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    甘藍(lán)型油菜BnTCP7基因的克隆和表達(dá)分析

    2018-09-05 06:27:38劉雙雙蔣學(xué)飛王茂林
    西北植物學(xué)報(bào) 2018年7期
    關(guān)鍵詞:甘藍(lán)型構(gòu)象進(jìn)化樹

    劉雙雙,蔣學(xué)飛,岳 出,王茂林

    (四川大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院,生物資源與生態(tài)環(huán)境教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,成都 610064)

    TCP轉(zhuǎn)錄因子家族是根據(jù)玉米(Zeamays)中的TEOSINTEBRANCHE1 (TB1)、金魚草(Antirrhinummajus)中的CYCLOIDEA(CYC)以及水稻(Oryzasativa)中的PROLIFERRATINGCELLFACTORS1和2(PCF1和PCF2)的3個(gè)基因的首字母來命名的[1]。TCP家族是植物特有的一類轉(zhuǎn)錄因子[2],含有一個(gè)bHLH motif,能夠與DNA結(jié)合或者產(chǎn)生蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的互作[3]?;赥CP結(jié)構(gòu)域序列上的差別,TCP轉(zhuǎn)錄因子家族被分為2個(gè)亞家族:classⅠ(PCF或TCP-P)和Ⅱ(TCP-C),主要是因?yàn)閏lassⅠ和Ⅱ相比,在TCP基本結(jié)構(gòu)域上缺失了1個(gè)包含4個(gè)氨基酸殘基的結(jié)構(gòu),此外classⅠ和Ⅱ的蛋白識(shí)別位點(diǎn)也有所差異,分別為GGNCCCAC和G(T/C)GGNCCC[4]。TCP家族參與了調(diào)控植物細(xì)胞增殖和分化,其中classⅠ類在植物生長(zhǎng)以及脅迫應(yīng)答中起正調(diào)控作用,而classⅡ則與Ⅰ類功能有所拮抗[5]。

    據(jù)報(bào)道,通過酵母單雜交篩選分離方法,得到的TCP家族AtTCP7基因可能是擬南芥miR168a調(diào)節(jié)因子,但在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,通過過量表達(dá)該基因和GUS染色發(fā)現(xiàn),AtTCP7可能不直接與miR168a的啟動(dòng)子作用。在轉(zhuǎn)基因品系的表型分析中發(fā)現(xiàn)多種生長(zhǎng)缺陷和發(fā)育延遲,包括根較短、開花延遲和育性降低等特征。不同發(fā)育階段分析表明,過表達(dá)AtTCP7通過改變細(xì)胞周期基因表達(dá)限制細(xì)胞從G1到S期的轉(zhuǎn)變,在不同器官中差異性地影響細(xì)胞大小和DNA含量。同時(shí),TCP家族成員之間存在復(fù)雜的相互作用遺傳網(wǎng)絡(luò),特別是TCP7和TCP23之間通過相互作用發(fā)揮功能[6]。在擬南芥TCP蛋白相互作用中發(fā)現(xiàn):TCP7/8/22/23在幼葉生長(zhǎng)中具有相似表達(dá)模式,TCP4/7/9/14/15/17/21/22/23在花的發(fā)育中的功能可能具有相似性[7]。最近也有文獻(xiàn)報(bào)道,擬南芥中classⅠ類的6個(gè)TCPs基因可能是3對(duì)重復(fù)基因,分別為tcp6-tcp20、tcp7-tcp21和tcp9-tcp19[8]。最近,蕪菁(Brassicarapa)基因組TCP家族分析發(fā)現(xiàn)TCP7基因存在BrrTCP7、BrrTCP7a和BrrTCP7b等3種,且BrrTCP7在根、莖、葉中均呈現(xiàn)高表達(dá),BrrTCP7a在所有器官中的表達(dá)水平較低,而BrrTCP7b在葉片和花中表達(dá)量較高。通過酵母雙雜交技術(shù)研究蕪菁TCP蛋白之間的相互作用,發(fā)現(xiàn)TCP7幾乎與所有BrrTCP蛋白均能產(chǎn)生同源或異源二聚體[9]。

    目前針對(duì)甘藍(lán)型油菜TCP7基因在植物生物脅迫和非生物脅迫方面的研究還比較少。油菜屬于十字花科、蕓薹屬植物,是世界重要的油料作物之一,也是主要經(jīng)濟(jì)作物[10],本研究通過克隆后比對(duì)分析,獲得了甘藍(lán)型油菜預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)錄因子TCP7-like同源編碼基因,命名為BnTCP7,分析了該基因的氨基酸序列和表達(dá)模式,為深入研究油菜BnTCP7在植物抗逆響應(yīng)中的功能奠定基礎(chǔ)。

    1 材料和方法

    1.1 材 料

    甘藍(lán)型油菜(Brassicanapus)‘3529’由本課題組提供,種植于四川大學(xué)試驗(yàn)地。

    1.2 方 法

    1.2.1BnTCP7編碼區(qū)全長(zhǎng)的克隆按照植物總RNA提取試劑盒(OMEGA公司)說明書,以油菜葉片為實(shí)驗(yàn)材料提取總RNA,cDNA第一鏈合成按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒TransScript One-Step gDNA Remvoal and cDNA Synthesis Super Mix(全式金生物公司)的操作步驟進(jìn)行。反轉(zhuǎn)錄后用內(nèi)參基因-Actin檢測(cè)cDNA質(zhì)量,合成的cDNA可直接作為PCR反應(yīng)模板使用,或者-20 ℃保存。參考轉(zhuǎn)錄組BnTCP7基因的ORF序列,利用Primer3 Plus在線設(shè)計(jì)引物(表1)。PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),用DNA純化回收試劑盒(天根生物公司)按照從PCR反應(yīng)液直接回收方法進(jìn)行回收,

    表1 引物序列

    回收產(chǎn)物連接Peasy-T1載體(全式金生物公司),轉(zhuǎn)化Trans-T1感受態(tài)細(xì)胞。藍(lán)白斑篩選陽(yáng)性克隆后,經(jīng)菌液PCR檢測(cè),選取陽(yáng)性菌落接種于含有卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)并提取質(zhì)粒。按照質(zhì)粒小提試劑盒(天根生物公司)說明書的方法進(jìn)行提取,后送生物公司(深圳華大基因有限公司)測(cè)序。

    1.2.2BnTCP7基因編碼區(qū)序列的生物信息分析目的基因測(cè)序結(jié)果用DNAMAN軟件分析。將BnTCP7基因序列在GenBank中進(jìn)行Blast比對(duì),利用BnTCP7基因的預(yù)測(cè)氨基酸序列進(jìn)行氨基酸序列比對(duì)分析。BnTCP7蛋白理化性質(zhì)通過Protparam[11]在線軟件分析,BnTCP7蛋白親水/疏水性使用ProtScale在線分析軟件Kyteand Doolittle算法進(jìn)行預(yù)測(cè)。使用SOPMA[12]對(duì)BnTCP7蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè),而BnTCP7蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)同源建模應(yīng)用SwissModel在線工具分析。用MEGA 7. 0軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹。

    1.2.3不同時(shí)期不同器官BnTCP7基因的表達(dá)模式分析根據(jù)本課題組已有轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),分析甘藍(lán)型油菜‘3529’各個(gè)時(shí)期各個(gè)器官中BnTCP7基因的表達(dá)模式,為深入研究BnTCP7基因功能提供依據(jù)。

    1.2.4BnTCP7基因在逆境脅迫和外源激素處理下的表達(dá)模式分析甘藍(lán)型油菜品系‘3529’露天盆栽,培養(yǎng)至幼苗3~4片真葉時(shí),開始進(jìn)行脅迫及激素處理。激素處理為100 μmol/L ABA和100 μmol/L GA3,分別添加 0.05%(V/V)乙醇和0.01% Tween-20表面活性劑,噴施葉面和澆灌根部;損傷處理為用打孔器在葉片上打孔(30%體積);高溫、低溫處理為將甘藍(lán)型油菜幼苗分別放置40 ℃光照培養(yǎng)箱和4 ℃冷室內(nèi),正常光照進(jìn)行處理;未經(jīng)過任何處理的作為空白對(duì)照。所有材料在處理后 0、0.5、1、2、4、8和16 h 取生長(zhǎng)狀況一致的幼苗地上部分,液氮冷凍后于-80 ℃保存。以油菜管家基因 -Actin(GenBank登錄號(hào)AF111812)作為內(nèi)參基因,設(shè)計(jì)特異性引物(表1),qRT-PCR檢測(cè)BnTCP7基因在不同脅迫、不同時(shí)間點(diǎn)下的表達(dá)情況。熒光定量PCR儀為美國(guó)Bio-Rad CFX96。熒光定量試劑盒采用TransStart Tip Green qPCR Super Mix(全式金生物公司)。qRT-PCR反應(yīng)20 μL體系如下:10 μL 2×Master Mix,1 μL模板cDNA,10 μmol/L正反向引物各1 μL,7 μL ddH2O。qRT-PCR采用三步法,反應(yīng)程序?yàn)椋?4 ℃預(yù)變性30 s,42個(gè)循環(huán)(94 ℃ 5 s,55 ℃ 15 s 及72 ℃ 10 s),同時(shí)繪制熔解曲線(65 ℃上升至95 ℃,每個(gè)循環(huán)上升0.5 ℃)。反應(yīng)結(jié)束后,目標(biāo)基因表達(dá)水平運(yùn)用相對(duì)定量的2-ΔΔCt法[13],得到BnTCP7基因的相對(duì)表達(dá)量,每個(gè)樣品都進(jìn)行3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。數(shù)據(jù)采用SPSS進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 BnTCP7基因全長(zhǎng)的克隆與編碼蛋白質(zhì)分析

    由甘藍(lán)型油菜苗期葉片為材料獲得的cDNA為模板通過PCR擴(kuò)增(圖1),得到648 bp編碼區(qū)全長(zhǎng)。PCR產(chǎn)物經(jīng)純化后連接T載體并轉(zhuǎn)化涂在具有卡那抗性的平板上,過夜培養(yǎng),挑取單菌落進(jìn)行重組子鑒定后擴(kuò)大培養(yǎng),菌液送深圳華大基因有限公司測(cè)序,測(cè)序后利用NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)Blastn比對(duì),成功獲得TCP7基因,命名為BnTCP7。將克隆得到的序列與甘藍(lán)型油菜基因組序列進(jìn)行Blast比對(duì),發(fā)現(xiàn)與甘藍(lán)型油菜預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)錄因子TCP7-like(NC_027757)為同源基因,核苷酸序列相似性最高,為95.68%。同時(shí),其氨基酸序列與十字花科(Brassicaceae)中19條TCP7或者TCP7-like基因的氨基酸序列比對(duì),結(jié)果(圖2)表明,擬南芥屬、亞麻薺屬、蕓薹屬和蘿卜屬等TCP7間同源蛋白具有很高的相似性和保守性,尤其表現(xiàn)在靠近N端的TCP保守結(jié)構(gòu)域。

    2.2 BnTCP7蛋白性質(zhì)與結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)分析

    2.2.1氨基酸序列理化性質(zhì)分析BnTCP7蛋白理化性質(zhì)利用在線軟件Protparam分析。BnTCP7蛋白相對(duì)分子質(zhì)量為23 018.77;不穩(wěn)定系數(shù)是47.77(不穩(wěn)定系數(shù)大于40時(shí),預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)不穩(wěn)定,反之則穩(wěn)定),為不穩(wěn)定類蛋白;等電點(diǎn)為9.38;總平均疏水性為-0.457。結(jié)果表明,該蛋白為不穩(wěn)定、親水性蛋白。

    M. 250 bp DNA ladder; 1.‘3529’圖1 BnTCP7 基因 PCR 擴(kuò)增片段Fig.1 PCR amplified fragment of BnTCP7

    2.2.2BnTCP7蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)及三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)利用SOPMA對(duì)BnTCP7蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)[12],并與擬南芥AtTCP7(NC_003076)蛋白預(yù)測(cè)結(jié)構(gòu)進(jìn)行比對(duì),圖3,A1和3,A2分別為BnTCP7和AtTCP7蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果,主要顯示蛋白結(jié)構(gòu)中的α-螺旋、β-片層等結(jié)構(gòu)。應(yīng)用SwissModel在線工具對(duì)BnTCP7及AtTCP7氨基酸序列進(jìn)行三級(jí)結(jié)構(gòu)同源建模。BnTCP7氨基酸序列預(yù)測(cè)得到三級(jí)結(jié)構(gòu)構(gòu)象有2個(gè),構(gòu)象1和構(gòu)象2分別見圖3,B1、B2,2個(gè)構(gòu)象共存時(shí)構(gòu)象見圖3,B3;AtTCP7氨基酸序列預(yù)測(cè)得到的三級(jí)結(jié)構(gòu)關(guān)鍵構(gòu)象也具有2個(gè)獨(dú)立構(gòu)象(圖3,C);圖3,B3和圖3,C中構(gòu)象均存在螺旋-環(huán)-螺旋結(jié)構(gòu),進(jìn)一步證明屬于TCP家族,且BnTCP7和AtTCP7部分構(gòu)象一致。

    NC_027757、NC_027774、NC_027762、NC_027768、NC_027758. 甘藍(lán)型油菜; NC_024795v、NC_024800、NC_024796. 白菜; NC_027756、NC_027754、NC_027749. 甘藍(lán); NW_017353147、NW_017353142. 蘿卜; NC_025697、NC_025692、NC_025704. 亞麻芥屬; NW_003302550.琴葉擬南芥; NC_003076. 擬南芥圖2 BnTCP7與十字花科中其他19個(gè)TCP7或TCP7-like氨基酸序列比對(duì)NC_027757, NC_027774, NC_027762, NC_027768, NC_027758. Brassica napus (rape); NC_024795v, NC_024800, NC_024796. Brassica rapa (field mustard); NC_027756, NC_027754, NC_027749. Brassica oleracea (wild cabbage); NW_017353147, NW_017353142, NW_017353144. Raphanus sativus (radish); NC_025697, NC_025692, NC_025704. Camelina sativa (false flax); NW_003302550. Arabidopsis lyrata; NC_003076. Arabidopsis thalianaFig.2 Comparison of BnTCP7 with other 19 TCP7 or TCP7-like amino acids in Brassicaceae

    A1. BnTCP7蛋白二級(jí)預(yù)測(cè)結(jié)構(gòu); A2. AtTCP7蛋白二級(jí)預(yù)測(cè)結(jié)構(gòu); B1. BnTCP7蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)構(gòu)象1; B2. BnTCP7蛋白三級(jí)機(jī)構(gòu)預(yù)測(cè)構(gòu)象2; B3.構(gòu)象1和構(gòu)象2共存時(shí)構(gòu)象; C. AtTCP7蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)構(gòu)象; A1、A2中綠色為β-轉(zhuǎn)角,紅色為片層,紫色為無規(guī)卷曲,藍(lán)色為α-螺旋圖3 BnTCP7 蛋白二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)A1. Prediction of protein secondary structure of BnTCP7; A2. Prediction of protein secondary structure of AtTCP7; B1. Prediction of protein tertiary structure of model1 in BnTCP7; B2. Prediction of protein tertiary structure of model 2 in BnTCP7; B3. Conformation of the coexistence of model1 and model 2; C. Prediction of protein secondary structure of AtTCP7; A1, A2. Green: β-turn; Red: extended; Purple: random, coil, strand; Blue: α-helix.Fig.3 Prediction of secondary and tertiary structures of BnTCP7 protein

    2.3 BnTCP7蛋白系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建

    為研究十字花科植物TCP7基因的蛋白質(zhì)系統(tǒng)進(jìn)化情況,對(duì)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)十字花科中19個(gè)TCP7及TCP7-like基因預(yù)測(cè)的氨基酸序列構(gòu)建進(jìn)化樹,其中涉及4個(gè)屬分別為擬南芥屬、亞麻薺屬、蕓薹屬和蘿卜屬,并結(jié)合BnTCP7基因預(yù)測(cè)的氨基酸序列構(gòu)建進(jìn)化樹。利用MEGA7.0軟件[14]中Neighbor Joining算法[15]構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹[16](圖4),使用泊松校正方法計(jì)算進(jìn)化距離[17]。結(jié)果表明,20條蛋白序列具有很高的同源性,BnTCP7與Brassicanapus(rape)NC_027757聚在同小一分支,親緣關(guān)系最近;與Raphanussativus(radish)NW_017353147等聚在同一大分支,與陸奇豐等結(jié)果相同[18]。進(jìn)化距離表明,20個(gè)基因的蛋白質(zhì)遺傳進(jìn)化距離很近,進(jìn)一步說明該TCP家族蛋白質(zhì)遺傳進(jìn)化比較保守。

    2.4 不同時(shí)期不同器官BnTCP7基因的表達(dá)模式分析

    利用轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)對(duì)不同時(shí)期不同器官BnTCP7基因在‘3529’中的表達(dá)模式分析,結(jié)果如圖5所示。各個(gè)時(shí)期各個(gè)器官中BnTCP7基因的表達(dá)呈現(xiàn)一定差異性,BnTCP7基因在花期莖中表達(dá)量相對(duì)最高,而在花期葉、角果期角果中表達(dá)量相對(duì)較少,其中角果中表達(dá)量最低;BnTCP7基因在苗期和抽薹期各部位中表達(dá)量差異不顯著,而在花期葉片中表達(dá)量較其他組織部位低。

    圖4 BnTCP7與十字花科中其他19個(gè)TCP7或TCP7-like蛋白序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig.4 Phylogenetic analysis of BnTCP7 with other 19 TCP7 or TCP7-like protein in Brassicaceae

    2.5 非生物脅迫和外源激素處理下BnTCP7的表達(dá)模式分析

    通過分析甘藍(lán)型油菜‘3529’不同時(shí)期的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),發(fā)現(xiàn)BnTCP7基因在苗期表達(dá)量較穩(wěn)定;并且,苗期更適宜于研究BnTCP7基因?qū)Ψ巧锩{迫和外源激素處理的響應(yīng),因此本實(shí)驗(yàn)選用苗期材料。非生物脅迫和外源激素處理后苗期中BnTCP7表達(dá)量變化如圖6所示,其中不同脅迫處理實(shí)驗(yàn)均以β-Actin為內(nèi)參基因,以0 hBnTCP7在‘3529’中的表達(dá)量為1得到不同時(shí)間段‘3529’中BnTCP7基因的相對(duì)表達(dá)量。

    分析發(fā)現(xiàn),‘3529’在冷脅迫下,BnTCP7表達(dá)量隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐步降低,在8 h表達(dá)量達(dá)到最低。而在熱脅迫下,BnTCP7表達(dá)量隨著時(shí)間的變化呈先下降后上升趨勢(shì),在2 h表達(dá)量達(dá)到最低點(diǎn)。損傷脅迫下,BnTCP7表達(dá)量在0.5 ~ 4 h時(shí)間段內(nèi)穩(wěn)定低表達(dá),但在8 h大幅升高至0 h表達(dá)水平,差異不顯著,后繼續(xù)下降。在ABA和GA3處理后,BnTCP7表達(dá)量在早期都呈大幅度下降趨勢(shì),但是它們下降到最低值的時(shí)間點(diǎn)和恢復(fù)到最高值的時(shí)間點(diǎn)均不一樣,其中GA3處理下,BnTCP7在0.5 h下降至最低點(diǎn)后逐漸上升并在2 h表達(dá)量上升到初始狀態(tài),2 h后下降并呈穩(wěn)定低表達(dá);施加外源ABA后,BnTCP7表達(dá)量在1 h下降到最低點(diǎn)后逐步上升,且8 h表達(dá)量高于處理前狀態(tài)后下降。

    ss.苗期; bs.抽薹期; fs.花期; ps.角果期圖5 ‘3529’不同時(shí)期不同器官BnTCP7基因的相對(duì)表達(dá)量WT represent ‘3529’ of Brassica napus; ss represent the seedling stage; bs represent the bolting stage; fs represent the flowering period; ps represent siliquing stageFig.5 Analysis of BnTCP7 gene’s relative expression in different stages and organs of ‘3529’

    *代表該處理下BnTCP7基因表達(dá)量與0 h(未處理)的表達(dá)量存在顯著差異(P<0.05)圖6 非生物脅迫和外源激素處理下BnTCP7基因的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)表達(dá)量*means that the expression of BnTCP7 gene there is a significant difference between the treatment time 0 h (untreated conditions) and other treatment time under the same condition at 0.05 levelFig.6 Relative normalized expression levels of BnTCP7 under abiotic stresses and hormone treatments

    綜上,表達(dá)量總體變化趨勢(shì)分為兩類:第一類,BnTCP7在損傷脅迫和外源激素ABA及GA3處理下基因表達(dá)量隨著處理時(shí)間延長(zhǎng),均為先下降再上升后下降趨勢(shì);第二類,在冷、熱脅迫處理?xiàng)l件下基因表達(dá)量隨著脅迫時(shí)間延長(zhǎng),整體呈下降趨勢(shì)。總之,非生物脅迫和外源激素處理下,‘3529’中BnTCP7的表達(dá)量與0 h相比均整體呈下降狀態(tài)且差異顯著(P<0.05)。說明BnTCP7參與到了冷、熱、損傷脅迫中,并受ABA及GA3激素的影響。

    3 討 論

    轉(zhuǎn)錄因子在植物抵御外界生物和非生物脅迫過程中發(fā)揮重要調(diào)控作用,且在不同物種中其功能高度保守[19]。其中,TCP轉(zhuǎn)錄因子參與多種激素信號(hào)通路的調(diào)節(jié),且具增強(qiáng)植物抵御外界脅迫的能力[20]。據(jù)報(bào)道,白樺BpTCP7基因過表達(dá)提高了鹽、旱耐受能力[6],水曲柳FmTCP4基因能夠被寒冷、鹽、干旱等非生物脅迫誘導(dǎo)表達(dá),并參與了ABA和GA3的激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程[4]。目前,TCP家族在擬南芥[21]、水稻[22]和番茄[23]中研究比較多,但對(duì)蕓薹屬植物的研究比較少,特別是甘藍(lán)型油菜抗逆響應(yīng)方面。本研究通過基因克隆、序列比對(duì)分析獲得了甘藍(lán)型油菜轉(zhuǎn)錄因子TCP7-like同源基因,命名為BnTCP7,屬于TCP家族classⅠ類,與TCP7-likeNC_027757基因核苷酸序列具有最高的相似性(95.68%)。生物信息學(xué)結(jié)果表明BnTCP7蛋白為親水性蛋白,同時(shí),結(jié)合NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)十字花科中19個(gè)TCP7及TCP7-like基因的蛋白序列構(gòu)建進(jìn)化樹。氨基酸序列比對(duì)、BnTCP7蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)同源建模及進(jìn)化樹分析等進(jìn)一步驗(yàn)證BnTCP7蛋白具有bHLH(basic helix-1oop-helix)結(jié)構(gòu)與陸奇豐等[18]及劉春浩等[4]結(jié)論一致,屬于TCP家族,與TCP7-likeNC_027757基因具有最近的遺傳進(jìn)化關(guān)系。

    基于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),本研究分析了BnTCP7基因在不同時(shí)期不同器官中的表達(dá)模式。BnTCP7基因在營(yíng)養(yǎng)器官中的表達(dá)量高于生殖器官,且在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)階段表達(dá)趨于穩(wěn)定,結(jié)合TCP家族在植物生長(zhǎng)發(fā)育中的作用,推測(cè)可能TCP家族基因更多地參與植物營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)階段。此外,甘藍(lán)型油菜‘3529’苗期在不同脅迫處理后葉中BnTCP7基因表達(dá)的模式分析表明,在非生物脅迫和激素處理下,甘藍(lán)型油菜‘3529’中BnTCP7表達(dá)量隨時(shí)間的改變而變化顯著。同時(shí),值得注意的是在ABA和GA3處理后,BnTCP7表達(dá)量變化趨勢(shì)一致,但是BnTCP7對(duì)2種激素的響應(yīng)快慢不一,即ABA處理下響應(yīng)速度快于GA3處理,推測(cè)可能和油菜內(nèi)源激素水平有關(guān),因?yàn)橛醒芯堪l(fā)現(xiàn)苗期至盛花期GA3水平高于ABA[24]。

    總之,BnTCP7基因不僅響應(yīng)冷、熱、損傷的非生物脅迫,并且參與ABA和GA3激素的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),說明甘藍(lán)型油菜BnTCP7基因可能在植物抵抗逆境脅迫響應(yīng)中發(fā)揮作用,為進(jìn)一步研究TCP轉(zhuǎn)錄因子在甘藍(lán)型油菜抗逆機(jī)制中的作用提供參考。

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