偏翅唐松草的化學(xué)成分研究

羅智慧，陳 陽(yáng)，王雅溶，蔡仕寧，彭鏡暉，吳濤濤，尹田鵬

(遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū) 珠海市中藥基礎(chǔ)及應(yīng)用研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 珠海 519041)

唐松草屬(ThalictrumLinn.)屬于毛茛科(Ranunculaceae)，全球約有300多種，我國(guó)約有70余種，全國(guó)各省區(qū)均有分布，但多數(shù)分布于西南地區(qū)[1]。唐松草屬約有30余種在民間藥用，不少種類(lèi)有清熱、治濕、發(fā)汗、止痢、治目赤等作用。該屬植物功效與黃連(CoptischinensisFranch.)相近，我國(guó)約有20余種作為黃連替代品使用，被稱(chēng)為馬尾連或土黃連。我國(guó)是唐松草屬植物分布中心之一，具有種類(lèi)多，分布廣，資源豐富的優(yōu)勢(shì)。針對(duì)該屬植物開(kāi)展系統(tǒng)深入的研究，對(duì)其進(jìn)行開(kāi)發(fā)利用，具有廣闊的應(yīng)用前景。

偏翅唐松草(ThalictrumdelavayiFranch.)主要產(chǎn)于我國(guó)四川、云南、西藏等地，生長(zhǎng)于海拔2 000～3 500 m山地林溝邊、灌叢或疏林中。偏翅唐松草以根莖入藥常于春秋季節(jié)采挖、曬干，“代黃連用，殺菌消炎”，又名土黃連、馬尾黃連、馬尾連等[2]。文獻(xiàn)報(bào)道從偏翅唐松草中分離的化合物約30個(gè)，主要為生物堿[3-6]。由于植物的產(chǎn)地、氣候等因素對(duì)化學(xué)成分影響較大，故偏翅唐松草的化學(xué)成分多樣性仍值得深入探索。對(duì)其開(kāi)展化學(xué)成分研究，可進(jìn)一步闡明偏翅唐松草的藥用物質(zhì)基礎(chǔ)，為更好地開(kāi)發(fā)利用我國(guó)這一特色藥用資源提供科學(xué)依據(jù)。基于此，本課題組對(duì)云南的偏翅唐松草進(jìn)行了系統(tǒng)化學(xué)成分研究，從中分離鑒定了7個(gè)化合物，分別為：(1)tetrahydroisoquinoline；(2)騰唐松草堿；(3)小檗堿；(4)羥基酪醇；(5)高香草醇；(6)2-羥基丙酰胺；(7)棕櫚酸葉綠酯(見(jiàn)圖1)。其中化合物1首次從植物資源中分離得到；化合物4-7首次從該植物中分離得到。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 儀器與試劑 Bruker AM-400或Bruker DRX-500型核磁共振儀(Bruker，德國(guó))，TMS為內(nèi)標(biāo)；小型多功能中藥粉碎機(jī)(大祥電子機(jī)械設(shè)備有限公司，廣州)；Hei-Vap Value Digital型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(Heidolph,德國(guó))；DLSB-5/10L型低溫冷卻液循環(huán)泵(鞏義市予華儀器設(shè)備有限公司，鞏義)；XS 205型十萬(wàn)分之一電子天平(Mettler Toledo，北京)。200～300目和300～400目柱層析硅膠、G型薄層層析硅膠板(青島海洋化工廠，青島)；氘代試劑CDCl3和(CD3)2CO(旋光醫(yī)藥科技有限公司，寧波)；二氯甲烷(DCM)、甲醇(MeOH)、乙醇、石油醚(petroleum ether，PE)、乙酸乙酯(EtOAc)、正丁醇(BuOH)和二乙胺(diethylamine，DEA)(天津大茂化學(xué)試劑有限公司，天津)；顯色劑茴香醛硫酸乙醇和改良碘化鉍鉀試液。

1.1.2 藥材 偏翅唐松草于2016年5月采集于云南省大理白族自治州，并由遵義醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)教授陳陽(yáng)鑒定，標(biāo)本保存于遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)。

1.2 提取分離 陰干的偏翅唐松草全草約5 kg粉碎后用95%乙醇滲漉提取24 h，重復(fù)3次，合并滲漉液，減壓濃縮得總浸膏約400 g。浸膏加水混懸后依次采用PE、EtOAc和BuOH萃取3次，分別合并濃縮萃取液得FrA(130 g)、FrB(90 g)和FrC(70 g)。取FrB進(jìn)行硅膠柱層析梯度洗脫(VDCM:VMeOH=100∶1→1∶1)得7部分，分別是：FrB1(VDCM:VMeOH=100∶1，7 g)、FrB2(VDCM:VMeOH=50∶1，9 g)、FrB3(VDCM:VMeOH=30∶1，14 g)、FrB4(VDCM:VMeOH=20∶1，3 g)、FrB5(VDCM:VMeOH=10∶1，24 g)、FrB6(VDCM:VMeOH=5∶1，8 g)和FrB7(VDCM:VMeOH=1∶1，9 g)。其中FrB1經(jīng)進(jìn)一步硅膠柱層析(VPE:VEtOAc:VDEA=20∶1∶0.5→5∶1 ∶0.1)得化合物1(29 mg)；FrB2經(jīng)硅膠柱層析(VPE:VEtOAc:VDEA=50∶1∶1→20∶1∶0.5)得化合物3(23 mg)；FrB3經(jīng)硅膠柱層析(VDCM:VMeOH=20∶1→5∶1)得化合物4(25 mg)；FrB5進(jìn)一步經(jīng)硅膠柱層析(VPE:VEtOAc=30∶1→5∶1)和葡聚糖凝膠柱層析(MeOH)得化合物7(40 mg)。FrC經(jīng)硅膠柱層析(VDCM:VMeOH=100∶1→1∶1)分離得到8部分，分別是：FrC1(VDCM:VMeOH=100∶1，8 g)、FrC2(VDCM:VMeOH=50∶1，3 g)、FrC3(VDCM:VMeOH=30∶1，2 g)、FrC4(VDCM:VMeOH=20∶1，14 g)、FrC5(VDCM:VMeOH=15∶1，5 g)、FrC6(VDCM:VMeOH=10∶1，22 g)、FrC7(VDCM:VMeOH=5∶1，4 g)和FrC8(VDCM:VMeOH=1∶1，5 g)。其中FrC1進(jìn)一步經(jīng)硅膠柱層析(VPE:VEtOAc:VDEA=20∶1∶0.2→5∶1∶0.1)和葡聚糖凝膠柱層析(MeOH)得化合物2(16 mg)；FrC4經(jīng)硅膠柱層析(VPE:VEtOAc=20∶1→5∶1)得化合物5(65 mg)；FrC6經(jīng)硅膠柱層析(VDCM:VMeOH=20∶1→5∶1)得化合物6(32 mg)。

2 結(jié)果

從偏翅唐松草全草中分離得到7個(gè)化合物，采用核磁共振波譜學(xué)方法鑒定結(jié)構(gòu)(見(jiàn)圖1)為：(1)tetrahydroisoquinoline、(2)騰唐松草堿、(3)小檗堿、(4)羥基酪醇、(5)高香草醇、(6)2-羥基丙酰胺、(7)棕櫚酸葉綠酯。其中化合物1首次從植物資源中分離得到，化合物4-7首次從該植物中分離得到。

圖1 偏翅唐松草中分離得到的化合物

化合物1為淡黃色粉末，分子式C20H23NO5，1H NMR (500 MHz,CDCl3)δH:6.36 (s,1H,H-8),6.75 (d,J= 1.7 Hz,1H,H-10),6.78 (dd,J= 8.1 Hz,1.7 Hz,1H,H-14),6.36 (d,J= 8.1 Hz,1H,H-13),4.09 (dd,J= 9.5 Hz,4.5 Hz,1H,H-1),3.14 (dd,J= 9.5 Hz,4.5 Hz,1H,H-1a),2.85 (dd,J= 14.0 Hz,4.5 Hz,1H,H-1a),3.17 (td,12.0 Hz,J= 6.0 Hz,H-3a),2.88 (td,J= 12.0 Hz,6.0 Hz,H-3a),2.65 (br t,J= 6.0 Hz,2H,H-4);13C NMR (125 MHz,CDCl3)δC:56.9 (d,C-1),42.3 (t,C-1a),40.2 (t,C-3),23.3 (t,C-4),110.2 (s,C-4a),146.5 (s,C-5),133.2 (s,C-6),141.9 (s,C-7),105.4 (d,C-8),133.2 (s,C-8a),131.4 (s,C-9),112.6 (d,C-10),149.2 (s,C-11),147.9 (s,C-12),111.6 (d,C-13),121.6 (d,C-14),57.2,56.1,56.0 (q,3 × OCH3),101.5 (t,OCH2O)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道一致，鑒定其為tetrahydroisoquinoline。

化合物2為黃褐色粉末，分子式C21H23NO4，1H NMR (500 MHz,CDCl3)δH:7.26 (s,1H,H-2),9.14 (s,1H,H-5),7.20 (s,1H,H-8),7.53 (d,J= 8.8 Hz,1H,H-9),7.72 (d,J= 8.8 Hz,1H,H-10),6.11 (s,2H,OCH2O),4.03 (s,3H,OCH3-3),3.90 (s,3H,OCH3-4),3.55 (m,2H,H-1'),3.11 (m,2H,H-2'),2.75 (s,6H,2 × NCH3);13C NMR (125 MHz,CDCl3)δC:129.7 (s,C-1),115.1 (d,C-2),150.7 (s,C-3),146.1 (s,C-4),125.6 (s,C-4a),129.0 (s,C-5a),106.6 (d,C-5),147.3 (s,C-6),148.0 (s,C-7),105.6 (d,C-8),125.8 (s,C-8a),106.6 (d,C-8),125.8 (d,C-9),120.3 (d,C-10),59.5 (t,C-1'),32.1 (t,C-2'),101.4 (t,OCH2O),60.0 (q,OCH3-4),56.9 (q,OCH3-3),43.9 (q,2 × NCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道一致，鑒定其為騰唐松草堿(thalicthuberine)。

化合物3為黃色粉末，分子式C20H18NO4，1H NMR (500 MHz,CDCl3)δH:9.79 (s,1H,H-8),8.72 (s,1H,H-13),8.13 (d,J= 9.1 Hz,1H,H-11),8.03 (d,J= 9.1 Hz,1H,H-12),7.68 (s,1H,H-1),6.99 (s,1H,H-4),6.12 (s,3H,OCH2O),4.22,4.13 (s,each 3H,2×OCH3),3.28 (t,J= 6.4 Hz,2H,H-5);13C NMR (125 MHz,CDCl3)δC:106.7 (d,C-1),150.0 (s,C-2),152.2 (s,C-3),109.5 (d,C-4),123.5 (s,C-1a),132.0 (s,C-4a),28.4 (t,C-5),57.4 (t,C-6),146.5 (d,C-8),122.0 (s,C-8a),152.3 (s,C-9),145.9 (s,C-10),121.7 (d,C-11),124.7 (d,C-12),135.4 (s,C-12a),128.3 (d,C-13),139.8 (s,C-14),62.8 (q,OCH3-9) ,57.9 (q,OCH3-10),103.8 (t,OCH2O)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道一致，鑒定其為小檗堿(berberine)。

化合物4為淡黃色油狀物，分子式C8H10O3，1H NMR (500 MHz,CDCl3)δH:6.68 (d,J= 8.0 Hz,1H,H-5),6.66 (d,J= 1.9 Hz,1H,H-2),6.53 (dd,J= 8.0 Hz,1.9 Hz,1H,H-6),3.68 (t,J= 7.2 Hz,2H,H-8),2.66 (t,J= 7.2 Hz,2H,H-7);13C NMR (125 MHz,CDCl3)δC:131.9 (s,C-1),117.2 (d,C-2),144.2 (s,C-3),146.7 (s,C-4),116.4 (d,C-5),121.4 (d,C-6),39.7 (t,C-7),67.0 (t,C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道一致，鑒定其為羥基酪醇(hydroxytyrosol)。

化合物5為黃色粉末，分子式C9H12O3，1H NMR (400 MHz,CDCl3)δH:7.03 (d,J= 8.0 Hz,1H,H-5),7.06 (d,J= 2.0 Hz,1H,H-2),6.77 (dd,J= 8.0 Hz,2.0 Hz,1H,H-6),3.90 (t,J= 6.4 Hz,2H,H-8),2.85 (t,J= 6.4 Hz,2H,H-7),3.95 (s,3H,OCH3);13C NMR (100 MHz,CDCl3)δC:130.4 (s,C-1),111.7 (d,C-2),146.7 (s,C-3),144.4 (s,C-4),114.6 (d,C-5),121.7 (d,C-6),38.9 (t,C-7),63.9 (t,C-8),56.0 (q,OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道一致，鑒定其為高香草醇(homovanillyl alcohol)。

化合物6為白色晶體，分子式C3H7O2N。1H NMR (400 MHz,(CD3)2CO)δH:4.24 (q,J= 6.8,1H,H-2),1.35 (d,J= 6.8 Hz,3H,H-3);13C NMR (100 MHz,(CD3)2CO)δC:177.5 (s,C-1),67.8 (d,C-2),21.5 (t,C-3)，以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，鑒定其為2-羥基丙酰胺(2-hydroxy propionamide)。

化合物7為淡綠色油狀物，分子式為C36H70O2，1H NMR (400 MHz,CDCl3)δH:4.15 (d,J= 5.6 Hz,2H,H-1),5.39 (t,J= 5.6 Hz,1H,H-2),2.34 (t,J= 5.6 Hz,2H,H-2'),2.00 (m,2H,H-4),1.67 (s,3H,H-3a);13C NMR (100 MHz,CDCl3)δC:176.2 (s,C-1'),36.8 (t,C-2'),14.2 (q,C-16'),63.3 (t,C-1),123.3 (d,C-2),140.5 (s,C-3),40.0 (t,C-4),25.3 (t,C-5),36.8 (t,C-6),32.9 (d,C-7),37.5 (t,C-8),24.6 (t,C-9),37.6 (t,C-10),32.9 (d,C-11),37.5 (t,C-12),25.0 (t,C-13),39.6 (t,C-14),28.1 (d,C-15),22.8 (d,C-16,C-15a),16.3 (q,C-3a),19.9 (q,C-7a,11a)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道一致，鑒定其為棕櫚酸葉綠酯(phytyl palmitate)。

3 討論

富含生物堿是唐松草屬植物的一個(gè)重要特征。文獻(xiàn)報(bào)道從唐松草屬植物中分離的生物堿已超過(guò)200個(gè)，其中尤以芐基四氫異喹啉類(lèi)生物堿最為豐富。該類(lèi)化合物具有廣泛的生理活性，如抗菌、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗氧化等[13-15]。小檗堿是該類(lèi)成分的代表性化合物，目前臨床藥用于細(xì)菌性痢疾和炎癥[16]。唐松草屬植物中已有十余種發(fā)現(xiàn)含有小檗堿，這也是唐松草屬植物能夠作為黃連替代藥材的物質(zhì)基礎(chǔ)[17]。本研究從偏翅唐松草中分離得到3個(gè)芐基四氫異喹啉類(lèi)生物堿(1-3)，其中包括小檗堿，進(jìn)一步確定偏翅唐松草中的主要成分為小檗堿等芐基四氫異喹啉類(lèi)生物堿，為其藥用特別是作為黃連替代藥材使用提供了科學(xué)依據(jù)。此外，tetrahydroisoquinoline此前僅見(jiàn)于人工合成報(bào)道[7]，在本研究中首次從植物資源中分離得到。

除生物堿外，唐松草屬植物還含三萜、甾體、黃酮、酚酸、不飽和脂肪酸等多種生物活性成分。文獻(xiàn)報(bào)道部分非生物堿類(lèi)成分也可能是該屬植物的重要藥效成分，故探索其非生物堿類(lèi)成分也具有重要意義[18]。偏翅唐松草的研究以往集中于生物堿方面，未見(jiàn)關(guān)于非生物堿成分的報(bào)道。本研究從偏翅唐松草首次分離得到酚酸、酰胺、不飽和脂肪酸等化合物，進(jìn)一步豐富了偏翅唐松草的化學(xué)組成，有助于闡明偏翅唐松草的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，促進(jìn)我國(guó)這一特色藥用資源深入開(kāi)發(fā)與利用。