80.

[5]劉延欣，魏會(huì)勤.半顯微狀鑒定法應(yīng)用于中藥藥材真?zhèn)舞b定的應(yīng)用價(jià)值評(píng)價(jià)[J].臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志，2017，4（75）：14781，14783.

[6]馬雙雙，肖瑤，張馳，等.基于系統(tǒng)鑒定法的維藥材赤芍（克孜力喬古魯克）精準(zhǔn)鑒別[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2017，23（10）：48-51.

[7]劉旭朝，周麗思，劉金欣，等.基于COI序列的水牛角及其易混偽品DNA條形碼鑒定研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2017，52（3）：494-499.

[8]楊瑞，李文東，馬永生，等.不同基原甘草的分子鑒定及市售甘草藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2017，52（2）：318-326.

[9]袁伯川，李文東，馬永生，等.柴胡屬藥用植物的分子鑒定及市售柴胡藥材的質(zhì)量調(diào)查[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2017，52（1）：162-171. [ZK）]

[10]連德明.半顯微性狀鑒定在中藥藥材真?zhèn)舞b定中的應(yīng)用價(jià)值[J].河南醫(yī)學(xué)研究，2016，25（11）：1986-1987.

（收稿日期：2018-04-19 編輯：陶希睿）