一種中草藥成分皮膚抑菌劑抑菌性能和毒理學(xué)安全性研究

武昌俊 李舜 蔡標(biāo) 戴陳偉 王超 周秀紅 童琳

摘 要 目的：研究一種含多種中草藥成分皮膚抑菌劑的抑菌性能及其毒理學(xué)安全性。方法：采用抑菌試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)和動物毒理學(xué)試驗(yàn)方法，對該皮膚抑菌劑的抑菌性能及其毒性進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室研究。結(jié)果：該皮膚抑菌劑對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和白色假絲酵母的抑菌圈直徑均大于7 mm，抑菌效果顯著；于37 ℃、相對濕度為75%的條件下放置3個月后，抑菌性能與存放前基本一致；皮膚刺激指數(shù)和眼刺激指數(shù)均為0，刺激反應(yīng)強(qiáng)度均為無刺激性；陰道黏膜刺激指數(shù)為0.89，刺激反應(yīng)強(qiáng)度為無刺激性。結(jié)論：該皮膚抑菌劑對細(xì)菌和真菌均具有良好的抑菌性能，效果穩(wěn)定，對人體安全、無刺激性。

關(guān)鍵詞 皮膚抑菌劑 中草藥 抑菌性能 安全性

中圖分類號：R187.1； R965.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1006-1533（2018）15-0075-04

Study on bacteriostasis and toxicological safety of a skin antibacterial agent composed with herbal compositions*

WU Changjun**， LI Shun***， CAI Biao， DAI Chenwei， WANG Chao， ZHOU Xiuhong， TONG Lin

（Scientific Research Section， Anhui Academy of Medical Sciences， Hefei 230001， China）

ABSTRACT Objective： To study the antibacterial efficacy and toxicological safety of a skin antibacterial agent composed with a variety of Chinese herbal medicines. Methods： Bacteriostatic test， stability test and animal toxicology test were performed to observe its antibacterial activity and toxicity. Results： The inhibitory zone for Escherichia coli， Staphylococcus aureus， Candida albicans were larger than 7 mm in diameter， which means its antibacterial effect is significant. The antibacterial activity test showed no significant change when it was stored for 3 months at 37 ℃ and 75% relative humidity. The irritation indexes for skin and eye were zero while the irritation index for vaginal mucosa was 0.89， which means without irritation. Conclusion： The antibacterial agent possesses a good antibacterial effect on some bacteria and fungi， with good safety to human body and stable effectiveness and without irritation.

KEY WORDS skin antibacterial agent； Chinese herbal medicine； antibacterial property； safety

目前，市場上常用皮膚抑菌劑的主要成分大多是化學(xué)合成物質(zhì)，某些化學(xué)合成物質(zhì)雖然抑（殺）菌作用較強(qiáng)，但具有一定的毒性，對環(huán)境和人體有一定的污染性和毒性。因此，研究并開發(fā)抑菌效果好、對人體刺激性小和毒副作用少、對環(huán)境污染小的皮膚抑菌劑非常必要。中草藥來源廣泛、安全性高，許多中草藥均具有廣譜抑菌功效[1-2]。本研究的皮膚抑菌劑系以蛇床子、黃柏、苦參等中草藥為主要原料，經(jīng)破碎、浸泡、提取、配制而成的黃色溶液。為了解該皮膚抑菌劑的抑菌效果和毒理學(xué)安全性，進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

受試皮膚抑菌劑：以蛇床子、黃柏、苦參等中草藥為主要原料制成的黃色溶液，pH為6.2。

試驗(yàn)菌株：大腸埃希菌（ATCC 8099）、金黃色葡萄球菌（ATCC 6538）、白色假絲酵母（ATCC 10231），均由安徽省艾浮地艾空氣凈化檢測站提供，來源于中國普通微生物菌種保藏管理中心。

實(shí)驗(yàn)動物：多次皮膚刺激試驗(yàn)選用體重250 ～ 300 g的健康白色豚鼠6只，由南京安立默科技有限公司提供（動物合格證號：No. 0032009）；急性眼刺激試驗(yàn)選用體重2.0 ～ 2.5 kg的健康新西蘭家兔3只，由南京安立默科技有限公司提供（動物合格證號：No. 0032013）；陰道黏膜刺激試驗(yàn)選用體重2.0 ～ 2.5 kg的健康雌性新西蘭家兔6只，由南京安立默科技有限公司提供（動物合格證號：No. 0032013）。

培養(yǎng)基：用于培養(yǎng)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和用于培養(yǎng)白色假絲酵母的沙氏培養(yǎng)基，均購自北京陸橋技術(shù)股份有限公司。

1.2 抑菌試驗(yàn)

取新鮮菌株斜面培養(yǎng)物，用無菌生理鹽水制成濃度為1×106 ～ 1×107 CFU/ml的菌懸液，無菌吸取菌懸液100 μl接種于相應(yīng)培養(yǎng)基表面，涂布均勻。準(zhǔn)確吸取受試皮膚抑菌劑20 μl滴于無菌圓紙片（φ5 mm×4 mm）上，37 ℃下烘干后貼放于培養(yǎng)基表面；陰性對照紙片上滴加無菌蒸餾水20 μl。每組3個平皿，每個平皿表面放置4張?jiān)囼?yàn)樣品紙片和1張陰性對照紙片，37 ℃下培養(yǎng)16 ～ 18 h。測量抑菌圈直徑，>7 mm表示有抑菌作用。

1.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

將受試皮膚抑菌劑密封包裝，于37 ℃、相對濕度為75%的條件下保存3個月，然后拆封重復(fù)進(jìn)行抑菌試驗(yàn)并測量抑菌圈直徑，研究其對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色假絲酵母的抑菌作用的穩(wěn)定性。

1.4 毒理學(xué)安全性試驗(yàn)

1.4.1 多次皮膚刺激試驗(yàn)

取6只皮膚正常、完好的白色豚鼠，于試驗(yàn)前24 h在它們的背部脊柱兩側(cè)備皮，左右范圍各約為3 cm×3 cm。將受試皮膚抑菌劑原液涂在一側(cè)脫毛皮區(qū)，然后用無刺激性塑料薄膜覆蓋、無刺激性膠布和繃帶固定，4 h后再用溫水洗去殘留的皮膚抑菌劑；另一側(cè)脫毛皮區(qū)不作處理，用作空白對照。每天如此處理1次，共連續(xù)處理14 d。每次處理后24 h觀察1次豚鼠的皮膚刺激反應(yīng)并進(jìn)行評分。

1.4.2 急性眼刺激試驗(yàn)

取3只雙眼均正常的新西蘭家兔，吸取受試皮膚抑菌劑原液0.1 ml滴入家兔一眼的眼結(jié)膜囊內(nèi)，使其眼被動閉合4 s，30 s后用生理鹽水沖洗；家兔的另一眼中滴入生理鹽水，用作對照。于滴眼后1、24 h和2、3、14、21 d觀察家兔的眼結(jié)膜、虹膜、角膜的損傷和恢復(fù)情況，并用2%熒光素鈉溶液或裂隙燈、放大鏡檢查其眼角膜和虹膜的變化，按眼刺激反應(yīng)分級標(biāo)準(zhǔn)[3]判斷眼刺激的強(qiáng)度。

1.4.3 陰道黏膜刺激試驗(yàn)

取6只處于非發(fā)情期且陰道口沒有分泌物、充血、水腫及其他損傷情況的健康雌性新西蘭家兔，分成試驗(yàn)組和對照組各3只。將試驗(yàn)組家兔陰部洗凈后仰面固定，暴露出會陰和陰道口，然后將鈍頭軟管與注射器連接，軟管前部用受試皮膚抑菌劑濕潤后輕柔插入家兔陰道內(nèi)4 ～ 5 cm，緩慢注入該皮膚抑菌劑原液2 ml，抽出軟管。對對照組家兔用生理鹽水作同樣處理。對兩組家兔每天如此處理1次，共連續(xù)處理5 d。末次處理后24 h，采用氣栓法處死家兔，取出完整的陰道，縱向切開，肉眼觀察是否有充血、水腫等癥狀或表現(xiàn)。此后，將陰道標(biāo)本于10%福爾馬林溶液中固定24 h，然后選取陰道兩端和中央的3個部位組織進(jìn)行制片、蘇木精-伊紅染色，顯微鏡下進(jìn)行組織病理學(xué)檢查[3]。

2 結(jié)果與分析

2.1 抑菌效果

本受試皮膚抑菌劑的抑菌試驗(yàn)結(jié)果見表1。從表1可見，該皮膚抑菌劑對3種試驗(yàn)菌的生長抑制效果均很明顯，其中對真菌（白色假絲酵母）的抑菌效果最好，對陰性細(xì)菌（大腸埃希菌）的抑菌效果次之，對陽性細(xì)菌（金黃色葡萄球菌）的抑菌效果較差。

2.2 穩(wěn)定性

本受試皮膚抑菌劑的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果見表2 ～ 表4。從表2 ～ 表4可見，該皮膚抑菌劑于37 ℃、相對濕度為75%的條件下保存3個月后，其抑菌試驗(yàn)中各平皿試驗(yàn)樣片上的抑菌圈直徑均>7 mm，抑菌效果仍明顯。其中，與存放前相比，該皮膚抑菌劑對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌的抑菌效果略有下降，對白色假絲酵母的抑菌效果沒有下降，表明該皮膚抑菌劑對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色假絲酵母的抑菌效果穩(wěn)定。

2.3 毒理學(xué)安全性

多次皮膚刺激試驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)用本受試皮膚抑菌劑原液對白色豚鼠完好皮膚連續(xù)涂抹14 d后，未見豚鼠皮膚出現(xiàn)紅斑、水腫等異常反應(yīng)，該皮膚抑菌劑的皮膚刺激指數(shù)為0，對豚鼠皮膚的刺激反應(yīng)強(qiáng)度為無刺激性。

急性眼刺激試驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)用本受試皮膚抑菌劑原液對新西蘭家兔連續(xù)滴眼21 d后，未見家兔眼出現(xiàn)結(jié)膜、虹膜和角膜損傷等異常反應(yīng)，該皮膚抑菌劑的眼刺激指數(shù)為0，對家兔眼結(jié)膜、虹膜和角膜的刺激反應(yīng)強(qiáng)度為無刺激性。

陰道黏膜刺激試驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)用本受試皮膚抑菌劑原液對新西蘭家兔連續(xù)給予陰道黏膜刺激5 d后，通過肉眼觀察和組織病理學(xué)檢查，未見家兔陰道黏膜出現(xiàn)明顯的異常反應(yīng)，該皮膚抑菌劑的陰道黏膜刺激指數(shù)為0.89，對家兔陰道黏膜的刺激反應(yīng)強(qiáng)度為無刺激性。

3 討論

目前，市售的皮膚抑菌劑種類繁多，但它們的主要成分大多是化學(xué)合成物質(zhì)，某些化學(xué)合成物質(zhì)雖然抑（殺）菌作用較強(qiáng)，但具有一定的毒性，對環(huán)境和人體有一定的污染性和毒性。例如，三氯生對水生生物有毒性[4]。三氯生在陽光的作用下可轉(zhuǎn)化形成氯仿、二噁英等毒性更大的物質(zhì)[5-6]。隨著安全、健康的觀念日益深入人心，有關(guān)中草藥抑菌、抗菌和殺菌的研究漸成熱點(diǎn)。

本研究結(jié)果表明，本受試皮膚抑菌劑對細(xì)菌和真菌生長均具有良好的、穩(wěn)定的抑制作用，其抑菌作用的強(qiáng)弱順序?yàn)檎婢?gt;陰性細(xì)菌>陽性細(xì)菌，且對皮膚、陰道黏膜以及眼結(jié)膜、虹膜和角膜均無刺激性。即：該皮膚抑菌劑對細(xì)菌和真菌均有良好的抑菌效果，且性能穩(wěn)定，對人體的親和性好，無刺激性、無致敏性，使用安全。

蛇床子是植物蛇床的果實(shí)，為常用中草藥，其有效成分為揮發(fā)油和多種香豆素衍生物[7-8]，具有抗真菌、抗過敏作用[8]?？鄥A和苦參堿氧化物是苦參的主要活性成分，具有抗菌、抗病毒、抗炎等作用[9-10]，對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌等細(xì)菌具有一定的抑制作用[11]。黃柏是臨床上使用較多的一線中草藥，具有抗菌、抗炎、解熱等作用[12]。本研究結(jié)果證實(shí)，以蛇床子、黃柏、苦參等中草藥為主要原料制得的本受試皮膚抑菌劑的抑菌效果顯著，且對人體使用安全，值得進(jìn)行進(jìn)一步的研究和系統(tǒng)安全性評價，以便為此類皮膚抑菌劑的開發(fā)和應(yīng)用提供更多的科學(xué)依據(jù)。

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