東莞市Ⅰ群禽腺病毒血清抗體調(diào)查

黃炳熾，歐陽偉強(qiáng)，陳盛文，潘 杰，張險(xiǎn)朋★

（1.東莞市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣東 東莞 523086；2.東莞市厚街鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，廣東 東莞 523960；3.東莞市長(zhǎng)安鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心，廣東 東莞 523846）

Ⅰ群禽腺病毒屬于腺病毒科禽腺病毒屬，已鑒定了5個(gè)禽腺病毒種，分別為禽腺病毒A、B、C、D、E,有12個(gè)血清型，Ⅰ亞群禽腺病毒在全球廣泛分布，所有日齡的家禽均易感。Ⅰ亞群禽腺病毒作為原發(fā)病原的致病作用還未研究透徹，但不同血清型，甚至同血清型不同毒株，在引起家禽的發(fā)病和死亡方面都有所不同。2015年以來，我國有多個(gè)地區(qū)的養(yǎng)雞場(chǎng)發(fā)生了由Ⅰ群禽腺病毒引起的心包積水和包涵體肝炎，發(fā)病快，死亡率高，臨床剖檢以心包積水、肝臟腫大、出血、壞死、質(zhì)脆為特征，又稱安卡拉病，給養(yǎng)雞業(yè)造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。為了摸清東莞市雞群感染Ⅰ群禽腺病毒的情況，2017年在東莞市的養(yǎng)雞場(chǎng)和三鳥市場(chǎng)采集了雞血清進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 雞血清 共446份雞血清，采自東莞市養(yǎng)雞場(chǎng)、三鳥市場(chǎng)，其中養(yǎng)雞場(chǎng)3個(gè)，53份血清，三鳥市場(chǎng)7個(gè)393份血清。采用翅靜脈采血，3000r/min離心分離血清，-20℃保存待檢。

1.1.2 試 劑 Ⅰ群禽腺病毒抗體ELISA試劑盒購自Biochek 公司，批號(hào)：FS6746。

1.1.3 儀 器 Sunrise酶標(biāo)儀購自TECAN公司，移液器購自eppendorf公司。

1.2 方法

1.2.1 將試劑盒回至室溫，用樣品稀釋液1:100稀釋雞血清。

1.2.2 在A1和B1孔加入100μL陰性對(duì)照，在C1和D1孔加入100μL陽性對(duì)照，其余加入100μL稀釋的雞血清，用封板膜封板，在室溫下22℃～27℃孵育30min。

1.2.3 倒掉孔中液體，用洗液洗板4次，每孔300μL洗液，最后一次在吸水紙上拍干。每孔加入100μL酶標(biāo)二抗，用封板膜封板，在室溫下22℃～27℃孵育30min。

1.2.4 倒掉孔中液體，按照上述方式洗板。每孔加入100μL底物，用封板膜封板，在室溫下（22℃～27℃）避光孵育15min。

1.2.5 每孔加入100μL終止液，空氣調(diào)零，在405nm波長(zhǎng)讀取吸光度。

1.2.6 陰性對(duì)照的平均吸光度小于0.30，陽性對(duì)照的平均吸光度應(yīng)≥0.30，陽性對(duì)照和陰性對(duì)照的平均吸光度之差應(yīng)＞0.15，試驗(yàn)結(jié)果成立。

1.2.7 計(jì)算S/P值，樣品S/P值≥0.5，判為Ⅰ群禽腺病毒抗體陽性，樣品S/P值＜0.5,判為Ⅰ群禽腺病毒抗體陰性。

2 結(jié)果

共檢測(cè)雞血清446份，Ⅰ群禽腺病毒抗體陽性數(shù)345份，抗體陽性率為77.35%。其中監(jiān)測(cè)養(yǎng)雞場(chǎng)3個(gè)共檢測(cè)53份雞血清，抗體均為陽性，抗體陽性率為100%，詳細(xì)結(jié)果見表1。監(jiān)測(cè)三鳥市場(chǎng)7個(gè)，共檢測(cè)393份雞血清，抗體陽性數(shù)292份，抗體陽性率74.30%，陽性率在25%～100%，詳細(xì)結(jié)果見表2。

3 討論

目前，國內(nèi)還尚無商品化的疫苗來防控I群禽腺病毒的感染，所以I群禽腺病毒抗體陽性可以判定為雞感染或曾經(jīng)感染過I群禽腺病毒。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，東莞市養(yǎng)雞場(chǎng)I群禽腺病毒抗體陽性率為100%，三鳥市場(chǎng)的抗體陽性率也在25%～100%，說明東莞市的雞群感染I群禽腺病毒比較普遍。

表1 東莞市雞養(yǎng)殖場(chǎng)Ⅰ群禽腺病毒抗體檢測(cè)結(jié)果

表2 東莞市三鳥市場(chǎng)Ⅰ群禽腺病毒抗體檢測(cè)結(jié)果

腺病毒可以水平傳播也可以垂直傳播，對(duì)I群禽腺病毒的感染需采取綜合防控措施。（1）在種雞場(chǎng)開展禽腺病毒的凈化，研究制定凈化方案，引進(jìn)雞苗時(shí)從腺病毒檢測(cè)為陰性的場(chǎng)引進(jìn)。（2）做好生物安全措施，加強(qiáng)養(yǎng)殖的消毒和生物安全隔離。（3）做好養(yǎng)殖場(chǎng)免疫抑制疾病的控制，如傳染性法氏囊病（IBD）和雞傳染性貧血（CIA）可以強(qiáng)化禽腺病毒的致病性。（4）使用活疫苗時(shí)避免其他病原體的污染，確保外源病毒包括禽腺病毒為陰性。（5）加強(qiáng)Ⅰ群禽腺病毒的流行病學(xué)調(diào)查，掌握Ⅰ群腺病毒的血清型、致病性和遺傳特點(diǎn)，加強(qiáng)Ⅰ群禽腺病毒疫苗的研發(fā)，為生產(chǎn)上控制和凈化Ⅰ群禽腺病毒提供解決方案。

雞群發(fā)病后無特效藥物治療，可以通過提高免疫力，防止繼發(fā)感染來減少發(fā)病的死亡率。對(duì)死亡率較高的雞群可以通過注射特異性的卵黃抗體或高免血清。有研究顯示，卵黃抗體注射后3、6、9、12d，利用Ⅰ群4型禽腺病毒進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，結(jié)果顯示，抗體注射后6d能起到完全保護(hù)作用，9d可以產(chǎn)生部分保護(hù)作用，12d后沒有保護(hù)作用。

此次血清學(xué)調(diào)查采用商品化ELISA試劑盒方法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果能夠反映雞群感染I群禽腺病毒的情況，該方法操作簡(jiǎn)單、敏感性高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好，適合養(yǎng)殖場(chǎng)和三鳥市場(chǎng)大規(guī)模的檢疫和監(jiān)測(cè)，是監(jiān)測(cè)I群禽腺病毒抗體的最佳方法，該方法的缺點(diǎn)是包被的抗原具有群抗原性無法確定血清型。