龜甲膠的現(xiàn)代研究進(jìn)展

石萍 魯增輝 游華建 陳仕江

【摘 要】 龜甲膠是我國(guó)名貴中藥，具有滋陰、養(yǎng)血、止血的功效。目前，國(guó)內(nèi)對(duì)龜甲膠的研究十分匱乏，該研究通過(guò)查閱近15年有關(guān)龜甲膠研究報(bào)道，從龜甲膠的化學(xué)成分、藥理作用、臨床、真?zhèn)舞b定及質(zhì)量控制研究等方面進(jìn)行綜述。

【關(guān)鍵詞】 龜甲膠；藥理作用；質(zhì)量控制

【中圖分類號(hào)】R282.74 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2018）02-0059-04

Abstract：Testudinis Carapacis et Plastri Colla（TCPC）， an expensive and good kind of Chinese medicine for nourishing yin， nourishing blood and hemostasis， is less studied. The paper summarizes the research development of TCPC about chemical composition， pharmacology， clinic， authenticity and quality control in the past 15 years. The review can provide reference information and ideas for further research and development of TCPC.

Keywords：TCPC； Pharmacology； Quality Control

龜甲膠（Testudinis Carapacis et Plastri Colla，TCPC）為龜科動(dòng)物烏龜Chinemys reevesii（Gray）的背甲和腹甲經(jīng)過(guò)水煎煮、濃縮而制成的固體膠，歷版《中國(guó)藥典》均有收載，為中國(guó)名貴中藥，始載于《本草崇源》，屬甲膠范疇，龜甲膠性涼，味咸、甘，歸肝、腎、心經(jīng)，具有滋陰，養(yǎng)血止血之功效，主治陰虛潮熱、骨蒸盜汗、腰膝酸軟、血虛萎黃、崩漏帶下等[1]。根據(jù)歷代本草記載，龜甲膠為常用中藥的補(bǔ)虛藥物之一。

目前，國(guó)內(nèi)對(duì)動(dòng)物膠類藥材的研究主要集中在阿膠及鹿角膠，對(duì)龜甲膠的研究十分匱乏，筆者通過(guò)查閱近15年有關(guān)龜甲膠研究報(bào)道，從龜甲膠的化學(xué)成分、藥理作用、臨床、真?zhèn)舞b定及質(zhì)量控制等方面進(jìn)行綜述，旨在為更好地保護(hù)利用龜甲膠提供數(shù)據(jù)和參考。

1 化學(xué)成分研究

目前，文獻(xiàn)資料顯示龜甲膠主要成分為蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸及微量元素等，其有效物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確。

1.1 蛋白質(zhì)、多肽及氨基酸的含量測(cè)定 李春梅等[2]采用激光解析/離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜（SELDI-TOF MS），對(duì)龜甲膠1500～13000Da區(qū)間蛋白質(zhì)、肽分布以及分子量進(jìn)行分析，并得到龜甲膠的蛋白質(zhì)/肽成分質(zhì)量指紋圖譜，該結(jié)果也可作為龜甲膠數(shù)字化質(zhì)控的標(biāo)準(zhǔn)。除了對(duì)蛋白質(zhì)和肽的研究，有學(xué)者[3]也對(duì)龜甲膠氨基酸的含量進(jìn)行測(cè)定，并得到14種氨基酸含量（羥脯氨酸、絲氨酸、谷氨酸、組氨酸、精氨酸、蘇氨酸、纈氨酸、丙氨酸、脯氨酸、甘氨酸、酪氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸），其測(cè)定結(jié)果也可作為龜甲膠藥材的鑒別標(biāo)準(zhǔn)，為進(jìn)一步完善龜甲膠藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供一定的數(shù)據(jù)參考。周維等[4]對(duì)龜甲的提取物（即龜甲膠經(jīng)水煎煮、濾過(guò)、濃縮、干燥后，并加輔料混合均勻后而制得的顆粒）中6種氨基酸（甘氨酸、L羥脯氨酸、L脯氨酸、瓜氨酸、丙氨酸、亮氨酸）的含量進(jìn)行測(cè)定。萬(wàn)鳴等[5]對(duì)采自不同時(shí)間階段，來(lái)源于同一產(chǎn)地（湖北荊州）的龜甲進(jìn)行水煎提取處理后，測(cè)定龜甲膠的含氮量，并分析不同時(shí)間段的龜甲及不同部位（背甲和腹甲）的出膠率及含氮量，結(jié)果表明，不同時(shí)間采集龜甲對(duì)出膠得率和氮含量結(jié)果影響不大，出膠得率在11.10%～14.30%，氮含量在16.14%～17.08%；從不同部位如背甲和腹甲中提取龜甲膠，出膠率分別為13.43%和14.31%，含氮量分別為16.20%和16.31%。提示不同時(shí)間及不同部位對(duì)龜甲的出膠率及氮含量影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。

1.2 微量元素及有害元素含量的測(cè)定 曹繼華等[6]對(duì)包括龜甲膠在內(nèi)的6味中藥進(jìn)行微量元素的測(cè)定，結(jié)果顯示，龜甲膠中含有鈣、鎂、鐵、鋅、磷、錳、銅、鍶等多種微量元素，并且鈣和鐵的含量要明顯高于其它兩種膠類藥材如鹿角膠和阿膠。有研究者對(duì)龜甲膠中有害元素的含量進(jìn)行測(cè)定，袁利杰等[7]利用微波消解-電感耦合等離子質(zhì)譜（ICP-MS）測(cè)定龜甲膠中6種有害元素（砷、銅、鉻、鉛、鎘、汞）的含量，王海波等[8] 采用電感耦合等離子體光譜，對(duì)9批龜甲膠樣品中鉻元素的含量進(jìn)行測(cè)定，鉻含量在0.15～1.24 mg·kg-1之間。查閱我國(guó)歷版藥典及相關(guān)醫(yī)藥法規(guī)，尚未對(duì)龜甲膠中鉻元素及其它有害元素的含量及限度進(jìn)行規(guī)定，因此建立有害元素檢測(cè)的方法及含量的控制對(duì)安全用藥具有十分重要的意義。

2 藥理作用研究

2.1 促進(jìn)細(xì)胞增殖 藥理研究表明，龜甲膠通過(guò)上調(diào)或下調(diào)一系列基因的表達(dá)，可促進(jìn)軟骨細(xì)胞的增殖，抑制細(xì)胞的凋亡，從而修復(fù)受損軟骨，最終延緩骨關(guān)節(jié)炎的病理進(jìn)程。

林嘉輝等[9]選取3月齡豚鼠骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，分別用龜甲膠、鹿角膠、鹽酸氨基葡萄糖（GHC）含藥血清和生理鹽水對(duì)其進(jìn)行干預(yù)，比較含藥血清對(duì)軟骨細(xì)胞的促增殖作用情況，并且采用QPCR檢測(cè)干預(yù)后軟骨細(xì)胞JNK及p38 MAPK基因的表達(dá)差異情況。結(jié)果表明，龜甲膠和鹿角膠均下調(diào)JNK及p38 MAPK基因的表達(dá)，從而減少JNK和p38 MAP在軟骨細(xì)胞內(nèi)的合成，進(jìn)而減少基質(zhì)降解，抑制細(xì)胞的凋亡，最終延緩骨關(guān)節(jié)炎病理進(jìn)展，其中龜甲膠組抑制JNK和p38 MAPK基因的表達(dá)作用最強(qiáng)。陳澤華等[10]、陳炳藝等[11]也進(jìn)行了類似的實(shí)驗(yàn)，區(qū)別是選取的試驗(yàn)對(duì)象不同，為3月齡豚鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞，檢測(cè)干預(yù)后軟骨細(xì)胞增殖情況，并采用SABC免疫組化檢測(cè)干預(yù)后軟骨細(xì)胞MKK的表達(dá)。結(jié)果表明，龜甲膠、鹿角膠均能顯著性上調(diào)膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞MKK的表達(dá)，促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖，修復(fù)受損軟骨、緩解骨關(guān)節(jié)炎。

2.2 抑制細(xì)胞凋亡 李楠等[12-13]通過(guò)試驗(yàn)研究龜鹿二仙膠及其拆方對(duì)大鼠及豚鼠軟骨細(xì)胞Collagen-Ⅱ和GAG的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，龜鹿二仙膠全方可明顯促進(jìn)軟骨細(xì)胞Collagen-Ⅱ和蛋白多糖的表達(dá)，抑制軟骨細(xì)胞凋亡，其作用明顯強(qiáng)于各個(gè)拆方，且君藥龜甲膠和鹿角膠的作用強(qiáng)于臣藥人參和枸杞的作用。該團(tuán)隊(duì)在后續(xù)試驗(yàn)中選取第三代4周齡SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞，采用SNP誘導(dǎo)凋亡后，用免疫組化染色法以及實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)研究了龜鹿二仙膠及其拆方含藥血清對(duì)軟骨細(xì)胞bax、bcl-2的表達(dá)[14]，結(jié)果顯示，龜鹿二仙膠及其各個(gè)拆方均能上調(diào)bcl-2表達(dá)及下調(diào)bax的表達(dá)，即龜甲、鹿角、人參、枸杞均具有抑制軟骨細(xì)胞凋亡的作用，并且研究發(fā)現(xiàn)，君藥龜甲和鹿角較臣藥人參和枸杞有明顯加強(qiáng)抑制凋亡的作用。

2.3 提高血清雌二醇（E2）水平 杜江等[15]研究表明，龜甲膠與鹿角膠在提高血清雌二醇（E2）濃度及促進(jìn)膝關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)Ⅱ型膠原表達(dá)方面具有顯著性的作用。李楠等[16]研究龜鹿二仙膠及其各個(gè)拆方對(duì)SD大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨退變的影響，結(jié)果證實(shí)，龜甲和鹿角配伍人參可明顯提高血清雌二醇（E2）濃度水平，抑制關(guān)節(jié)軟骨產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，促進(jìn)軟骨細(xì)胞Collagen-Ⅱ的合成及增殖。

3 臨床研究

龜甲膠在臨床上主要用于滋陰養(yǎng)血、止血補(bǔ)血、益腎健骨等方面。

俞紅麗等[17]利用益血生膠囊（阿膠、鹿角膠、龜甲膠、白芍、當(dāng)歸等成分）治療48例缺鐵性貧血，治療3個(gè)月后，治療組復(fù)發(fā)率、不良反應(yīng)均低于對(duì)照組（P<0.05）。賽漢其其格[18]利用補(bǔ)腎固沖（熟地黃、制首烏、山茱萸、山藥、龜甲膠、生龍骨、牡蠣等）治療268例更年期宮血，治愈164例，好轉(zhuǎn)75例，總有效率達(dá)89.18%。陳淑萍[19]運(yùn)用補(bǔ)腎基本方（熟地黃、懷山藥、龜甲膠、鹿角膠等主要成分）治療功能性子宮出血35例，痊愈21例，顯效9例，好轉(zhuǎn)4例，總有效率高達(dá)97%。蔡忠鳳等[20]利用龜鹿補(bǔ)腎丸（龜甲膠、鹿角膠、菟絲子炒、淫羊藿、續(xù)斷等主要成分）治療陽(yáng)萎86例，總有效率達(dá)100%。李文順等[21]運(yùn)用龜鹿二仙膠湯治療肝腎虧虛型膝骨性關(guān)節(jié)炎60例，總有效率98.3%，臨床療效明顯。

4 真?zhèn)舞b定及質(zhì)量控制研究

4.1 基原動(dòng)物鑒定及質(zhì)量控制 中藥基原鑒定是中藥鑒定的基礎(chǔ)，確保應(yīng)用中藥材來(lái)源及品種的準(zhǔn)確性，對(duì)中藥材的繼承、研究、生產(chǎn)、開(kāi)發(fā)利用均具有十分重要的意義[22]。

唐敏等[23]選取以巴西龜和中華草龜為來(lái)源的龜甲膠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，采用超高效液相色譜-電噴霧四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜法，并且以牛皮特征肽離子為檢測(cè)對(duì)象對(duì)兩種來(lái)源的龜甲膠進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示，該方法可區(qū)別巴西龜龜甲膠和摻雜牛皮成分的龜甲膠，也可用于龜甲膠的質(zhì)量控制。彭婷婷等[24]采用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（UPLC-MS），以不同品種龜甲為原料分別熬制成龜甲膠，并測(cè)定其牛皮源的含量，結(jié)果表明，純草龜龜甲熬制的龜甲膠檢測(cè)結(jié)果為牛皮源陰性，摻雜巴西龜龜甲的龜甲膠檢測(cè)結(jié)果為牛皮源陽(yáng)性，該方法可有效控制龜甲膠質(zhì)量。

4.2 幾種動(dòng)物膠類藥材鑒定及質(zhì)量控制 目前，研究較多的動(dòng)物膠類藥材有3種，即龜甲膠、鹿角膠和阿膠。殷學(xué)毅[25]選用包括龜甲膠在內(nèi)的3種動(dòng)物膠類樣品，分別置于熱分析儀樣品室，在空氣氣氛下，以5℃/min的速度從20℃勻速升至550℃，獲得不同樣品的微商熱重（DTG）曲線和差熱分析（DTA）曲線，根據(jù)其曲線的特征差異進(jìn)行鑒別，結(jié)果顯示，利用熱分析方法可以將該幾種動(dòng)物膠類藥材（龜甲膠、鹿角膠、阿膠）進(jìn)行區(qū)分鑒定。錢瑛等[26]將阿膠、龜甲膠、鹿角膠3種樣品，經(jīng)加熱、研磨粉碎后，放入同步熱分析儀樣品室中進(jìn)行熱分析鑒定，對(duì)每種樣品分別做3次有效生物學(xué)重復(fù)測(cè)定，將得到的原始數(shù)據(jù)取平均值后，做DTG、DTA數(shù)據(jù)分析表，并分析該方法與感官鑒定法、水試法、圓二色譜鑒定法的成功率。結(jié)果顯示，熱分析法能夠準(zhǔn)確并快速鑒定區(qū)別龜甲膠、阿膠、鹿角膠這3種膠類藥材，且具有直觀簡(jiǎn)便、成功率高的優(yōu)點(diǎn)，能夠在中藥材鑒定中推廣并加以運(yùn)用。于海英等[27]采用高效液相色譜（HPLC），建立東阿阿膠、龜甲膠脂溶性成分的指紋圖譜，為藥用動(dòng)物膠類藥材的鑒別及質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

歷版中國(guó)藥典中，動(dòng)物膠類藥材均無(wú)專屬性鑒別，且性狀描述較粗略，對(duì)膠類的真?zhèn)渭皟?yōu)劣很難做出客觀、準(zhǔn)確的判斷。因此對(duì)動(dòng)物膠類中藥鑒定及質(zhì)量控制方面應(yīng)當(dāng)予以加強(qiáng)研究，確保動(dòng)物膠類中藥及其制劑的質(zhì)量，保證用藥安全。

5 其他

林芳花等[28]將海螵鞘與龜甲膠藥材提取液添加至培養(yǎng)基中飼養(yǎng)果蠅，記錄果蠅產(chǎn)生F1代和F2代數(shù)量。結(jié)果顯示，龜甲膠和海螵蛸都能顯著性提高果蠅的繁殖力。

6 小結(jié)

龜甲膠為我國(guó)傳統(tǒng)滋補(bǔ)類名貴中藥，臨床療效明確。但其有效活性物質(zhì)尚不明確，因此，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)龜甲膠活性物質(zhì)的挖掘以及對(duì)其質(zhì)量控制方法，對(duì)制備工藝的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行相關(guān)研究，并在龜甲膠真?zhèn)舞b定研究方面應(yīng)當(dāng)予以加強(qiáng)，以期更有效地利用該藥材資源，確保用藥安全。

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