藍(lán)桉果實(shí)正丁醇部位化學(xué)成分

Pham Thi Anh，李君彥，張寶寶，汪 豪

(中國(guó)藥科大學(xué)中藥學(xué)院中藥制藥系，南京 210009)

藍(lán)桉(EucalyptusglobulusLabill.)為桃金娘科(Myrtaceae)桉屬(Eucalyptus)植物，在我國(guó)主要分布于廣西、云南、四川等地。藍(lán)桉葉、根皮和果實(shí)均可入藥，藍(lán)桉干燥果實(shí)又名“一口鐘”，適用于治療炎癥、濕疹、流行性腦脊髓膜炎及流行性感冒[1]。目前，藍(lán)桉果實(shí)中已分離得到的化學(xué)成分主要為間苯三酚、黃酮及萜類成分。藥理學(xué)研究表明，藍(lán)桉果實(shí)具有抗腫瘤、抗炎及抗糖尿病活性[2]。已有研究報(bào)道藍(lán)桉果實(shí)脂溶性化學(xué)成分，正丁醇萃取部位的化學(xué)成分研究較少。本研究采用硅膠、制備型HPLC等柱色譜分離方法，通過(guò)NMR、ESI-MS等波譜技術(shù)鑒定化合物結(jié)構(gòu)，分別鑒定為：鞣花酸(1)，3-O-甲基鞣花酸-4′-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(2)，valoneic acid dilactone(3)，8-β-C-葡萄糖基-5,7-二羥基-2-甲基色原酮(4)，6-β-C-葡萄糖基-5,7-二羥基-2-甲基色原酮(5)，8-β-C-glucopyranosyl-5,7-dihydroxy-2-isobutylchromone(6)，8-β-C-glucopyranosyl -5,7-dihydroxy-2-isopropylchromone(7)，quercetin 3-O-β-D- glucopyranoside(8)，quercetin 3-O-β-D-glucuronide-6″-methyl ester(9)，(+)-lyoniresin-4-yl-β-D-glucopyranoside(10)，cypellocarpins A(11)，eucaglobulin 1(12)。其中化合物3～10為首次從該植物中分離得到。結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1。

Figure1 Chemical structures of compounds1-12

1 材 料

1.1 藥 材

藍(lán)桉果實(shí)，于2015年8月采集自中國(guó)廣西玉林市，由中國(guó)藥科大學(xué)中藥學(xué)院秦民堅(jiān)教授鑒定為EucalyptusglobulusLabill.植物的果實(shí)。樣品標(biāo)本存放于中國(guó)藥科大學(xué)中藥制藥系，標(biāo)本編號(hào)為EG160801。

1.2 儀器與試劑

Bruker AV-300型核磁共振波譜儀，以TMS為內(nèi)標(biāo)；Agilent 1100 Series LC/MSD離子阱質(zhì)譜儀；Shimadzu LC-8A型制備HPLC(日本Shimadzu公司)；柱色譜硅膠(青島海洋化工廠)；薄層色譜硅膠GF254(煙臺(tái)化工研究所)；MCI Gel(CHP 20,75～150 μm,日本三菱化學(xué)公司)；Sephadex LH-20色譜填料(瑞典Pharmacia公司)；ODS色譜填料(40～63 μm，日本YMC公司)。所用試劑均為市售分析純。

2 提取與分離

取藍(lán)桉果實(shí)干燥藥材5 kg，粉碎成粗粉，用95%乙醇回流提取3次，合并醇提液，減壓濃縮成浸膏，加水溶解混懸后，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和正丁醇萃取，得到各萃取部位。正丁醇萃取部位經(jīng)硅膠柱色譜分離，二氯甲烷-甲醇(90∶10～70∶30)梯度洗脫，薄層色譜(TLC)檢識(shí)，合并相同流分(Fr.)，得到Frs.1～5。Fr.2經(jīng)中壓ODS、Sephadex LH-20柱色譜，重結(jié)晶得到化合物4(34.2 mg)和化合物5(12.3 mg)；Fr.3 經(jīng)制備HPLC得到化合物1(8.5 mg)，化合物2(45 mg)和化合物3(6 mg)；Fr.4經(jīng)中壓ODS、Sephadex LH-20柱色譜和制備HPLC分離純化得到化合物6(9.2 mg)和化合物7(8.4 mg)；Fr.5經(jīng)反復(fù)中壓ODS、Sephadex LH-20柱色譜，重結(jié)晶得到化合物8(6 mg)和化合物9(5 mg)，經(jīng)制備HPLC分離純化得到化合物10(6.5 mg)，化合物11(10.3 mg)和化合物12(6.3 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1黃色粉末，ESI-MSm/z:301[M-H]-，分子式C14H6O8。1H NMR(300 MHz,DMSO-d6)δ:7.50(2H,s,H-5,5′);13C NMR(75 MHz,DMSO-d6)δ:106.4(C-1,1′),140.9(C-2,2′),136.2(C-3,3′),148.3(C-4,4′),109.6(C-5,5′),112.5(C-6,6′),159.2(C-7,7′)。與文獻(xiàn)[3]比較，鑒定化合物1為鞣花酸(ellagic acid)。

化合物2白色針晶，ESI-MSm/z:461[M-H]-，分子式C21H18O12。1H NMR(300 MHz,DMSO-d6)δ:7.51(1H,s,H-5),7.72(1H,s,H-5′),5.47(1H,br.s,H-1″),4.00(1H,br,H-2″),3.52(1H,m,H-3″),3.85(1H,d,J=9.0 Hz,H-4″),3.56(1H,m,H-5″),1.14(3H,d,J=6.3 Hz,Me-6″),4.04(3H,s,OCH3-3)。13C NMR(75 MHz,DMSO-d6)δ:111.4(C-1),141.1(C-2,2′),141.7(C-3),146.4(C-3′),146.7(C-4),111.6(C-5,5′),114.2(C-6),158.6(C-7,7′),114.1(C-1′),152.6(C-4′),112.9(C-6′),100.1(C-1″),70.0(C-2),69.9(C-3″),69.9(C-4″),71.07(C-5″),17.8(C-6″),60.90(OCH3-3)。與文獻(xiàn)[4]比較，鑒定化合物2為3-O-甲基鞣花酸 4′-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(3-O-methylellagic acid 4′-O-α-rhamnopyranoside)。

化合物3黃色針晶，ESI-MSm/z:469[M-H]-，分子式C21H10O13。1H NMR(300 MHz,CD3OD)δ:7.49(1H,s,H-5),7.25(1H,s,H-6″),6.91(1H,s,H-5′)。13C NMR(75 MHz,CD3OD)δ:111.9(C-1),136.2(C-2),139.5(C-3),148.4(C-4),108.0(C-5),112.5(C-6),160.4(C-7),113.8(C-1′),136.6(C-2′),141.4(C-3′),148.4(C-4′),110.3(C-5′),108.1(C-6′),160.4(C-7′),114.7(C-1″),139.0(C-2″),139.5(C-3″),135.2(C-4″),142.8(C-5″),168.4(C-6″),165.9(C-7″)。與文獻(xiàn)[5]比較，鑒定化合物3為valoneic acid dilactone。

化合物4黃色粉末，ESI-MSm/z:353[M-H]-，分子式C16H18O9。1H NMR(300 MHz,DMSO-d6)δ:13.01(1H,br.s,5-OH),6.23(1H,s,H-6),6.18(1H,s,H-3),4.63(1H,d,J=9.8 Hz,H-1′),3.87(1H,t,J=9.8 Hz,H-2′),3.56(2H,m,H-6′),3.42(2H,br.s,H-4′,5′),3.17(1H,d,J=8.7 Hz,H-3′),2.34(3H,s,2-Me)。13C NMR(75 MHz,DMSO-d6)δ:167.3(C-2),107.5(C-3),160.4(C-5),107.5(C-6),162.7(C-7),98.4(C-8),156.3(C-9),103.6(C-10),182.1(C=O),73.2(C-1′),71.0(C-2′),78.6(C-3′),70.5(C-4′),81.3(C-5′),61.4(C-6′)。與文獻(xiàn)[6]比較，鑒定化合物4為8-β-C-葡萄糖基-5,7-二羥基-2-甲基色原酮(isobiflorin)。

化合物5黃色粉末，ESI-MSm/z:353[M-H]-，分子式C16H18O9。1H NMR(300 MHz,DMSO-d6)δ:13.01(1H,br.s,5-OH),6.36(1H,s,H-8),6.16(1H,s,H-3),2.35(3H,s,Me-2),4.82(1H,d,J=9.9 Hz,H-1′),3.90(1H,d,J=9.8 Hz ,H-2′),3.60(2H,m,H-6′),3.32(2H,br.s,H-4′,5′),3.19(1H,d,J=8.7 Hz,H-3′)。13C NMR(75 MHz,DMSO-d6)δ:167.4(C-2),108.7(C-3),160.4(C-5),107.6(C-6),163.2(C-7),93.4(C-8),156.6(C-9),103.1(C-10),181.9(C=O),19.8(Me-2),73.0(C-1′),71.6(C-2′),78.6(C-3′),70.2(C-4′),81.5(C-5′),61.4(C-6′)。與文獻(xiàn)[6]比較，鑒定化合物5為6-β-C-葡萄糖基-5,7-二羥基-2-甲基色原酮(biflorin)。

化合物6黃色粉末，ESI-MSm/z:395[M-H]-，分子式C19H24O9。1H NMR(300 MHz,CD3OD)δ:6.23(1H,s,H-6),6.06(1H,s,H-3),4.88(1H,d,J=9.8 Hz,H-1′),4.08(1 H,m,H-2′),3.88(2H,dd,J=5.5,12 Hz,H-6′),3.87(1H,d,J=12.1 Hz,H-4′),3.43(1H,m,H-3′),3.42(1H,m,H-5′),2.54(2H,m,H-12),2.22(1H,m,H-11),1.03(6H,m,Me-13,14)。13C NMR(75 MHz,CD3OD)δ:171.5(C-2),109.2(C-3),184.2(C-4),164.6(C-5),105.6(C-6),162.8(C-7),105.6(C-8),158.4(C-9),105.1(C-10),28.2(C-11),44.1(C-12),22.7(C-13),22.5(C-14), 75.2(C-1′),72.9(C-2′),80.0(C-3′),72.9(C-4′),76.4(C-5′),63.9(C-6′)。與文獻(xiàn)[7]比較，鑒定化合物6為8-β-C-glucopyranosyl-5,7-dihydroxy-2-isobutylchromone。

化合物7黃色粉末，ESI-MSm/z:381[M-H]-，分子式C18H22O9。1H NMR(300 MHz,CD3OD)δ:6.31(1H,s,H-6),6.14(1H,s,H-3),4.98(1H,d,J=9.8 Hz,H- 1′),4.16(1H,br,H-4′),3.95(2H,d,J=11.2 Hz,H-6′),3.73(1 H,d,J=6.3 Hz,H-2′),3.50(1H,m,H-5′),3.43(1H,m,H-3′),2.88(1H,m,H-11),1.40(6H,m,Me-12,13)。13C NMR(75 MHz,CD3OD)δ:176.7(C-2),106.1(C-3),184.6(C-4),162.7(C-5),100.0(C-6),164.6(C-7),104.3(C-8),154.5(C-9),106.1(C-10),34.6(C-11),20.3(C-12),20.8(C-13),73.0(C-1′),70.5(C-2′),75.2(C-3′),71.1(C-4′),82.7(C-5′),63.1(C-6′)。與文獻(xiàn)[8]比較，鑒定化合物7為8-β-Cglucopyranosyl-5,7-dihydroxy-2-isopropylchromone。

化合物8黃色粉末，ESI-MSm/z:463[M-H]-，分子式C21H20O12。1H NMR(300 MHz,CD3OD)δ:7.75(1H,d,J=2.0,8.7 Hz,H-2′),7.62(1H,d,J=2.2,8.7 Hz,H-6′),6.91(1H,d,J=8.7 Hz,H-5′),6.43(1H,d,J=2.1 Hz,H-8),6.24(1H,d,J=2.6 Hz,H-6),5.27(1H,d,J=7.1 Hz,H-1″),3.75(2H,d,J=9.5 Hz,H-2″,5″),3.34～3.64(4H,m,H-3″,4″,6″)。13C NMR(75 MHz,CD3OD)δ:159.0(C-2),135.6(C-3),179.5(C-4),163(C-5),99.9(C-6),166(C-7),94.7(C-8),163(C-9),104.3(C-10),123.2(C1′,6′),116.0(C-2′),145.9(C-3′),158.5(C-4′),117.5(C-5′),104.3(C-1″),75.7(C-2″),78.1(C-3″),71.2(C-4″),78.3(C-5″),62.5(C-6″)。與文獻(xiàn)[9]比較，鑒定化合物8為 quercetin 3-O-β-D-glucopyranoside。

化合物9黃色粉末，ESI-MSm/z:491[M-H]-，分子式C22H20O13。1H NMR(300 MHz,CD3OD)δ:8.02(1H,d,J=2.1 Hz,H-2′),7.61(1H,dd,J=8.2,2.3 Hz,H-6′),6.89(1H,d,J=8.3 Hz,H-5′),6.43(1H,d,J=1.2 Hz,H-8),6.25(1H,d,J=1.2 Hz,H-6),5.26(1H,d,J=7.1 Hz,H-1″),3.79(2H,d,J=9.5 Hz,H-2″,5″),3.67(3H,s,OCH3-6″),3.44～3.57(2H,m,H-3″,4″)。13C NMR(75 MHz,CD3OD)δ:158.4(C-2),135.4(C-3),179.2(C-4),163.0(C-5),99.9(C-6),166.0(C-7),94.8(C-8),159.4(C-9),105.6(C-10),122.8(C-1′),116.0(C-2′),149.8(C-3′),148.2(C-4′),117.3(C-5′),122.6(C-6′),104.8(C-1″),77.3(C-2″),77.1(C-3″),75.3(C-4″),72.7(C-5″),170.6(C-6″),52.6(OCH3-6″)。與文獻(xiàn)[10]比較，鑒定化合物9為quercetin 3-O-β-D-glucuronide-6″-methyl ester。

化合物10黃色粉末，ESI-MSm/z:581[M-H]-，分子式C28H38O13。1H NMR(300 MHz,CD3OD)δ:6.62(1H,s,H-6),6.30(2H,s,H-2′,6′),4.83(1H,d,J=7.0 Hz,H-1″),4.27(1H,d,J=5.1 Hz,H-7′),3.80(3H,s,OCH3-5),3.67(6H,s,OCH3-3′,5′),3.62(1H,dd,J=12.5,2.5 Hz,H-6″),3.57(1H,dd,J=12.0,5.0 Hz,H-6″),3.51(1H,dd,J=11.0,5.0 Hz,H-9),3.42(3H,s,OCH3-3),3.39(1H,m,H-9),3.35(1H,m ,H-2″),3.34(2H,m,H-3″,H-4″),3.08(1H,m,H-5″),2.67(1H,dd,J=13.0,5.0 Hz,H-7),2.51(1H,dd,J=13.0,11.5 Hz,H-7),1.94(1H,m,H-8′),1.56(1H,m,H-8)。13C NMR(75 MHz,CD3OD)δ:136.3(C-1),126.6(C-2),153.3(C-3),138.8(C-4),153.3(C-5),109.3(C-6),33.5(C-7),40.7(C-8),66.4(C-9),138.8(C-1′),106.9(C-2′),149.1(C-3′),136.3(C-4′),149.1(C-5′),106.9(C-6′),42.1(C-7′),48.8(C-8′),64.3(C-9′),56.9(OCH3-3′),61.6(OCH3-3),56.8(OCH3-5),56.9(OCH3-5′),104.9(C-1″),75.8(C-2″),77.9(C-3″),71.3(C-4″),78.2(C-5″),63.1(C-6″)。與文獻(xiàn)[11]比較，鑒定化合物10為(+)-lyoniresin-4-yl-β- D-glucopyranoside。

化合物12黃色粉末。ESI-MSm/z:497[M-H]-，分子式C23H30O12。1H NMR(300 MHz，MeOD)δ:7.17(2H,s,H-2″,6″),7.00(1H,br.s,H-3),5.68(1H,d,J=7.8 Hz,H-1′),4.45(1H,dd,J=2.4,11.3 Hz,H-6′),4.31(1H,dd,J=5.6,11.2 Hz,H-6′ Glc),3.67(1H,ddd,J=2.3,5.6,9.5 Hz,H-5′),3.52～3.33(3H,m,H-2′,3′,4′),2.40(2H,br.d,J=15.6 Hz,H-7),2.31(2H,br.d,J=18.8 Hz,H-4),2.03(2H,m,H-6),1.32(1H,m,H-5),1.20(6H,s,8-CH3)。13C NMR(125 MHz,CD3OD)δ:168.8(C-1),131(C-2),141.0(C-3),30.6(C-4),45.4(C-5),24.4(C-6),26.2(C-7),72.8(C-8),28.5(C-9),27(C-10),95.8(C-1′),74.0(C-2′),78.0(C-3′),71.3(C-4′),76.2(C-5′),64.3(C-6′),120.8(C-1″),110.6(C-2″,6″),146.5(C-3″,5″),140.3(C-4″),165.8(C=O)。與文獻(xiàn)[13]比較，鑒定化合物12為eucaglobulin 1。