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    三陰性乳腺癌組織hMLH-1、Ki-67 表達(dá)水平以及雄激素水平與其生物學(xué)行為的關(guān)系分析

    2018-09-10 08:02:02何慧君歐陽(yáng)翠雯潘小梅
    現(xiàn)代醫(yī)院 2018年8期
    關(guān)鍵詞:睪酮雄激素陰性

    何慧君 歐陽(yáng)翠雯 潘小梅

    乳腺癌為嚴(yán)重威脅女性健康和生命安全的惡性腫瘤,其中三陰性乳腺癌是特殊類型的乳腺癌,其預(yù)后相對(duì)較差,易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,治療效果和預(yù)后情況欠佳[1-2]。因此,改善三陰性乳腺癌療效和預(yù)后仍為目前亟待解決的難題,而通過相關(guān)基因分析尋找其理想治療靶點(diǎn)有助于明確其發(fā)生發(fā)展機(jī)制并進(jìn)行相關(guān)藥物研發(fā),從而改善療效和預(yù)后。乳腺癌的發(fā)生發(fā)展涉及多個(gè)遺傳基因的調(diào)控。人類錯(cuò)配修復(fù)基因1(hMLH-1)、增殖細(xì)胞核抗原(Ki-67)等均已被證實(shí)與乳腺癌密切相關(guān)[3-4]。且有研究表明,乳腺癌患者可存在雄激素及其受體表達(dá)異常[5]。因此推斷hMLH-1、Ki-67、雄激素等可能影響三陰性乳腺癌發(fā)生發(fā)展,因此,本研究檢測(cè)了三陰性乳腺癌組織hMLH-1、Ki-67 、雄激素表達(dá)情況并分析了其與生物學(xué)行為的關(guān)系,報(bào)告如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    以2014年1月—2017年6月我院收治的三陰性乳腺癌患者45例為研究組,并以同期30例非三陰性乳腺癌患者為對(duì)照A組和30例乳腺良性增生手術(shù)治療患者為對(duì)照B組。納入標(biāo)準(zhǔn):三組均經(jīng)術(shù)后病理檢查確診,均首次確診患病,均為女性,年齡18~70歲,入組前位經(jīng)其他相關(guān)治療。排除標(biāo)準(zhǔn):合并其他內(nèi)外科疾病,合并精神異常,哺乳期或孕期女性。三組均無患者排除。研究符合倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn),經(jīng)院倫理學(xué)委員會(huì)審核批準(zhǔn),且三組入組前均簽署了知情同意書。三組年齡、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、血壓、心率等基線資料比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),具有可比性。見表1。

    表1 三組基線資料比較

    1.2 觀察指標(biāo)和檢測(cè)方法

    三組均取活檢病變組織進(jìn)行hMLH-1、Ki-67蛋白以及雄激素睪酮表達(dá)水平的檢測(cè),所有待檢測(cè)組織均預(yù)先制成石蠟包埋塊,檢測(cè)前將石蠟包埋塊切制成厚度為4 μm的連續(xù)切片,切片在烤片機(jī)上烤2 h后放置在60 ℃恒溫箱中過夜,將切片在二甲苯中浸泡脫蠟,然后依次在100%、95%、90%、85%和80%酒精中浸泡脫水。將待檢測(cè)玻片放在含枸緣酸抗原修復(fù)液的高壓鍋中煮沸修復(fù)2 min,自然冷卻后重復(fù)抗原修復(fù)3次,以3%過氧化氫溶液浸泡,滴加相應(yīng)檢測(cè)單克隆抗體,在4 ℃冰箱中孵育12 h,滴加二抗并在25 ℃恒溫箱中孵育30 min,滴加DAB顯色劑,在顯微鏡下觀察3 min后終止染色,蘇木精復(fù)染后行氨水返藍(lán),再次進(jìn)行梯度酒精(80%、85%、90%、95%、100%)脫水后采用二甲苯透明,以中性樹膠進(jìn)行封片,干燥后在顯微鏡下觀察染色情況。隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野觀察,以出現(xiàn)黃色或棕黃色染色為陽(yáng)性,雄激素睪酮、Ki-67、hMLH-1蛋白染色均定位于細(xì)胞核。所有組織檢測(cè)操作后均由2位醫(yī)師閱片,共同商議后給出最終檢測(cè)結(jié)果。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 22.0軟件,計(jì)數(shù)資料比較采用卡方檢驗(yàn),多組計(jì)量資料比較采用方差分析,進(jìn)一步兩兩比較采用q檢驗(yàn),采用Logistic多元回歸分析法分析研究組乳腺癌組織hMLH-1、Ki-67蛋白以及雄激素睪酮表達(dá)水平與其最大腫瘤直徑、臨床分期、轉(zhuǎn)移率等生物學(xué)行為指標(biāo)的關(guān)系,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 三組檢測(cè)組織hMLH-1、Ki-67、睪酮表達(dá)水平比較

    與對(duì)照B組比較,研究組和對(duì)照A組乳腺癌組織hMLH-1陽(yáng)性表達(dá)率降低而Ki-67和雄激素睪酮陽(yáng)性表達(dá)率升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。研究組和對(duì)照A組乳腺癌組織hMLH-1、Ki-67和雄激素睪酮陽(yáng)性表達(dá)率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

    表2 三組檢測(cè)組織hMLH-1、Ki-67、睪酮表達(dá)水平比較 n(%)

    注:與對(duì)照B組比較,1)P<0.05,2)研究組與對(duì)照A組比較

    2.2 研究組病情分析

    研究組最大腫瘤直徑<2 cm、2~5 cm和>5 cm患者分別有22.22%(10/45)、57.78%(26/45)和20.00%(9/45);臨床分期為Ⅰ、Ⅱ分期和Ⅲ、Ⅳ分期分別有35.56%(16/45)和64.44%(29/45);淋巴轉(zhuǎn)移、骨轉(zhuǎn)移、臟器轉(zhuǎn)移分別有24.44%(11/45)、13.33%(6/45)和11.11%(5/45),總轉(zhuǎn)移率為48.89%(22/45)。

    2.3 研究組不同病情患者乳腺癌組織hMLH-1、Ki-67、睪酮表達(dá)水平比較

    與研究組最大腫瘤直徑<2 cm患者比較,其最大腫瘤直徑為2~5 cm和>5 cm患者的乳腺癌組織hMLH-1陽(yáng)性表達(dá)率降低而Ki-67和雄激素睪酮陽(yáng)性表達(dá)率升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與研究組最大腫瘤直徑為2~5 cm患者比較,研究組最大腫瘤直徑>5 cm患者乳腺癌組織hMLH-1陽(yáng)性表達(dá)率降低而Ki-67和雄激素睪酮陽(yáng)性表達(dá)率升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。研究組臨床分期為Ⅰ、Ⅱ分期患者和臨床分期為Ⅲ、Ⅳ分期患者乳腺癌組織hMLH-1、Ki-67和雄激素睪酮陽(yáng)性表達(dá)率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。研究組出現(xiàn)轉(zhuǎn)移和無轉(zhuǎn)移患者乳腺癌組織hMLH-1、Ki-67和雄激素睪酮陽(yáng)性表達(dá)率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

    表3 研究組不同病情患者乳腺癌組織hMLH-1、Ki-67、睪酮表達(dá)水平比較

    2.4 三陰性乳腺癌組織hMLH-1、Ki-67和雄激素睪酮表達(dá)水平與其病情的關(guān)系分析

    Logistic多元回歸分析結(jié)果顯示,三陰性乳腺癌組織hMLH-1、Ki-67和雄激素睪酮表達(dá)水平與其大腫瘤直徑密切相關(guān)(P<0.05),與其臨床分期、轉(zhuǎn)移情況則無明顯關(guān)系(P>0.05)。見表4。

    表4 三陰性乳腺癌組織hMLH-1、Ki-67和雄激素睪酮表達(dá)水平與其病情的關(guān)系

    3 討論

    乳腺癌在臨床發(fā)病率較高,其惡性程度高,治療困難,預(yù)后較差,其中尤其以三陰性乳腺癌為其治療困難點(diǎn)[6-7]。本研究亦關(guān)注三陰性乳腺癌病情,研究結(jié)果顯示三陰性乳腺癌組最大腫瘤直徑多數(shù)在2~5 cm,而最大腫瘤直徑>5 cm患者分比例亦高達(dá)1/5,其腫瘤體積較大,而臨床分期中Ⅲ、Ⅳ分期超過六成,淋巴轉(zhuǎn)移、骨轉(zhuǎn)移、臟器轉(zhuǎn)移均有發(fā)生,總轉(zhuǎn)移率接近一半,其病情嚴(yán)重,急需及時(shí)有效治療,這與劉加蒙等[8]和Goggins等[9]研究中乳腺癌轉(zhuǎn)移高發(fā)的研究結(jié)論一致。

    乳腺癌的發(fā)生發(fā)展受到多個(gè)抑癌基因和致癌基因的影響,其中Ki-67已被多個(gè)研究證實(shí)參與乳腺癌發(fā)生發(fā)展[10]。而徐玲玉等[11]的研究結(jié)果表明,乳腺癌組織的hMLH-1陽(yáng)性表達(dá)率低于其癌旁組織,提示hMLH-1參與乳腺癌發(fā)生發(fā)展。乳腺癌為內(nèi)分泌系統(tǒng)癌癥,被認(rèn)為雌激素、雄激素水平的異常為其重要影響因素[12-13]。本研究亦檢測(cè)了三陰性乳腺癌這一特殊癌癥組織中hMLH-1、Ki-67和雄激素睪酮表達(dá)水平,本研究結(jié)果顯示,三陰性乳腺癌組織中hMLH-1陽(yáng)性表達(dá)率較之乳腺良性增生出現(xiàn)明顯降低,但與普通乳腺癌無明顯差異,而其乳腺癌組織中Ki-67和雄激素睪酮表達(dá)水平則較之乳腺良性增生出現(xiàn)明顯升高,與普通乳腺癌相比亦無明顯差異,提示hMLH-1、Ki-67和雄激素在三陰性乳腺癌中具有重要作用,這與前人研究結(jié)果均一致,其在三陰性乳腺癌和普通乳腺癌中的作用機(jī)制可能無明顯差異,關(guān)于三者在普通乳腺癌中的研究成果可能同樣適用于三陰性乳腺癌,但這點(diǎn)尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。

    hMLH-1、Ki-67和雄激素影響三陰性乳腺癌發(fā)生發(fā)展,則可能與其生物學(xué)行為相關(guān)。本研究中,不同最大腫瘤直徑三陰性乳腺癌患者乳腺癌組織hMLH-1、Ki-67和雄激素睪酮陽(yáng)性表達(dá)率均具有較大差異,提示hMLH-1、Ki-67和雄激素可能影響三陰性乳腺癌發(fā)生發(fā)展,而進(jìn)一步的Logistic多元回歸分析結(jié)果證實(shí)了三陰性乳腺癌組織hMLH-1、Ki-67和雄激素睪酮表達(dá)水平與其大腫瘤直徑密切相關(guān)。而本研究中不同腫瘤臨床分期和癌癥轉(zhuǎn)移情況的三陰性乳腺癌患者乳腺癌組織hMLH-1、Ki-67和雄激素睪酮陽(yáng)性表達(dá)率無明顯差異,而Logistic多元回歸分析亦證實(shí)三者與其臨床分期、轉(zhuǎn)移情況無明顯關(guān)系,提示hMLH-1、Ki-67和雄激素可能單純通過影響腫瘤增殖和凋亡而影響三陰性乳腺癌發(fā)生發(fā)展,但在侵襲轉(zhuǎn)移方面的影響不大,但這點(diǎn)尚需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)。

    綜上所述,hMLH-1、Ki-67和雄激素均可影響三陰性乳腺癌發(fā)生發(fā)展,但其在癌癥轉(zhuǎn)移中似乎作用不大,尚需進(jìn)一步研究探討。

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