腫瘤微環(huán)境刺激響應型葉酸靶向前體藥物研究

李鵬熙 萬川 陳本壽 李東紅

摘 要 目的：為腫瘤微環(huán)境刺激響應型葉酸靶向前體藥物的設計提供參考。方法：以“Folate-targeted”“Tumor microenvironment”“Stimuli-responsive”“Intracellular release”等為關鍵詞，組合查詢2000年1月-2018年3月在ACS、ScienceDirect、PubMed等數(shù)據(jù)庫中的相關文獻，從pH刺激響應型、還原刺激響應型、酶刺激響應型、缺氧刺激響應型等4個方面對腫瘤微環(huán)境刺激響應型葉酸靶向前體藥物的研究進行論述。結(jié)果與結(jié)論：共檢索到相關文獻138篇，其中有效文獻57篇。腫瘤細胞的代謝異常，導致腫瘤細胞內(nèi)的微環(huán)境與正常細胞表現(xiàn)出顯著差異，如弱酸性、強還原性、酶的過度表達、缺氧等。刺激響應型葉酸靶向前體藥物通過葉酸受體介導的內(nèi)吞進入腫瘤細胞，在腫瘤細胞內(nèi)獨特的微環(huán)境的作用下釋放藥物，從而達到診斷、靶向治療腫瘤的目的。基于腫瘤微環(huán)境的刺激響應型葉酸靶向前體藥物，借助葉酸的主動靶向，可解決抗腫瘤藥物的靶向性不足、穩(wěn)定性差、無法實現(xiàn)藥物定位釋放和控制釋藥速度等難題。但是，單一地依靠腫瘤微環(huán)境的靶向治療，容易引發(fā)腫瘤的代償機制，導致腫瘤復發(fā)和轉(zhuǎn)移。在應用過程中，刺激響應型葉酸靶向前體藥物也出現(xiàn)了一些問題，如耐藥性、水溶性差、藥物活性受到影響等。未來刺激響應型葉酸靶向前體藥物的研究方向包括加強多重刺激響應型前體藥物的研究，如pH/還原、還原/缺氧、pH/溫度/磁場等多重刺激；將診斷和治療藥物連接到同一刺激響應型前體藥物中，可實現(xiàn)治療和診斷的一體化；進行多靶點聯(lián)合治療，可提高靶向性，降低毒副作用；基于腫瘤的微環(huán)境，設計開發(fā)新型敏感基團，可提高藥物活性和定位釋放。

關鍵詞 腫瘤微環(huán)境；葉酸靶向；前體藥物；細胞內(nèi)釋藥；釋藥機制

中圖分類號 R914.1 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2018）21-3018-07

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.21.31

藥物治療是當今臨床治療腫瘤的重要手段之一。目前，約有80余種抗腫瘤藥物用于臨床，但均存在一定的副作用[1]?？鼓[瘤藥物副作用的產(chǎn)生主要是由抗腫瘤藥物的靶向性不足、水溶性差、腫瘤組織滲透性差等原因而引起[2]。腫瘤組織由于腫瘤細胞代謝旺盛，分裂與增殖失控，生理特征與正常細胞顯著不同：（1）弱酸性環(huán)境。腫瘤細胞內(nèi)溶酶體（pH 4.5～5.0）、內(nèi)涵體（pH 5.5～6.0）[3-4]、細胞外微環(huán)境（pH 6.5～7.2）等都屬于弱酸性環(huán)境。（2）酶過度表達。胞內(nèi)組織蛋白酶B（CaB）和胞外基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9以及α-淀粉酶等過度表達。（3）高還原性環(huán)境。腫瘤細胞的谷胱甘肽（GSH）是正常細胞的7～10倍。（4）缺氧。腫瘤細胞的異常增殖，使得腫瘤細胞內(nèi)的氧供應遠低于細胞生長代謝需要，導致腫瘤微環(huán)境缺氧[3-6]。刺激響應型藥物是指能夠根據(jù)其所處的環(huán)境做出特定響應的藥物?；谀[瘤組織獨特的微環(huán)境，設計腫瘤微環(huán)境刺激響應型藥物，如刺激響應型納米粒、微囊、高分子-藥物偶聯(lián)物、前體藥物等，可有望解決腫瘤藥物的靶向性不足、水溶性差、滲透性低等缺點[7-8]。

然而，隨著人們的研究深入，亦發(fā)現(xiàn)利用腫瘤微環(huán)境設計的藥物仍存在諸多缺陷，如穩(wěn)定性不足、無法透過生理屏障、在藥物釋放位置無選擇性、釋放速度不受控制等[9]。而刺激響應型藥物大部分采用腫瘤細胞外獨特微環(huán)境的被動靶向，這使得藥物無法在靶點區(qū)域達到有效濃度，即無治療效果，進而阻礙了刺激響應型藥物在抗腫瘤中的進一步應用[10]。

葉酸（FA）又名維生素B9，是細胞增殖必不可少的一種維生素。哺乳動物細胞內(nèi)缺乏合成葉酸的酶，細胞的生長必須依賴從外界獲取葉酸，而葉酸本身很難自由穿過細胞膜。大部分哺乳動物通過低親和力的跨膜蛋白轉(zhuǎn)運和葉酸受體（FR）介導的內(nèi)吞作用吸收葉酸。FR對葉酸表現(xiàn)出高親和力，并在正常組織中低表達，腫瘤細胞中高表達。葉酸靶向藥物通過FR介導的內(nèi)吞作用，可以增加抗腫瘤藥物的靶向性，降低抗腫瘤藥物在正常組織中的分布，減少不良反應的發(fā)生[11-13]。腫瘤細胞內(nèi)外微環(huán)境以及FR介導的內(nèi)吞作用示意圖見圖1。

前體藥物是指藥物經(jīng)過化學結(jié)構修飾，得到的在體外無活性或活性較小、體內(nèi)經(jīng)轉(zhuǎn)化釋放出活性藥物而發(fā)揮藥效的化合物[14]。在前體藥物設計合成中，藥物的結(jié)構發(fā)生改變，會影響藥物藥效的發(fā)揮?；谌~酸的靶向性和腫瘤細胞內(nèi)微環(huán)境的特點，引入胞內(nèi)刺激響應型敏感化學鍵，設計胞內(nèi)刺激響應型葉酸靶向前體藥物，可有望解決抗腫瘤藥物的靶向性不足、穩(wěn)定性差、無法實現(xiàn)藥物定位釋放和控制釋藥速度等難題[15-16]。胞內(nèi)刺激響應型葉酸靶向前體藥物應具有以下特點：（1）生理條件下具有一定的穩(wěn)定性。（2）腫瘤細胞內(nèi)能快速釋放藥物。（3）主動靶向遞藥。近年來，在該領域已經(jīng)取得較大的研究進展。目前，關于腫瘤微環(huán)境刺激響應型葉酸靶向前體藥物的研究多見于國外文獻。筆者以“Folate-targeted”“Tumor microenvironment”“Stimuli-responsive”“Intracellular release”等為關鍵詞，組合查詢2000年1月-2018年3月在ACS、ScienceDirect、PubMed等數(shù)據(jù)庫中的相關文獻。結(jié)果，共檢索到相關文獻138篇，其中有效文獻57篇。現(xiàn)從pH刺激響應型、還原刺激響應型、酶刺激響應型、缺氧刺激響應型等4個方面對腫瘤微環(huán)境刺激響應型葉酸靶向前體藥物的研究進行論述，以期為腫瘤微環(huán)境刺激響應型葉酸靶向前體藥物的設計提供參考。刺激響應型葉酸靶向前體藥物設計示意圖見圖2。

1 pH刺激響應型葉酸靶向前體藥物

由于腫瘤組織的代謝異常，導致腫瘤組織的pH低于血液和正常組織，特別是腫瘤細胞內(nèi)的溶酶體（pH 4.5～5.0）和內(nèi)涵體（pH 5.5～6.0）[3-4]。pH刺激響應型葉酸靶向前體藥物利用腫瘤組織和正常組織的pH差異，將抗腫瘤藥物靶向定位于腫瘤組織，通過FR介導的內(nèi)吞作用進入腫瘤細胞，完成快速釋藥，達到治療腫瘤的目的。pH刺激響應型葉酸靶向前體藥物的pH敏感鍵，能穩(wěn)定存在于生理pH中，在弱酸性（pH 4.0～6.0）中能斷裂，釋放藥物。筆者整理文獻[17-27]，將常用的pH敏感鍵及其化學結(jié)構、降解產(chǎn)物和敏感pH范圍進行歸納，結(jié)果見表1。

與納米載藥系統(tǒng)、高分子藥物載體比較，小分子藥物靶向遞送系統(tǒng)（<2 000 Da）具有良好的穿透性、長循環(huán)、靶向性等特點，有著巨大的潛在臨床應用價值[28]。多柔比星（DOX）是一種抗腫瘤抗生素，可抑制RNA 和DNA的合成，抗瘤譜較廣，對胃癌、肝癌、前列腺癌等多種腫瘤均有抑制作用[29]。Ye WL等[29]以氨基乙酸（AMA）為連接基團，葉酸作為靶向基團，腙鍵為pH敏感鍵，制備了前體藥物1（FA-AMA-DOX），用于化療藥物的靶向遞送。該研究發(fā)現(xiàn)，在pH為5.0條件下，放置2 h，F(xiàn)A-AMA- DOX中DOX的釋放達到85%；在pH為7.4條件下，放置2 h，DOX的釋放只有15%，表明在前體藥物中引入腙鍵，可實現(xiàn)在弱酸性（pH=5.0）條件下的藥物釋放。生物活性研究發(fā)現(xiàn)，相同濃度下，與DOX比較，F(xiàn)A-AMA-DOX在FR陽性人口腔表皮樣癌細胞（KB細胞）中的熒光強度較強，表明FA-AMA-DOX在FR陽性KB細胞中的富集程度更高。在相同濃度下，F(xiàn)A-AMA-DOX對FR陽性人肺腺癌A549細胞的細胞毒性，與DOX比較，并未降低。

Leamon CP等[30]利用FR介導的靶向，以長春堿類衍生物DAVLBH為母體藥物，腙鍵作為pH敏感鍵，葉酸作為靶向基團，設計合成了前體藥物2（FA-DAVLBH）。藥物釋放研究發(fā)現(xiàn)，在pH為5.0、37 ℃條件下，F(xiàn)A-DAVLBH的溶液中藥物濃度降至一半所需的時間（t1/2）為5.5 h；在pH為7.4、37 ℃條件下，F(xiàn)A-DAVLBH的t1/2為22 h，表明FA-DAVLBH在pH為5.0的條件下，能實現(xiàn)藥物的釋放。體外試驗發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)A-DAVLBH對FR陽性細胞具有較強的親和力，并具有較強的細胞毒性，多肽作為連接基團，增加了藥物的溶解性。

利用p-甲氧基苯亞甲基乙縮醛（ACA）作為pH敏感基團，Yang J等[31]制備了前體藥物3（DAVLBH-ACA-FA，EC193），釋放研究發(fā)現(xiàn)，在pH為5.0、37 ℃條件下，EC193的t1/2為25 min；pH為7.4、37 ℃條件下，EC193的 t1/2為16 h，表明EC193在弱酸性（pH=5.0）條件下，能較快釋放藥物，且能較穩(wěn)定地存在于生理pH（pH=7.4）條件下。生物活性試驗卻發(fā)現(xiàn)，EC193并不具有藥物活性，但EC193的釋藥速度大于FA-DAVLBH。前體藥物1～3的結(jié)構示意圖見圖3。

在pH敏感型的葉酸靶向藥物設計中，除表1所列舉的常用pH敏感鍵外，還有pH敏感多肽、pH敏感聚合物（陽離子聚合物、陰離子聚合物）、pH敏感咪唑衍生物（如N-乙氧基芐醇咪唑）等。pH刺激響應型的葉酸靶向前體藥物，通過FR介導的內(nèi)吞作用進入腫瘤細胞，pH敏感基團要在腫瘤細胞內(nèi)pH條件下（4.5～6.5）完成斷裂，釋放藥物，有望改善藥物的治療效果。pH敏感鍵通過共價鍵的形式與抗腫瘤藥物相結(jié)合，會引起藥物的活性發(fā)生改變，甚至會導致藥物失去活性，如EC193。因此，設計新型pH敏感鍵、引入親水基團等將成為未來研究的重點[32-34]。

2 還原刺激響應型葉酸靶向前體藥物

由于腫瘤細胞代謝異常，腫瘤細胞內(nèi)GSH濃度是正常細胞的7～10倍，而在正常細胞內(nèi)的GSH濃度是細胞外的200倍以上，細胞內(nèi)具有較高的還原性[35]。在細胞外，由于GSH濃度較低，雙硫鍵可以穩(wěn)定存在于體液中，如血液、細胞外基質(zhì)。但在腫瘤細胞內(nèi)高還原環(huán)境下，會發(fā)生巰基-二硫鍵交換反應，導致載體中二硫鍵發(fā)生斷裂，釋放藥物[36]。因此，基于腫瘤細胞內(nèi)外還原性差異設計還原刺激響應型葉酸靶向前體藥物，成為人們關注的熱點，并取得了顯著的研究進展[37]。

還原刺激響應型葉酸靶向前體藥物結(jié)構中常用的還原敏感鍵有琥珀酰亞胺-硫醚鍵[37]、二硒鍵[38]、雙硫鍵[39]等。二硒鍵在氧化或還原環(huán)境中均易斷裂，琥珀酰亞胺-硫醚鍵降解速度比雙硫鍵慢。目前報道的還原刺激響應型葉酸靶向前體藥物大多采用雙硫鍵作為還原敏感鍵。筆者整理文獻[40-41]，將常見的還原敏感雙硫鍵化學結(jié)構、釋放機制及降解產(chǎn)物進行歸納，結(jié)果見表2。

Santra S等[42]利用葉酸和DOX，通過巰基-二硫鍵交換反應法，制備了一種含雙硫鍵的葉酸-DOX前體藥物。該研究表明，在FR陽性人肺腺癌A549細胞中，前體藥物4（Doxo-S-S-Fol）通過FR介導的靶向作用，靶向腫瘤細胞并內(nèi)吞進入腫瘤細胞，在GSH作用下釋放出DOX-SH，顯示較強的細胞毒性；而前體藥物5（Doxo- C-C-Fol）可通過FR介導的內(nèi)吞進入腫瘤細胞，但無法釋放藥物母體，無細胞毒性。前體藥物4在小鼠血液中有良好的穩(wěn)定性，t1/2為47 h，具有良好的臨床應用前景。前體藥物4和前體藥物5中的Doxo，是DOX上連接了一個氧原子，將其簡寫為了Doxo，以區(qū)別于DOX。

喜樹堿（CPT）為治療癌癥的傳統(tǒng)中藥，但CPT溶解性差、靶向性不足，限制了其在臨床上的廣泛應用。Reddy JA等[43]以雙硫鍵作為還原敏感鍵，多肽作為親水基團，葉酸作為靶向基團，通過含雙硫鍵活性碳酸酯與巰基交換反應，合成了前體藥物6（葉酸-多肽-CPT）。釋放研究發(fā)現(xiàn)，在二硫蘇糖醇作用下1 h，釋藥率>80%。釋放機制研究表明，雙硫鍵的釋放屬于1，2-釋放機制。細胞試驗表明，葉酸-多肽-CPT對FR陽性KB細胞具有較強的細胞毒性和靶向性。

Vlahov IR等[44]以2-巰基苯甲醇作為連接基團，長春堿類衍生物DAVLBH作為母體藥物，制備了前體藥物7（DAVLBH-Ph-S-S-FA，EC195）。研究表明，EC195在37 ℃、pH為7.4、GSH作用下，t1/2為45 min；小鼠血液中的穩(wěn)定性良好（t1/2>24 h）。釋放機制研究發(fā)現(xiàn)，以2-巰基苯甲醇作為連接基團，釋放機制屬1，6-釋放機制。Vlahov IR等[39]在合成EC195過程中還發(fā)現(xiàn)，引入2-巰基苯甲醇要比2-巰基乙醇困難，導致利用1，6-釋放機制設計合成的還原刺激響應型小分子靶向制劑的研究相對較少。前體藥物4～7的結(jié)構示意圖見圖4。

聚乙二醇（PEG）的引入，改善了前體藥物的水溶性。Li D等[45]以光敏劑間-四羥基苯基卟吩（m-THPC）為母體藥物，葉酸作為靶向基團，制備了一種靶向前體藥物m-THPC-PEG-FA。研究發(fā)現(xiàn)，m-THPC-PEG-FA對腫瘤細胞具有良好的靶向性。細胞試驗表明，m-THPC- PEG-FA具有一定的光毒性，但與母體藥物m-THPC比較，其光毒性有所降低。在前期的研究基礎上，Li D等[46]利用還原敏感的雙硫鍵，又設計合成了一種還原刺激響應型葉酸靶向前體藥物，釋放研究表明，該前體藥物在二硫蘇糖醇（DTT）作用下，可完整釋放母體藥物m-THPC。

目前的研究表明，二硫鍵對還原性環(huán)境敏感的獨特化學性質(zhì)，使還原刺激響應型葉酸靶向前體藥物在腫瘤細胞內(nèi)的還原環(huán)境下，快速分解并釋放藥物，從而提高藥物的水溶性、靶向性和有效性。然而，有關還原刺激響應型葉酸靶向前體藥物的應用研究尚有許多亟待探討解決的問題，如前體藥物在腫瘤細胞內(nèi)釋藥的具體部位尚不清楚、雙硫鍵在細胞內(nèi)斷裂的方式仍存爭議，以及血液及細胞表面存在的巰基可能影響腫瘤細胞對前體藥物的攝取等[47-48]。

3 酶刺激響應型葉酸靶向前體藥物

在腫瘤組織中，腫瘤細胞的調(diào)控失控及基因過表達，導致腫瘤微環(huán)境中某些酶過度表達。筆者整理文獻[31，49-51]，將腫瘤組織中常見的異常表達的酶及其高表達部位和敏感連接基團進行歸納，結(jié)果見表3。

葉酸靶向前體藥物要在腫瘤細胞內(nèi)完成藥物的釋放，必須借助腫瘤細胞內(nèi)過度表達的酶，如CaB和β-葡萄糖醛酸苷酶。CaB在多種腫瘤細胞內(nèi)過度表達，如前列腺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌等。在葉酸靶向前體藥物中，引入CaB敏感的多肽GFLG，得到酶刺激響應型葉酸靶向前體藥物將成為人們研究的重點[51]。

Lee H等[52]利用KCNQ2基因抗體（ATTO655）、纈氨酸（Val）、抗環(huán)瓜氨酸肽（Ccp），設計合成了前體藥物8（ATTO655-Val-Ccp-FA，F(xiàn)SA）。ATTO655在與葉酸-多肽偶聯(lián)時，發(fā)生熒光淬滅；細胞試驗發(fā)現(xiàn)，當前體藥物8通過FR介導的內(nèi)吞進入細胞，并在CaB的作用下釋放出ATTO655時，可激發(fā)ATTO655的熒光特性。通過比較CaB、組織蛋白酶L（CaL）、組織蛋白酶S（CaS）對FSA的影響，發(fā)現(xiàn)FSA在CaB的作用下熒光強度增強3倍，而在CaL、CaS中并未發(fā)現(xiàn)熒光增強。前體藥物8結(jié)構示意圖見圖5。

β-葡萄糖醛酸苷酶，也是一種在腫瘤細胞中過度表達的酶。Yang J等[31]利用葡萄糖苷酸（GD）對β-葡萄糖醛酸苷酶的敏感特性，CPT的衍生物，制備了酶刺激響應型葉酸靶向前體藥物9（FA-GD-CPT）。研究發(fā)現(xiàn)，前體藥物9可通過1，6-釋放機制釋放藥物CPT。血液中的穩(wěn)定性試驗結(jié)果顯示，在14 d、37 ℃下，CPT的釋放<1%，表明FA-GD-CPT在血液中具有良好的穩(wěn)定性。前體藥物9釋放機制見圖6。

4 缺氧刺激響應型葉酸靶向前體藥物

除pH刺激響應型、還原刺激響應型、酶刺激響應型可實現(xiàn)葉酸靶向藥物腫瘤細胞內(nèi)釋放藥物外，缺氧刺激響應型前體藥物也是目前研究的熱點之一。由于腫瘤細胞增殖失控，腫瘤組織中血管尚未成熟，導致腫瘤細胞處于缺氧狀態(tài)。缺氧狀態(tài)下，腫瘤細胞內(nèi)的氧化還原酶則只有還原性。靶向前體藥物在進入腫瘤細胞后，在缺氧狀態(tài)下的氧化還原酶[還原前體藥物如絲裂霉素C、溴代異磷酰胺氮芥（TH302）、吲哚醌（EO9）、細胞色素P450等]的作用下釋放藥物，達到靶向釋藥的目的。常用的缺氧敏感基團有三甲基苯醌類、硝基芳烴類和吲哚醌類。缺氧敏感基團為還原性基團，在腫瘤細胞內(nèi)GSH還原性條件下，缺氧敏感基團無法被還原。因此，在葉酸靶向前體藥物中引入缺氧敏感基團，可實現(xiàn)葉酸靶向前體藥物在腫瘤細胞內(nèi)的定位釋藥[53-55]。還原酶作用下缺氧敏感基團的釋放機制示意圖見圖7。

Bawa KK等[56]利用磷酰胺氮芥（PM）作為抗腫瘤藥物，硝基芳烴（NA）作為缺氧敏感基團，制備了可在腫瘤細胞內(nèi)釋放藥物的缺氧刺激響應型葉酸靶向前體藥物10（FA-PM-NA）。研究發(fā)現(xiàn)，通過FR介導的內(nèi)吞作用，前體藥物10進入腫瘤細胞，并在腫瘤細胞缺氧狀態(tài)氧化還原酶的作用下被還原，釋放PM。與PM比較，前體藥物10的細胞毒性增加了400倍。前體藥物10的結(jié)構示意圖見圖8。

缺氧敏感基團的釋放機制雖已被大量文獻報道，但在葉酸靶向前體藥物設計中的應用相對較少。缺氧狀態(tài)下氧化還原酶只具有還原性，但其仍具有一定專一性，缺氧敏感基團被過度修飾后，無法被還原，限制了其在葉酸靶向前體藥物中的進一步應用。腫瘤細胞缺氧導致腫瘤細胞并非通過氧化磷酸化獲得能量，而是通過糖降解過程獲得能量。該過程中，會產(chǎn)生過量乳酸和二氧化碳（CO2）。此外，腫瘤細胞缺氧還導致腫瘤組織內(nèi)的活性氧（ROS）濃度大于正常組織。目前，ROS刺激響應型藥物已取得較大研究進展，如ROS刺激響應型納米藥物[55]、ROS刺激響應型微球[56]、ROS刺激響應型聚合物等[57]；CO2刺激響應型藥物研究相對較少。

5 結(jié)語

FR在腫瘤組織中的過度表達，可在腫瘤細胞內(nèi)被激活，以FR作為抗腫瘤靶點，成為人們關注的熱點。腫瘤微環(huán)境是腫瘤細胞賴以生存的環(huán)境，彼此相互依存、相互關聯(lián)，其特殊理化性質(zhì)，如pH、缺氧、還原性等，成為腫瘤治療的關鍵靶點。然而，單一的依靠腫瘤微環(huán)境的靶向治療，容易引發(fā)腫瘤的代償機制，導致腫瘤復發(fā)和轉(zhuǎn)移。基于腫瘤微環(huán)境的刺激響應型葉酸靶向前體藥物，借助葉酸的主動靶向，可解決抗腫瘤藥物的靶向性不足、穩(wěn)定性差、無法實現(xiàn)藥物定位釋放和控制釋放藥物速度等難題。在應用過程中，刺激響應型葉酸靶向前體藥物也出現(xiàn)了一些問題，如耐藥性、水溶性差、藥物活性受到影響等。未來刺激響應型葉酸靶向前體藥物的研究方向主要有：（1）多重刺激響應型前體藥物，如pH/還原、還原/缺氧、pH/溫度/磁場等。（2）將診斷和治療藥物連接到同一刺激響應型前體藥物中，實現(xiàn)治療和診斷一體化。（3）多靶點聯(lián)合治療，提高靶向性、降低毒副作用。（4）基于腫瘤的微環(huán)境，設計開發(fā)新型敏感基團，提高藥物活性和定位釋放。

參考文獻

[ 1 ] 王丹丹，朱靜，張偉，等.抗體介導肝靶向抗腫瘤給藥系統(tǒng)的研究進展[J].中國藥房，2018，29（1）：138-140.

[ 2 ] 李劍華.環(huán)境響應性納米給藥系統(tǒng)的研究進展[J].中國藥房，2016，27（25）：3589-3591.

[ 3 ] ZHU YJ，CHEN F. pH-responsive drug-delivery systems[J]. Chem Asian J，2015，10（2）：284-305.

[ 4 ] WOJTKOWIAK JW，VERDUZCO D，SCHRAMM KJ， et al. Drug resistance and cellular adaptation to tumor acidic pH microenvironment[J]. Mol Pharm，2011，8（6）：2032-2038.

[ 5 ] AL-AHMADY Z，KOSTARELOS K. Chemical components for the design of temperature-responsive vesicles as cancer therapeutics[J]. Chem Rev，2016，116（6）：3883- 3918.

[ 6 ] SUNDARRAJ K，RAGHUNATH A，PERUMAL E. A review on the chemotherapeutic potential of fisetin：in vitro evidences[J]. Biomed Pharmacother，2018.DOI：10.1016/j.biopha.2017.10.164.

[ 7 ] JAROCH K，JAROCH A，BOJKO B，et al. Cell cultures in drug discovery and development：the need of reliable in vitro-in vivo extrapolation for pharmacodynamics and pharmacokinetics assessment[J]. J Pharm Biomed Anal，2018.DOI：10.1016/j.jpba.2017.07.023.

[ 8 ] ZHANG L，XUE H，CAO Z，et al. Multifunctional and degradable zwitterionic nanogels for targeted delivery，enhanced MR imaging，reduction-sensitive drug release，and renal clearance[J]. Biomaterials，2011，32（20）：4604- 4608.

[ 9 ] 丁一楠，楊蕊，唐秋莎.環(huán)境響應型智能探針應用于腫瘤治療的研究進展[J].腫瘤，2018，38（1）：63-67.

[10] LIU J，ZHANG B，LUO Z，et al. Enzyme responsive mesoporous silica nanoparticles for targeted tumor therapy in vitro and in vivo[J]. Nanoscale，2015，7（8）：3614-3626.

[11] SUDIMACK J，LEE RJ. Targeted drug delivery via the folate receptor[J]. Adv Drug Deliv Rev，2000，41（2）：147- 162.

[12] XIA W，LOW PS. Folate-targeted therapies for cancer[J]. J Med Chem，2010，53（19）：6811-6824.

[13] QIAO J，DONG P，MU X，et al. Folic acid-conjugated fluorescent polymer for up-regulation folate receptor expression study via targeted imaging of tumor cells[J]. Biosens Bioelectron，2016.DOI：10.1016/j.bios.2015.11.021.

[14] 何亮，李勤耕，田睿.前藥載體研究新進展[J].中國藥房，2007，18（2）：141-143.

[15] KUCEROVA L，DURINIKOVA E，TORO L，et al. Targeted antitumor therapy mediated by prodrug-activating mesenchymal stromal cells[J]. Cancer Lett，2017.DOI：10. 1016/j.canlet.2017.08.016.

[16] ZHANG X，LI X，YOU Q，et al. Prodrug strategy for cancer cell-specific targeting：a recent overview[J]. Eur J Med Chem，2017.DOI：10.1016/j.ejmech.2017.08.010.

[17] FATTAL E，COUVREUR P，DUBERNET C. “Smart” delivery of antisense oligonucleotides by anionic pH-sensitive liposomes[J]. Adv Drug Deliv Rev，2004，56（7）：931-946.

[18] PRABAHARAN M，GRAILER JJ，PILLA S，et al. Amphiphilic multi-arm-block copolymer conjugated with doxorubicin via pH-sensitive hydrazone bond for tumor-targeted drug delivery[J]. Biomaterials，2009，30（29）：5757-5766.

[19] DING C，GU J，QU X，et al. Preparation of multifunctional drug carrier for tumor-specific uptake and enhanced intracellular delivery through the conjugation of weak acid labile linker[J]. Bioconjug Chem，2009，20（6）：1163- 1170.

[20] WANG C，WANG G，WANG Z，et al. A pH-responsive superamphiphile based on dynamic covalent bonds[J]. Chemistry，2011，17（12）：3322-3325.

[21] SZAB? I，MANEA M，ORB?N E，et al. Development of an oxime bond containing daunorubicin-gonadotropin-releasing hormone-Ⅲ conjugate as a potential anticancer drug[J]. Bioconjug Chem，2009，20（4）：656-665.

[22] JIN Y，SONG L，SU Y，et al. Oxime linkage：a robust tool for the design of pH-sensitive polymeric drug carriers[J]. Biomacromolecules，2011，12（10）：3460-3468.

[23] TOMLINSON R，HELLER R，BROCCHINI S，et al. Polyacetal-doxorubicin conjugates designed for pH-dependent degradation[J]. Bioconjug Chem，2003，14（6）：1096- 1106.

[24] WU Y，CHEN W，MENG F，et al. Core-crosslinked pH- sensitive degradable micelles：a promising approach to resolve the extracellular stability versus intracellular drug release dilemma[J]. J Control Release，2012，164（3）：338- 345.

[25] BOOMER JA，QUALLS MM，INEROWICZ HD，et al. Cytoplasmic delivery of liposomal contents mediated by an acid-labile cholesterol-vinyl ether-PEG conjugate[J]. Bioconjug Chem，2009，20（1）：47-59.

[26] LUO S，TAO Y，TANG R，et al. Amphiphilic block copolymers bearing six-membered ortho ester ring in side chains as potential drug carriers：synthesis，characterization，and in vivo toxicity evaluation[J]. J Biomater Sci Polym Ed，2014，25（10）：965-984.

[27] THAMBI T，DEEPAGAN VG，CHANG KY，et al. Synthesis and physicochemical characterization of amphiphilic block copolymers bearing acid-sensitive orthoester linkage as the drug carrier[J]. Polymer，2011，52（21）：4753- 4759.

[28] BAWA KK，OH JK. Stimuli-responsive degradable polylactide-based block copolymer nanoassemblies for controlled/enhanced drug delivery[J]. Mol Pharm，2017，14（8）：2460-2474.

[29] YE WL，TENG ZH，LIU DZ，et al. Synthesis of a new pH-sensitive folate-doxorubicin conjugate and its antitumor activity in vitro[J]. J Pharm Sci，2013，102（2）：530- 540.

[30] LEAMON CP，REDDY JA，VLAHOV IR，et al. Synthesis and biological evaluation of EC140：a novel folate-targeted vinca alkaloid conjugate[J]. Bioconjug Chem，2006，17（5）：1226-1232.

[31] YANG J，CHEN H，VLAHOV IR，et al. Characterization of the pH of folate receptor-containing endosomes and the rate of hydrolysis of internalized acid-labile folate-drug conjugates[J]. J Pharmacol Exp Ther，2007，321（2）：462-468.

[32] KANAMALA M，WILSON WR，YANG M，et al. Mechanisms and biomaterials in pH-responsive tumour targeted drug delivery：a review[J]. Biomaterials，2016.DOI：10. 1016/j.biomaterials.2016.01.061.

[33] WANG Z，DENG X，DING J，et al. Mechanisms of drug release in pH-sensitive micelles for tumour targeted drug delivery system：a review[J]. Int J Pharm，2018，535（1/2）：253-260.

[34] GAO WW， CHAN JM，F(xiàn)AROKHZAD OC. pH-responsive nanoparticles for drug delivery[J]. Mol Pharm，2010，7（6）：1913-1920.

[35] DING C，LI Z. A review of drug release mechanisms from nanocarrier systems[J]. Mater Sci Eng C Mater Biol Appl，2017.DOI：10.1016/j.msec.2017.03.130.

[36] BR?LISAUER L，GAUTHIER MA，LEROUX JC. Disulfide-containing parenteral delivery systems and their redox-biological fate[J]. J Control Release，2014.DOI：10. 1016/j.jconrel.2014.06.012 .

[37] BALDWIN AD，KIICK KL. Reversible maleimide-thiol adducts yield glutathione-sensitive poly（ethylene glycol）-heparin hydrogels[J]. Polym Chem，2013，4（1）：133-143.

[38] MA N，LI Y，XU H，et al. Dual redox responsive assemblies formed from diselenide block copolymers[J]. J Am Chem Soc，2010，132（2）：442-443.

[39] LI J，HUO M，WANG J，et al. Redox-sensitive micelles self-assembled from amphiphilic hyaluronic acid-deoxycholic acid conjugates for targeted intracellular delivery of paclitaxel[J]. Biomaterials，2012，33（7）：2310-2320.

[40] LOO G. Redox-sensitive mechanisms of phytochemical- mediated inhibition of cancer cell proliferation（review）[J]. J Nutr Biochem，2003，14（2）：64-73.

[41] WONG PT，CHOI SK. Mechanisms of drug release in nanotherapeutic delivery systems[J]. Chem Rev，2015，115（9）：3388-3432.

[42] SANTRA S，KAITTANIS C，SANTIESTEBAN OJ，et al. Cell-specific，activatable，and theranostic prodrug for dual-targeted cancer imaging and therapy[J]. J Am Chem Soc，2011，133（41）：16680-16688.

[43] REDDY JA，DORTON R，WESTRICK E，et al. Preclinical evaluation of EC145，a folate-vinca alkaloid conjugate[J]. Cancer Res，2007，67（9）：4434-4442.

[44] VLAHOV IR，LEAMON CP，PARKER MA，et al. Vitamin receptor binding drug delivery conjugates：US， Patent7601332B2[P]. 2009-10-19.

[45] LI D，DIAO J，WANG D，et al. Design，synthesis and biological evaluation of folate-porphyrin：a new photosensitizer for targeted photodynamic therapy[J]. J Porphyr Phthalocya，2010，14（6）：547-555.

[46] LI D，LI P，LIN H，et al. A novel chlorin-PEG-folate conjugate with higher water solubility，lower cytotoxicity，better tumor targeting and photodynamic activity[J]. J Photochem Photobiol B，2013，127（10）：28-37.

[47] VLAHOV IR，LEAMON CP. Engineering folate-drug conjugates to target cancer：from chemistry to clinic[J]. Bioconjug Chem，2012，23（7）：1357-1369.

[48] LEE MH，YANG Z，LIM CW，et al. Disulfide-cleavage- triggered chemosensors and their biological applications[J]. Chem Rev，2013，113（7）：5071-5109.

[49] FOULADI F，STEFFEN KJ，MALLIK S. Enzyme-responsive liposomes for the delivery of anticancer drugs[J]. Bioconjug Chem，2017，28（4）：857-868.

[50] WALTHER R，RAUTIO J，ZELIKIN AN. Prodrugs in medicinal chemistry and enzyme prodrug therapies[J]. Adv Drug Deliv Rev，2017.DOI：10.1016/j.addr.2017.06.013.

[51] SRINIVASARAO M，LOW PS. Ligand-targeted drug delivery[J]. Chem Rev，2017，117（19）：12133-12164.

[52] LEE H，KIM J，KIM H，et al. A folate receptor-specific activatable probe for near-infrared fluorescence imaging of ovarian cancer[J]. Chem Commun（Camb），2014，50（56）：7507- 7510.

[53] LEAMON CP，REDDY JA. Folate-targeted chemotherapy[J]. Adv Drug Deliv Rev，2004，56（8）：1127-1141.

[54] WONG PT，CHOI SK. Mechanisms of drug release in nanotherapeutic delivery systems[J]. Chem Rev，2015，115（9）：3388-3432.

[55] LIU JN，BU W，SHI J. Chemical design and synthesis of functionalized probes for imaging and treating tumor hypoxia[J]. Chem Rev，2017，117（9）：6160-6224.

[56] BAWA KK，OH JK. Stimuli-responsive degradable polylactide-based block copolymer nanoassemblies for controlled/enhanced drug delivery[J]. Mol Pharm，2017，14（8）：2460-2474.

[57] DHARMARAJA AT. Role of reactive oxygen species （ROS） in therapeutics and drug resistance in cancer and bacteria[J]. J Med Chem，2017，60（8）：3221-3240.

（收稿日期：2018-03-15 修回日期：2018-08-14）

（編輯：余慶華）