“三黃連”合劑穩(wěn)定性試驗研究

谷俐媛，梁萬文 ，施 君，韋英益，胡庭俊

（1.廣西大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧 530005；2.廣西壯族自治區(qū)水產(chǎn)科學(xué)研究院，廣西 南寧 530021）

“三黃連”合劑是一種中獸藥復(fù)方新制劑，主要用于羅非魚鏈球菌病的防治。其主要組分黃芩為唇形科黃芩屬植物黃芩的干燥根，味苦、性寒，歸肺、膽、脾、大腸和小腸經(jīng)，具有清熱燥濕、涼血、解毒、保胎、安胎等功效，是常用的傳統(tǒng)中藥材之一，用于治療肺熱咳嗽、發(fā)熱煩渴、濕熱黃疸、胎動不安、瘡癰腫毒和瀉痢熱淋等癥狀。近年來隨著對中藥研究的不斷深入，黃芩中的化學(xué)成分也被逐步探明和分離。黃芩的化學(xué)成分主要包括黃酮類化合物，如黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素和千層紙素A等［1］。近代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)黃芩的主要化學(xué)成分具有多種藥理作用，包括抗菌、抗病毒、抗驚厥、抗腫瘤、解熱、保胎、安胎、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等，其作用機制也被逐漸揭示?！叭S連”合劑的另一組分連翹是木犀科連翹屬植物連翹的果實，性微寒，味苦，入肺、心、膽經(jīng)，有清熱解毒、消癰散結(jié)的功效，具有“瘡家圣藥”之稱。連翹常用于外感風(fēng)熱、咽喉腫痛、癰腫瘡癤、瘰疬等癥狀。連翹的化學(xué)成分復(fù)雜，主要發(fā)現(xiàn)有木脂素類，如牛蒡苷元、馬太樹脂酚苷和連翹苷元等?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究也證實連翹具有廣泛的藥理學(xué)作用，如抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化等。

穩(wěn)定性研究是藥學(xué)研究中的重要組成部分，通常以質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的項目對制劑進行穩(wěn)定性評價，制劑中質(zhì)控成分的含量變化及其趨勢是穩(wěn)定性研究的重點［2-3］。該研究在“三黃連”合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，通過光加速試驗、加速試驗考查在溫度、濕度、光照的影響下制劑的理化性質(zhì)變化規(guī)律，評價“三黃連”合劑的穩(wěn)定性，以期為新獸藥申報、生產(chǎn)、包裝、貯存和運輸條件提供必要的資料。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

“三黃連”合劑3批供試品 （批號分別為：130629、130702、130705， 廣西大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院藥理實驗室自制）；黃芩苷對照品 （批號：110715-201117，購于中國食品藥品檢定研究院）；連翹苷對照品（批號：110821-201112，購于中國食品藥品檢定研究院）；黃芩、連翹標(biāo)準(zhǔn)對照藥材（購于中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所）；乙腈（色譜純，TEDIA）；超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

藥品強光照射試驗箱（型號：SHH-100GD，重慶永生實驗儀器廠）；藥品穩(wěn)定性試驗箱 （型號：SHH-250SD，重慶永生實驗儀器廠）；pH值計（型號：PHS-3C，上海雷磁儀器廠）；通風(fēng)柜（型號：FF-09056-16，科藝科技有限公司）；電熱恒溫干燥箱（型號：DHG-9071A，上海精宏）；三用紫外儀（型號：ZF-2，上海安亭電子儀器廠）；硅膠H板（100mm×100mm，青島海洋化工廠分廠）；硅膠G板（100mm×100mm，青島海洋化工廠分廠）；展開缸；毛細(xì)點樣管；電子天平（型號：FA2004N，上海精密科學(xué)儀器有限公司）；Waters 2695分離單元、Waters 2998二極管陣列檢測器 （美國Waters公司）；Empower色譜工作站。

1.3 光加速試驗

參照農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的 “獸藥穩(wěn)定性試驗技術(shù)規(guī)范（試行）”，取“三黃連”合劑3批分別裝入無色透明容器內(nèi)，置于藥品強光照射試驗箱，于照度（4500±500）lx條件下放置10 d，在第5天和第10天定時取樣，按照口服液的穩(wěn)定性重點考查項目進行檢測，分別檢測合劑的性狀、主要有效成分含量、色澤、澄清度、pH值、密度等。pH值、密度等的測定方法參照《中華人民共和國獸藥典》一部附錄［4］操作要求進行。黃芩苷和連翹苷的定性檢測采用薄層色譜法，定量檢測采用高效液相色譜法。

1.4 加速試驗

參照農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的 “獸藥穩(wěn)定性試驗技術(shù)規(guī)范（試行）”，取“三黃連”合劑3批，按照市售包裝，置于藥品穩(wěn)定性試驗箱，在溫度（40±2）℃、相對濕度 （75±5）%的條件下放置6個月，每個月取樣1次，按照口服液的穩(wěn)定性試驗重點考查項目進行檢測，分別檢測合劑的性狀、主要有效成分含量、色澤、澄清度、pH值、密度等。pH值、密度等的測定方法參照《中華人民共和國獸藥典》一部附錄［4］操作要求進行。黃芩苷和連翹苷的定性檢測采用薄層色譜法，定量檢測采用高效液相色譜法。

2 結(jié)果與分析

2.1 光加速試驗

光加速試驗結(jié)果見表1。由表1可知，“三黃連”合劑在照度（4 500±500）lx的條件下放置 10 d，其性狀均為棕褐色澄明液體，味感均為苦味并略帶甜味，TLC法鑒別黃芩和連翹均在相同位置顯示與標(biāo)準(zhǔn)品同色的斑點，pH值、密度以及黃芩苷、連翹苷的含量均在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，說明 “三黃連”合劑對光穩(wěn)定，貯存過程中對避光無要求，可用透明容器進行包裝。

2.2 加速試驗

3批“三黃連”合劑的加速試驗結(jié)果見表2～表4。由表2～表4可知，“三黃連”合劑在溫度（40±2）℃、相對濕度（75±5）%的條件下放置 6 個月，其性狀均為棕褐色澄明液體，味感均為苦味并略帶甜味，TLC法鑒別黃芩和連翹均在相同位置顯示與標(biāo)準(zhǔn)品同色的斑點；第0～2個月無沉淀，第3個月及以后均出現(xiàn)了少量沉淀，但振蕩后可溶解，其密度、pH值均在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)；黃芩苷、連翹苷含量隨觀察時間延長整體呈下降趨勢，但仍在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。

3 討論

環(huán)境因素是影響藥物穩(wěn)定性的重要因素之一。部分藥物在強光、高溫、高濕作用下，可能會發(fā)生變質(zhì)、成分分解等，進而使藥效降低甚至產(chǎn)生毒性成分，因此，對藥品穩(wěn)定性的考查是非常重要的一個環(huán)節(jié)。穩(wěn)定性試驗的目的是為了考查藥物在溫度、濕度、光照的影響下隨時間變化的規(guī)律，從而為藥品包裝、貯存和運輸條件提供科學(xué)依據(jù)，同時也為產(chǎn)品有效期的制定提供依據(jù)。穩(wěn)定性試驗包括影響因素試驗、加速試驗和長期試驗等，其中，影響因素試驗適用于原料藥穩(wěn)定性的考查，加速試驗與長期試驗適用于藥物制劑穩(wěn)定性的考查。

薄層色譜法是對藥物有效成分進行快速分離、定性分析的一項重要技術(shù)，其屬于色譜技術(shù)，具有微量、快速、分離效率高、靈敏度高、設(shè)備簡單、操作簡便、結(jié)果直觀、不易被污染等優(yōu)點［4］。高效液相色譜法具有靈敏度高、選擇性好、分離性能好、分析速度快、適用范圍廣、樣品量少、容易回收等優(yōu)點，在化學(xué)、醫(yī)藥、食品、環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用，是最常用的藥物分離和檢測方法［5-7］。該研究對“三黃連”合劑進行了光加速試驗和加速試驗，分別考查了該制劑的性狀、pH值、密度和有效成分含量。在光加速試驗中，3批“三黃連”合劑在強光照射試驗箱中放置10 d，在第5天和第10天時取樣檢測，結(jié)果表明各項指標(biāo)均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，“三黃連”合劑對強光不敏感，市售包裝可以采用透明玻璃瓶。光加速試驗中，“三黃連”合劑的黃芩苷含量在第10天時略有增加，這可能是由于試驗條件并不能保持完全一致造成的實驗誤差以及一些人為因素造成的操作誤差，如高效液相色譜儀運行時間的差異、流動相配制時的誤差等，這還需要進一步的探索和研究。

表1 “三黃連”合劑光加速試驗結(jié)果

表2 批號為130629的“三黃連”合劑加速試驗結(jié)果

表3 批號為130702的“三黃連”合劑加速試驗結(jié)果

表4 批號為130705的“三黃連”合劑加速試驗結(jié)果

在加速試驗中，取“三黃連”合劑按照市售包裝置于藥品穩(wěn)定性試驗箱6個月，每個月取樣檢測。在3～6個月時，3批“三黃連”合劑均出現(xiàn)了沉淀，但振蕩后可以溶解，仍然符合要求。其余各項指標(biāo)，包括性狀、密度、pH值和有效成分含量等均沒有明顯變化，符合“三黃連”合劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。藥品質(zhì)量直接關(guān)系到廣大養(yǎng)殖戶的利益，對于獸藥的質(zhì)量必須嚴(yán)格把關(guān)，因此，還需要對該藥進一步留樣觀察進行長期檢測，對其沉淀的產(chǎn)生、有效成分的含量等繼續(xù)檢測，并進行多次重復(fù)試驗，以確保其穩(wěn)定性。

加速試驗中檢測到的黃芩苷、連翹苷含量在3批“三黃連”合劑中均呈下降趨勢，可見在長期的貯存過程中，該藥的有效成分含量有所下降，這可能會影響藥品的藥效。因此，在穩(wěn)定性試驗尤其是長期試驗過程中要注意對藥品有效成分含量的檢測，同時，應(yīng)該通過臨床試驗對供試品進行藥效學(xué)考查，這樣才能使有效期的制定更加科學(xué)。另外，長期的貯存中“三黃連”合劑也出現(xiàn)了沉淀，雖然振蕩后可溶解，但在長期貯存過程中沉淀可能會進一步增加，這也可能會對藥效和性狀產(chǎn)生一定的影響。提示“三黃連”合劑的制備過程尚待優(yōu)化，可以從調(diào)節(jié)合劑的 pH 值［8］、加入助溶劑［9-10］和穩(wěn)定劑［11］等方向考慮，使“三黃連”合劑更加穩(wěn)定，從而保證藥效。

4 結(jié)論

該研究通過光加速試驗、加速試驗檢測了“三黃連”合劑的穩(wěn)定性，在規(guī)定的時間內(nèi)“三黃連”合劑性狀穩(wěn)定，各項指標(biāo)符合規(guī)定?！叭S連”合劑對光不敏感，在生產(chǎn)、貯存和運輸過程中不必考慮避光，可以采用透明容器進行包裝。