環(huán)狀RNA在肺癌研究中的進(jìn)展

成星宇 申洪

據(jù)全國(guó)腫瘤登記中心估計(jì)，2015年中國(guó)癌癥總發(fā)病約429萬(wàn)例，總死亡約281萬(wàn)例，其中肺癌是最常見(jiàn)的癌種，在我國(guó)的發(fā)病率和死亡率雙居首位[1]。大多數(shù)的肺癌患者在確診時(shí)已有轉(zhuǎn)移，五年生存率極低，僅約16%。非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）在肺癌中最為常見(jiàn)，約占總數(shù)的80%-85%。傳統(tǒng)的手術(shù)和放化療治療對(duì)晚期肺癌都收效甚微，近十余年間，針對(duì)肺癌驅(qū)動(dòng)基因和免疫檢查點(diǎn)的靶點(diǎn)治療異軍突起。靶向EGFR、ALK、KRAS等驅(qū)動(dòng)基因和PD-1、PD-L1、CTLA-4等免疫檢查點(diǎn)的靶點(diǎn)抑制劑，在晚期肺癌的臨床試驗(yàn)中效果顯著[2]。盡管如此，繼發(fā)性耐藥等問(wèn)題迫使人們不斷找尋新的治療方法。當(dāng)務(wù)之急，深入的機(jī)制研究以及新的靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)乃是癌癥研究的主旋律。隨著高通量測(cè)序的發(fā)展和算法的不斷更新，大量非編碼RNA被發(fā)現(xiàn)在人體中執(zhí)行多種生物學(xué)功能，參與了腫瘤等多種疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程[3]。不同于線性RNA（linear RNA），環(huán)狀RNA是一類不具有5'和3'末端頭尾結(jié)構(gòu)，以共價(jià)鍵形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的RNA分子。研究發(fā)現(xiàn)環(huán)狀RNA不易被核酸外切酶RNase R降解，半衰期達(dá)到48h以上，使得其能穩(wěn)定存在于真核細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中，且具有高度保守性和組織、時(shí)序、疾病特異性，從而有望成為潛在的腫瘤診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)[4]。

1 環(huán)狀RNA簡(jiǎn)介

1.1 研究歷史 早在19世紀(jì)70年代，研究者們通過(guò)電子顯微鏡等手段在病毒中觀察到單鏈、閉合、環(huán)狀結(jié)構(gòu)的RNA分子[5]，1979年，美國(guó)洛克菲勒大學(xué)的Hsu和Coca-Prados M[6]在HeLa細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中觀察到1%-2%的RNA具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)，首次證實(shí)真核細(xì)胞中環(huán)狀RNA的存在。在很長(zhǎng)的時(shí)間里，由于其發(fā)現(xiàn)偶然且檢測(cè)到的表達(dá)水平極低，環(huán)狀RNA被當(dāng)作無(wú)功能的非特異性的轉(zhuǎn)錄垃圾而躋身角落。2012年，Salzman等[7]利用RNA-Seq技術(shù)在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病患者骨髓、Hela細(xì)胞以及人胚胎干細(xì)胞（H9）中檢測(cè)到大量表達(dá)頗豐的環(huán)狀轉(zhuǎn)錄RNA分子，由此證實(shí)了在人類胚胎干細(xì)胞和惡性組織細(xì)胞中均廣泛存在環(huán)狀RNA。隨后成千上萬(wàn)的環(huán)狀RNA被發(fā)現(xiàn)，已證實(shí)在人類各細(xì)胞類型（hg19）、黑腹果蠅（dm3）等生物體中均廣泛存在大量環(huán)狀RNA，引發(fā)了新一輪的研究熱潮。

1.2 生源機(jī)制 早期研究者們對(duì)于環(huán)狀RNA的認(rèn)識(shí)源于偶然發(fā)現(xiàn)的“Scrambled Exon”[8]，提示環(huán)狀RNA的來(lái)源與基因外顯子有著密切的聯(lián)系。后續(xù)的研究表明除大部分的環(huán)狀RNA由外顯子構(gòu)成，內(nèi)含子也大量參與了形成[9]。人們對(duì)環(huán)狀RNA的生源機(jī)制尚不明確，研究表明單個(gè)基因位點(diǎn)可以通過(guò)非經(jīng)典可變反向剪接（alternative back-splicing junctions）及經(jīng)典可變剪接（alternative splice junctions）產(chǎn)生多種類型的環(huán)狀RNA[10]。2013年，Jeck等[4]提出外顯子環(huán)化形成環(huán)狀RNA的兩種模型，一種是“套索驅(qū)動(dòng)環(huán)化”（lariat-driven circularization），即基因外顯子共價(jià)結(jié)合構(gòu)成環(huán)化；另一種是“內(nèi)含子配對(duì)驅(qū)動(dòng)環(huán)化”（intron-pair-driven circularization），即兩個(gè)內(nèi)含子互補(bǔ)配對(duì)形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)。隨后兩種模型皆由剪接體剪切剩余內(nèi)含子形成環(huán)狀RNA。2014年，Zhang等[11]利用全基因組分析和重構(gòu)circRNA證實(shí)了除了ALU重復(fù)序列可以介導(dǎo)外顯子環(huán)化外，內(nèi)含子的互補(bǔ)序列也能發(fā)揮此功能。2015年，Ivanov[12]及其團(tuán)隊(duì)同樣證實(shí)了這一機(jī)制。另外，研究表明RNA結(jié)合蛋白Quaking能夠在上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）過(guò)程中結(jié)合前體mRNA（pre-mRNA）的特定位點(diǎn)，促進(jìn)環(huán)狀RNA的形成[13]。結(jié)合現(xiàn)有研究，根據(jù)環(huán)狀RNA成環(huán)方式不同將環(huán)狀RNA分為以下幾類（圖1A）：外顯子反向剪接成環(huán)（exonic circRNA, ecircRNA）[10]、保留內(nèi)含子的轉(zhuǎn)錄本反向剪接（exon-intron circRNA, EIcircRNA）[14]、內(nèi)含子反向互補(bǔ)配對(duì)（circular intronic RNA, ciRNA）[15]。研究還發(fā)現(xiàn)前體tRNA能剪切成環(huán)形成tricRNA（tRNA intronic circRNA）[16]。此外，研究人員以白血病中的PML/RARα基因?yàn)檠芯繉?duì)象，在其染色體易位上發(fā)現(xiàn)了2個(gè)融合環(huán)狀RNA（fusion circRNAs, f-circRNA），體內(nèi)試驗(yàn)表明融合環(huán)狀RNA能促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)化和腫瘤生長(zhǎng)[17]?？傊?，環(huán)狀RNA的生源機(jī)制有待進(jìn)一步探索并加以明確。

1.3 生物學(xué)功能

1.3.1 MicroRNA海綿 MicroRNA（miRNA）是一類線性的非編碼RNA，為基因表達(dá)的重要轉(zhuǎn)錄后調(diào)控因子，能夠競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合靶mRNA并促進(jìn)其降解（圖1B）等，影響生理以至疾病的方方面面。2013年，Hansen等[18]在人和小鼠大腦中鑒定出環(huán)狀RNA分子ciRS-7/CDR1as能夠顯著抑制miR-7的表達(dá)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)ciRS-7上包含了70多個(gè)miR-7的特異保守結(jié)合位點(diǎn)；同時(shí)在小鼠睪丸中發(fā)現(xiàn)環(huán)狀RNA Sry擁有10多個(gè)miR-138的結(jié)合位點(diǎn)，并能特異調(diào)控mir-138的表達(dá)，證實(shí)了環(huán)狀RNA能夠結(jié)合靶MicroRNA調(diào)控其表達(dá)的功能，推翻了環(huán)狀RNA作為無(wú)功能轉(zhuǎn)錄垃圾的觀點(diǎn)，拉開(kāi)了功能研究的序幕。Memczak等[19]同樣證實(shí)了ciRS-7/CDR1as的MicroRNA海綿作用，證明CDR1as是miRNA的天然拮抗劑，它與miRNA的結(jié)合力是其他轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的10倍。同時(shí)，Zheng及其團(tuán)隊(duì)[20]研究發(fā)現(xiàn)circHIPK3有9個(gè)miRNA的多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，表明環(huán)狀RNA的海綿作用可以同時(shí)針對(duì)多個(gè)miRNA。但目前僅有少數(shù)的環(huán)狀RNA已驗(yàn)證具有miRNA海綿作用。環(huán)狀RNA作為天然的競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源性RNA（competitive endogenous RNA, ceRNA），有望替代抗核苷酸化學(xué)藥物，調(diào)控miRNA的水平，以期調(diào)節(jié)上下游基因網(wǎng)絡(luò)，對(duì)人類生理和疾病產(chǎn)生影響[21]。

1.3.2 RNA蛋白復(fù)合物 在ceRNA的競(jìng)爭(zhēng)網(wǎng)絡(luò)中，大量研究證實(shí)環(huán)狀RNA和蛋白分別能與miRNA競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，但環(huán)狀RNA與蛋白的結(jié)合卻少有發(fā)現(xiàn)。德國(guó)的Albrecht Bindereif教授及其團(tuán)隊(duì)[22]通過(guò)甘油密度梯度離心實(shí)驗(yàn)觀察沉降系數(shù)的分布，初步得到環(huán)狀RNA與蛋白結(jié)合的線索證據(jù)。隨后鑒定出12種能夠同RNA結(jié)合蛋白（RNA-binding protein,RBP）IMP3結(jié)合的環(huán)狀RNA分子，證實(shí)環(huán)狀RNA能和蛋白結(jié)合形成RNA蛋白復(fù)合物。Holdt等[23]發(fā)現(xiàn)circANRIL能與PES1蛋白結(jié)合，介導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化。隨后的研究也證實(shí)了一些環(huán)狀RNA可以結(jié)合蛋白產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)。

1.3.3 轉(zhuǎn)錄翻譯 一直以來(lái)環(huán)狀RNA被當(dāng)作非編碼RNA的一類，既往的研究并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)環(huán)狀RNA在真核細(xì)胞內(nèi)存在翻譯活動(dòng)。而最新的研究表現(xiàn)，環(huán)狀RNA中含有豐富的m6A甲基化修飾。YTHDF3是m6A的識(shí)別蛋白，能夠與環(huán)狀RNA的修飾位點(diǎn)結(jié)合，并募集eIF4G2和其他翻譯起始因子，從而啟動(dòng)環(huán)狀RNA的翻譯[24]。Pamudurti等[25]在果蠅的大腦組織中通過(guò)核糖體印記分析鑒定出circMBL的終止密碼子處有核糖體結(jié)合，并通過(guò)蛋白質(zhì)譜分析得到了環(huán)狀RNA翻譯蛋白的直接證據(jù)。這使得環(huán)狀RNA或許有可能成為新的一類信使RNA分子。

1.3.4 其他功能 環(huán)狀RNA還能調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄[14]，作為premRNA的剪接調(diào)節(jié)器影響蛋白質(zhì)的合成[26]。然而其生物學(xué)功能研究仍處于起步階段，需要更深入的研究加以闡釋。

2 環(huán)狀RNA與腫瘤

環(huán)狀RNA廣泛參與了生理和疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，在心血管系統(tǒng)、消化道系統(tǒng)、血液循環(huán)系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)等疾病中均發(fā)揮著重要作用，在胚胎、外泌體中也有豐富的表達(dá)，在腫瘤方面亦如此。研究發(fā)現(xiàn)環(huán)狀RNA大多以MicroRNA海綿的身份在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用[27]（圖2[28-59]）。其中CDR1as（ciRS-7）、circ-HIPK3等環(huán)狀RNA在多種類型的腫瘤組織以及非腫瘤性疾病中均有豐富表達(dá)，相應(yīng)的功能機(jī)制研究受到了廣泛的關(guān)注。

2.1 CDR1as 小腦變性相關(guān)蛋白1反義轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物CDR1as是最早發(fā)現(xiàn)具有MicroRNA海綿功能的環(huán)狀RNA。CDR1as結(jié)合miR-7的經(jīng)典組合已證實(shí)在神經(jīng)退行性疾病、糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化中發(fā)揮重要調(diào)控作用[60]。研究表明CDR1as/miR-7在結(jié)直腸癌、肝癌等腫瘤中調(diào)控其生物學(xué)行為。既往研究已揭示miR-7可以直接作用于腫瘤相關(guān)信號(hào)通路中的重要蛋白，如腦膠質(zhì)瘤中miR-7/EGFR和PKB/IRS-1和IRS-2通路，乳腺癌中miR-7/Pak1和HOXD10通路和在肝癌中的miR-7/PI3K和Akt通路等，提示CDR1as可通過(guò)miR-7海綿間接調(diào)控miR-7相關(guān)通道[61]，影響腫瘤的生物學(xué)行為。

2.2 circHIPK3環(huán)狀RNA分子 circHIPK3在多種類型的腫瘤和正常組織中差異表達(dá)明顯。研究人員發(fā)現(xiàn)circHIPK3可以結(jié)合多種MicroRNA發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)：circHIPK3/miR-124在人體細(xì)胞中調(diào)控其生物學(xué)活動(dòng)；circHIPK3/miR-30a/表皮生長(zhǎng)因子EGFC、FZD4和WNT2在糖尿病視網(wǎng)膜血管功能障礙中具有重要作用[62]；circHIPK3/miR-558/HPSE在膀胱癌中調(diào)控其遷移、侵襲和血管生成[52]。

3 環(huán)狀RNA與肺癌

前人通過(guò)高通量測(cè)序已經(jīng)在肺癌組織和細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)了成千上萬(wàn)的環(huán)狀RNA，但其在肺癌中的具體功能和作用機(jī)制卻少有研究。總體而言，已有的環(huán)狀RNA在肺癌中的研究大致可分為生物標(biāo)志物研究和功能機(jī)制研究。

3.1 生物標(biāo)志物 Yao等[63]發(fā)現(xiàn)在NSCLC中circRNA-100876高表達(dá)與肺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期的關(guān)系密切，且circRNA 100876高表達(dá)的NSCLC患者的總體生存時(shí)間明顯縮短。Zhu等[64]利用基因芯片在肺腺癌中篩選出具有差異表達(dá)的環(huán)狀RNA，其中hsa_circ_0013958在組織細(xì)胞、血漿中均顯著上調(diào)，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Zhao等[65]對(duì)4例非吸煙型早期肺腺癌的腫瘤組織和癌旁組織進(jìn)行高通量測(cè)序，找到300多個(gè)在腫瘤組織中差異表達(dá)的環(huán)狀RNA，并通過(guò)RT-qPCR驗(yàn)證了其中的5個(gè)，結(jié)果與芯片結(jié)果相符，為早期肺腺癌的診斷和治療研究提供了潛在的靶點(diǎn)。Luo等[66]研究注意到hsa_circ_0000064在肺癌組織及肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和H1229中表達(dá)上調(diào)，其異常表達(dá)與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期等臨床特征密切相關(guān)。

3.2 功能機(jī)制 Jin等[67]對(duì)肺癌病例和健康對(duì)照組的血液樣本進(jìn)行RNA測(cè)序，檢測(cè)了miRNA、circRNA和mRNA以及長(zhǎng)非編碼rna（lncRNA），通過(guò)通路富集分析，建立了以MiRNA為目標(biāo)的內(nèi)源性競(jìng)爭(zhēng)網(wǎng)絡(luò)，篩選重要節(jié)點(diǎn)進(jìn)行生物信息學(xué)預(yù)測(cè)，構(gòu)建了轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。Hansen等[68]研究發(fā)現(xiàn)CDR1as能通過(guò)結(jié)合miR-7發(fā)揮對(duì)腫瘤的抑制作用，在肺癌中亦如此。Wan等[69]對(duì)78例肺癌患者的癌組織和癌旁組織進(jìn)行了circ-ITCH的檢測(cè)，結(jié)果顯示circ-ITCH在肺癌中表達(dá)明顯減少。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，circ-ITCH異常表達(dá)可以顯著影響其親代癌抑制基因ITCH的表達(dá)，抑制肺癌細(xì)胞增殖。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)表明circ-ITCH可充當(dāng)miR-7和mir-214海綿，增強(qiáng)ITCH基因的表達(dá)，從而抑制Wnt/β-Catenin信號(hào)通路的激活。田芳[70]及其團(tuán)隊(duì)在NSCLC細(xì)胞系H1299、H827、H1975、H2170、H520、H1650中均檢測(cè)到circ-HIPK3的表達(dá)，且NCI-H2170表達(dá)量最高，NCI-H1299表達(dá)量最低。實(shí)驗(yàn)表明在NCI-H1299和NCI-H2170中，circHIPK3能結(jié)合miR-379調(diào)控類胰島素樣生長(zhǎng)因子IGF1的表達(dá)水平，促進(jìn)細(xì)胞增殖。利用肉桂醛干預(yù)抑制Wnt/β-Catenin信號(hào)通路，發(fā)現(xiàn)hsa_circ_0043256顯著下調(diào)，并能夠作為miR-1252海綿削弱肉桂醛的抑制作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)ITCH基因表達(dá)與hsa_circ_0043256成正相關(guān)，提出了肉桂醛干預(yù)NSCLC hsa_circ_0043256/ miR-1252/ITCH軸的作用新機(jī)制[71]。Zhu等[64]研究表明hsa_circ_0013958能與miR-134結(jié)合調(diào)控細(xì)胞周期蛋白D1（cyclin D1）的表達(dá)。

3.3 啟示 迄今為止，越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)證據(jù)證實(shí)環(huán)狀RNA具有穩(wěn)定特性和組織、時(shí)序、疾病特異性，這使得環(huán)狀RNA相較于miRNA似乎更具有生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)價(jià)值。從已有的關(guān)于肺癌中的環(huán)狀RNA來(lái)看，首先，由于高通量測(cè)序成本代價(jià)高，已有研究用于測(cè)序的樣本量較少，而后續(xù)試驗(yàn)驗(yàn)證所用總體樣本量雖然基本可以達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，但是具體到肺癌各組織分型的標(biāo)本數(shù)據(jù)明顯欠缺，使得橫向比對(duì)各組織分型中的環(huán)狀RNA的數(shù)據(jù)明顯缺失或者不可靠；肺癌發(fā)生發(fā)展時(shí)間軸（正常-癌前病變-早期-晚期肺癌）縱向比對(duì)環(huán)狀RNA表達(dá)差異和機(jī)制研究由于診斷和取材等限制難以實(shí)現(xiàn)。期待隨著高通量技術(shù)的不斷成熟、成本的降低以及算法的不斷完善，大范圍大樣本的肺癌環(huán)狀RNA研究能成為現(xiàn)實(shí)。其次，研究發(fā)現(xiàn)環(huán)狀RNA在人體血漿、外泌體等也廣泛存在，而現(xiàn)有的肺癌環(huán)狀RNA研究利用的標(biāo)本種類過(guò)于單一，對(duì)于肺癌循環(huán)血漿及外泌體等的環(huán)狀RNA研究少有涉及，不同標(biāo)本類型間的差異研究更屬罕見(jiàn)。再者，環(huán)狀RNA分子具有多種重要的生物學(xué)功能，且目前為止僅有少量的環(huán)狀RNA經(jīng)驗(yàn)證具有MicroRNA海綿功能。此外現(xiàn)有肺癌環(huán)狀RNA研究幾乎都致力于研究一個(gè)新的環(huán)狀RNA分子的MicroRNA海綿功能，使得有關(guān)研究雷同而不夠全面、不夠深入。ceRNA內(nèi)源性競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制的復(fù)雜調(diào)控網(wǎng)絡(luò)亟需納入更多的因子（如mRNA、蛋白等）來(lái)豐富和完善。此外，集中對(duì)CDR1as、circHIPK3等明星環(huán)狀RNA分子的更深層次機(jī)制和功能的挖掘有助于我們更深刻地了解環(huán)狀RNA的特性。最后，環(huán)狀RNA性質(zhì)穩(wěn)定，半衰期較長(zhǎng)且不易降解的特性賦予了針對(duì)環(huán)狀RNA進(jìn)行RNA藥物研發(fā)的可行性；環(huán)狀RNA內(nèi)源性競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制為替代抗核苷酸化學(xué)治療的研究提供了理論基礎(chǔ)。目前環(huán)狀RNA的研究尚處于起步階段，功能和機(jī)制研究尚不明確，基于環(huán)狀RNA的RNA藥物研發(fā)任重而道遠(yuǎn)。

圖1 環(huán)狀RNA的形成機(jī)制和MicroRNA海綿功能。A：環(huán)狀RNA的形成機(jī)制示意圖：內(nèi)含子反向互補(bǔ)配對(duì)（ciRNA)、外顯子反向剪接成環(huán)(ecircRNA)、保留內(nèi)含子的轉(zhuǎn)錄本反向剪接(EIcircRNA)；B：MircoRNA結(jié)合mRNA能促進(jìn)其降解,而環(huán)狀RNA和前體mRNA上均含有MRE反應(yīng)元件（MicroRNA Response Element,MRE),能夠競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合MicroRNA。從而削弱MircoRNA對(duì)mRNA的負(fù)反饋抑制作用。Fig 1 Formation mechanism and function of MicroRNA sponge of circular RNA.A：Abridged general view for formation mechanism of circular RNA：circular intronic RNA（ciRNA)、exonic circRNA（ecircRNA)、exon-intron circRNA（EIcircRNA)；B:MircoRNA could promote the degradation of mRNA through combination.Meanwhile circRNA contains MRE response elements just the same as mRNA so that competitive binding with MicroRNA is exist.Thus, circRNA could weaken the negative feedback of MicroRNA on mRNA.

4 展望

靶點(diǎn)治療已成為癌癥治療研究的新寵。肺癌作為我國(guó)發(fā)病率和死亡率雙居首位的癌種，盡管EGFR、PD-L1等靶點(diǎn)治療在臨床試驗(yàn)中大放光彩，但是我們也必須看清局限的治療目標(biāo)和緩解率以及繼發(fā)性耐藥等問(wèn)題迫使我們不能忽視對(duì)肺癌的基礎(chǔ)研究，還需尋找新的預(yù)測(cè)、診斷和治療靶點(diǎn)。環(huán)狀RNA在真核細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中廣泛存在，相對(duì)于線性的RNA具有高度穩(wěn)定特性和組織、時(shí)序、疾病特異性，在腫瘤中發(fā)揮著一系列生物學(xué)功能，使其具備作為腫瘤預(yù)測(cè)、診斷和治療靶點(diǎn)的潛能。但環(huán)狀RNA的研究尚處于起步階段，其機(jī)制及生物學(xué)功能尚不明確，在肺癌中的研究更是屈指可數(shù)，有待更多更深層次的研究來(lái)闡明。在肺癌的環(huán)狀RNA研究中，我們還需橫向擴(kuò)大各組織病理分型的樣本數(shù)量和樣本類型以比較不同肺癌分型和樣本類型的環(huán)狀RNA差異，或者縱向延伸肺癌發(fā)生發(fā)展時(shí)間軸以比較肺癌發(fā)生發(fā)展中的環(huán)狀RNA差異。實(shí)現(xiàn)這些目標(biāo)，需要強(qiáng)大的人力、物力、財(cái)力的支撐，相信隨著高通量測(cè)序技術(shù)的完善和成本的降低，以及算法的不斷完善，勢(shì)必會(huì)準(zhǔn)確預(yù)測(cè)出更多的環(huán)狀RNA分子，實(shí)現(xiàn)大規(guī)模大樣本的環(huán)狀RNA研究，為探索肺癌的生物學(xué)標(biāo)志物以及后續(xù)的功能研究打下基礎(chǔ)；環(huán)狀RNA在肺癌中的功能機(jī)制研究也不會(huì)僅僅局限于MiRNA海綿，而是在ceRNA內(nèi)源性競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制的海洋里大放異彩，奠定內(nèi)源性競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制替代抗核苷酸化學(xué)治療的基礎(chǔ)。RNA藥物治療腫瘤從基礎(chǔ)走向臨床或?qū)⒊蔀楸厝弧？偠灾?，環(huán)狀RNA是一類新興的有望成為腫瘤潛在的預(yù)測(cè)、診斷和治療靶點(diǎn)的RNA分子，具有極高的研究潛能和價(jià)值。