TERC基因、HPVL1蛋白在宮頸癌篩查中的應用研究

宋明慧

目前，宮頸癌是唯一一種能夠預防、降低病死率和早期治愈[1]的癌癥，我國每年有約14萬新發(fā)病例，占全球新發(fā)病例總數的三分之一[2]。高危人乳頭瘤病毒(human papilloma virus,HPV)是致病主要病因，越來越多的學者關注HPV相關的基因、蛋白的異常表達，染色體端粒酶RNA基因(human telomerase gene,TERC)擴增能夠阻止細胞凋亡，導致宮頸病變[3]。人乳頭瘤病毒蛋白L1(human papilloma virus protein L1,HPVL1)是HPV結構蛋白，當HPV感染后HPVL1表達缺失，宿主無法對其進行識別，不能產生抗體，也不能及時清除，導致腫瘤發(fā)生[4-5]。雖然TCT、HPV檢測互補了低敏感度、低特異度的缺點，但是為了了解感染HPV后的發(fā)展趨勢，進行風險評估，本研究探討TERC、HPVL1在篩查宮頸癌中的應用價值。

對象與方法

1.研究對象：2015年9月—2017年9月在我院婦科門診體檢有性生活的女性1 280例，排除妊娠期、月經期、激素治療史、宮頸手術史，均進行宮頸癌TCT篩查、HPV檢測。研究對象年齡(21～62)歲，平均(39.3±4.5)歲，TCT篩查、HPV、TERC、HPVL1檢測中任一項陽性結果者均進行陰道鏡下活檢及病理學診斷，以病理結果為金標準。

2.方法

(1)標本采集：研究對象禁止性生活、禁浴及陰道沖洗24 h，毛刷在宮頸口順時針方向轉動3～5周，分別用于TCT、HPV、TERC基因、HPVL1蛋白檢測。

(2)TCT檢測：新柏氏2000全自動制片機(美國賽迪公司生產，型號ThinPrep 2000)處理，固定、染色，顯微鏡下閱片。

(3)HPV檢測：采用TM導流雜交檢測HPV-DNA，按照核酸分子快速雜交試劑盒說明(香港凱普生物公司)，檢測高危HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304)和低危HPV(6、11、42、43、44)。高危位點出現(xiàn)藍色為HPV陽性。

(4)TERC基因檢測：采用熒光原位雜交FISH技術(北京金菩嘉科技公司)，顯微鏡下每例觀察100個雜交信號強的細胞，正常細胞核為紅綠色信號各2個，而TERC基因異常擴增時紅色、綠色信號分別大于2個。計算閾值=(異常細胞平均數+3×標準差)×100%。本研究對50例健康者宮頸細胞進行FISH檢測，計算實驗閾值為6%。因此檢測閾值結果>6%，為TERC基因陽性；若=6%，需要增加細胞數量進行檢測；若<6%為陰性。

(5)HPVL1蛋白檢測：采用免疫組化法(美國愛迪旺斯醫(yī)療公司)人乳頭瘤病毒檢測試劑盒，細胞核出現(xiàn)紅色為HPVL1陽性。

(6)陰道鏡活檢：暴露宮頸，進行醋酸白試驗、碘試驗，在陽性部位活檢，深度達到宮頸上皮基底層，置于甲醛液中固定，行病理檢查。

3.統(tǒng)計學分析：采用SPSS 17.0分析，各組間敏感度、特異度比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結果

1.TCT結果：1280例中，TCT異常者占25.2%(323/1 280)，包括非典型鱗狀上皮細胞14.2%(182/1 280)，低度鱗狀上皮病變8.2%(105/1 280)，高度鱗狀上皮病變2.8%(36/1 280)。HPV檢測結果顯示：1280例中HPV陽性者22.3%(286/1 280)，包括低危感染者1.0%(13/1 280)，高危感染者20.9%(267/1 280)，混合感染者0.5%(6/1 280)。TERC陽性者7.0%(90/1 280)，HPVL1陽性者4.7%(60/1 280)。

2.陰道鏡活檢結果：TCT、HPV檢查結果任一異常者進行陰道鏡下活檢462例(36.1%)，病理結果：宮頸炎癥20%(256/1 280)，宮頸病變16.1%(206/1 280)。病變包括：CINⅠ5.3%(68/1 280)，CINⅡ5.9%(76/1 280)，CINⅢ3.9%(51/1 280)，鱗狀細胞癌(SCC)0.8%(11/1 280)。

3.診斷性試驗結果：聯(lián)合篩查中TCT+HPV+TERC或HPVL1的約登指數最高，真實性最好。各種篩查方法指標見表1。

表1 不同篩查方法的篩查指標分析

4.宮頸癌TCT、HPV的表達:隨著宮頸惡變嚴重程度增加，TCT、HPV陽性表達率上升，Normal、CINⅠ期、CINⅡ期、CINⅢ期、SCC各組間TCT、HPV陽性表達率比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 宮頸癌TCT、HPV的表達

5.宮頸癌TERC、HPVL1的表達：隨著宮頸惡變的嚴重程度增加，TERC基因檢測陽性率上升，HPVL1蛋白陽性表達下降，Normal、CINⅠ期、CINⅡ期、CINⅢ期、SCC各組間TERC、HPVL1陽性表達率分別比較 (P<0.05),見表3。

表3 宮頸癌TERC、HPVL1的表達

注：與HPVL1陽性率比較，*P<0.05

討論

宮頸癌篩查中TCT、HPV初篩敏感度較高，假陽性率高，因此HPV陽性患者需要分流檢測，提高宮頸癌篩查率。僅9%的患者HPV感染持續(xù)2年以上，臨床醫(yī)生進行風險評估及準確的治療，可以減少宮頸癌的發(fā)生[6-7]。HPVL1蛋白陽性表達具有誘發(fā)免疫細胞產生抗體清除感染細胞，但是當HPV病毒整合到宿主細胞基因中，造成HPVL1殼蛋白表達缺損，宿主細胞不能產生抗體、無法識別并清除病變細胞，因此HPVL1蛋白可預測感染細胞的趨勢[8]。有研究[9-10]指出，在宮頸癌組織及轉移組織中TERC陽性表達隨腫瘤期級別升高而增加。因此TERC基因是評價預后的指標。①TERC基因檢測鑒別診斷宮頸癌病變的高度、低度準確率達90%[14]，可以預測轉歸。②對宮頸病變治療后的效果評估。③對宮頸癌術后患者，早期預測復發(fā)及轉移情況。

本研究結果顯示，隨著CIN病變加重，TERC基因檢測陽性率增加，本研究結果與馬玉蘭等[11]結果一致。本研究中TERC基因陽性85例(76例宮頸病變)，特異度較高，因此將TERC作為預測宮頸癌指標。本研究結果表明，隨著CIN病變加重，HPVL1蛋白陽性表達下降，說明免疫抗體減少，細胞免疫反應減少，高危HPV持續(xù)感染，則發(fā)生CIN、宮頸癌的幾率增加，因此將HPVL1蛋白作為預測感染的趨勢。本研究結果發(fā)現(xiàn)①單獨檢測TCT敏感度較高，但是特異度較低，考慮慢性炎癥刺激導致假陽性。②單獨檢測HPV特異性較低，考慮多數女性有一過性感染導致假陽性。③TERC、HPVL1單獨檢測時，敏感度低，但特異度較高，說明TERC、HPVL1單獨使用有局限性；若TERC、HPVL1分別聯(lián)合TCT或HPV檢測時靈敏度提高，但約登指數無明顯變化。④TCT聯(lián)合HPV檢測時，敏感度、特異度比單獨使用時均提高，約登指數較高。⑤TCT聯(lián)合HPV，聯(lián)合TERC或HPVL1檢測時，敏感度明顯提高，約登指數最高，說明此時真實性較好、準確性較好，但由于TERC、HPVL1檢測成本較高，因此在經濟條件允許情況下，建議TCT或HPV任一陽性患者均進行TERC、HPVL1檢測評估病變風險，能夠指導臨床分流管理及治療。

綜上所述，HPV陽性檢測分流時，HPVL1能較好地預測宮頸癌變的情況；TERC能夠診斷宮頸癌的病變程度及預后情況。TCT+HPV聯(lián)合TERC或HPVL1檢測時，特異性及約登指數最高，可準確地預測宮頸癌發(fā)生發(fā)展情況。