甘丙肽在阿爾茨海默病患者血漿中的表達(dá)及意義

李 雷 李 嫻 于 婷

(濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院診斷教研室，山東 濟(jì)寧 272067)

阿爾茨海默病(AD)是一種以漸進(jìn)性學(xué)習(xí)能力損害及近期記憶障礙為主要表現(xiàn)的神經(jīng)變性疾病。AD的早期臨床診斷因缺乏必要的生物學(xué)標(biāo)志物而十分困難。人源甘丙肽(GAL)是由30個(gè)氨基酸構(gòu)成的神經(jīng)肽，廣泛分布于中樞及外周神經(jīng)系統(tǒng)，具有重要的神經(jīng)生物學(xué)功能，主要參與遞質(zhì)釋放、學(xué)習(xí)、記憶等生理功能的調(diào)節(jié)〔1〕。對(duì)AD患者的尸檢〔2〕及AD動(dòng)物模型研究〔3〕已證實(shí)GAL及其受體在腦內(nèi)高表達(dá)，但是AD患者血漿GAL的表達(dá)是否出現(xiàn)改變目前尚不清楚。本研究檢測(cè)AD患者血漿GAL水平，并探討其與認(rèn)知功能及海馬體積的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1研究對(duì)象 選擇濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2013年6月至2015年12月門(mén)診及住院的AD患者53例，入選病例均符合美國(guó)精神醫(yī)學(xué)會(huì)的精神障礙診斷統(tǒng)計(jì)手冊(cè)第4版(DSM-Ⅳ)規(guī)定的 AD型癡呆的診斷標(biāo)準(zhǔn)，由3名醫(yī)師獨(dú)立做出診斷，應(yīng)用認(rèn)知功能評(píng)定簡(jiǎn)易智能狀態(tài)檢查(MMSE)量表判斷癡呆分級(jí)屬于輕度癡呆(20～25分)及中度癡呆(10～19分)。其中輕度癡呆AD患者24例，男14例，女10例，年齡60～79歲，平均67.3歲；中度癡呆AD患者29例，男16例，女13例，年齡63～80歲，平均69.5歲。正常對(duì)照組32例，選自同期該院老年體檢者，男17例，女15例，年齡60～83歲，平均68.7歲；無(wú)神經(jīng)及精神疾病史，神經(jīng)系統(tǒng)檢查無(wú)定位體征，常規(guī)磁共振成像(MRI)無(wú)梗死等其他特殊表現(xiàn)，MMSE量表≥25分。3組研究對(duì)象均無(wú)心、肺、肝、腎等重大疾病，組間年齡、性別及教育程度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2方法 收集AD患者及正常對(duì)照組禁食12 h的空腹肘靜脈血4 ml，加入含有EDTA-Na2 1.5 mg/ml及抑肽酶500 IU/ml的試管中，全血4℃離心(3 000 r/min，20 min)分離血漿，分裝后-80℃凍存待測(cè)。采用雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法(ELISA)檢測(cè)血漿GAL含量，檢測(cè)試劑盒為美國(guó)USCNLIFE公司產(chǎn)品，實(shí)驗(yàn)過(guò)程按說(shuō)明書(shū)操作,結(jié)果用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)比色測(cè)定吸光度(OD值),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度計(jì)算血漿標(biāo)本GAL的濃度。由3名醫(yī)師獨(dú)立應(yīng)用如下工具對(duì)認(rèn)知功能進(jìn)行評(píng)定:(1)MMSE量表，反映被檢查者的智能狀態(tài)。(2)日常生活能力量表(ADL)，反映癡呆患者日常生活能力的損害程度。(3)Pfeffer功能活動(dòng)調(diào)查表(FAQ)，反映被測(cè)者功能活動(dòng)能力。(4)Fuld物體記憶測(cè)驗(yàn)(FOM)，反映被測(cè)者以記憶缺損為主的廣泛認(rèn)知功能障礙。(5)快速詞匯測(cè)驗(yàn)(RVR)反映被測(cè)者語(yǔ)義記憶貯存功能。對(duì)象均進(jìn)行MRI檢查。采用Philips GyroscanT5NT超導(dǎo)MRI成像系統(tǒng)，運(yùn)用國(guó)際上具有權(quán)威性的腦功能成像處理分析軟件即統(tǒng)計(jì)參數(shù)圖的個(gè)體腦結(jié)構(gòu)分析(IBASPM)系統(tǒng),標(biāo)記腦中各解剖結(jié)構(gòu)在MRI 的具體位置,計(jì)算出左海馬體積〔3〕。為消除顱腔容積的影響,根據(jù)如下公式行標(biāo)準(zhǔn)化處理:Vs =Vp×Cn/Cm(Vs為標(biāo)準(zhǔn)化的海馬體積,Vp為原始海馬體積,Cm為全體受試對(duì)象平均顱腔體積,Cn為個(gè)體顱腔體積)。全部受試對(duì)象為右利手,較好控制利手對(duì)海馬體積的影響，取左側(cè)海馬體積進(jìn)行分析。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 利用SPSS13.0軟件，數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)均符合正態(tài)分布。用單因素方差分析3組之間的差異，并用Student-Newman-Keuls進(jìn)行兩兩比較；采用Spearman相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1各組檢測(cè)指標(biāo)比較 各組AD患者的血漿GAL水平，ADL、FAQ評(píng)分均顯著高于正常對(duì)照組，MMSE、FOM、RVR評(píng)分及左海馬體積均顯著低于正常對(duì)照組(P<0.05或P<0.01)；并且中度癡呆組血漿GAL水平，ADL、FAQ評(píng)分均顯著高于輕度癡呆組，MMSE評(píng)分及左海馬體積顯著低于輕度癡呆組(P<0.05或P<0.01)。中度癡呆組FOM及RVR評(píng)分與輕度癡呆組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

2.2AD患者血漿GAL水平與MMSE、ADL、FAQ、FOM、RVR及左海馬體積的相關(guān)性 中度癡呆的AD患者血漿GAL水平與MMSE、FOM、左海馬體積呈負(fù)相關(guān)，與ADL及FAQ呈正相關(guān)，與RVR無(wú)顯著相關(guān)性。輕度癡呆的AD患者血漿GAL水平與MMSE及左海馬體積呈負(fù)相關(guān)，與ADL及FAQ呈正相關(guān)，與FOM及RVR無(wú)顯著相關(guān)性。見(jiàn)表2。

表1 各組檢測(cè)指標(biāo)比較

與正常對(duì)照組比較：1)P<0.05，2)P<0.01，與輕度癡呆組比較：3)P<0.05，4)P<0.01

表2 AD患者GAL水平與MMSE、ADL、FAQ、FOM、RVR及左海馬體積的相關(guān)性

3 討 論

AD患者的神經(jīng)病理?yè)p害早于臨床癥狀，并且AD患者從出現(xiàn)癥狀到明確診斷的時(shí)間一般需要32～57個(gè)月，此時(shí)的治療措施已較難干預(yù)疾病進(jìn)程〔4〕。因此，對(duì)于AD的研究熱點(diǎn)集中在疾病的早期診斷,從而及時(shí)治療可能減輕腦功能損害程度。

GAL作為一種神經(jīng)肽，其調(diào)節(jié)學(xué)習(xí)記憶功能的機(jī)制為：GAL的過(guò)度表達(dá)伴隨學(xué)習(xí)記憶相關(guān)部位去甲腎上腺素、5-羥色胺、多巴胺和乙酰膽堿失去平衡，學(xué)習(xí)記憶功能處于病理狀態(tài)；GAL可以破壞興奮性膽堿能突觸前受體，反饋性減少乙酰膽堿釋放；引起神經(jīng)細(xì)胞膜超極化及外向性鉀離子流，產(chǎn)生抑制性突觸后電位；降低突觸前膜興奮性谷氨酸釋放，損傷突觸可塑性〔1〕。AD早期杏仁核GAL過(guò)度表達(dá)，在邊緣系統(tǒng)相關(guān)行為變化中起關(guān)鍵作用〔5〕。GAL的過(guò)度表達(dá)抑制了膽堿傳遞，限制海馬長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)，可能加劇AD的臨床表現(xiàn)，但分析從AD組織中獲取的基底前腦膽堿能神經(jīng)元基因表型，結(jié)果提示GAL的過(guò)度表達(dá)對(duì)促進(jìn)基底前腦膽堿能神經(jīng)元生存及功能的基因表達(dá)起到正向調(diào)節(jié)作用〔6〕。近期的研究顯示外源性GAL可以減輕AD模型大鼠海馬淀粉樣肽沉積及減輕空間記憶障礙〔7〕。改善盡管GAL及其受體系統(tǒng)在AD狀態(tài)下的高表達(dá)產(chǎn)生保護(hù)作用還是損傷作用存在爭(zhēng)議，但普遍接受AD患者腦內(nèi)GAL高表達(dá)的觀點(diǎn)。與以往的研究結(jié)果〔2〕相符，本研究證實(shí)AD患者血漿GAL水平顯著升高，提示血漿GAL水平作為早期診斷AD及監(jiān)測(cè)AD病情進(jìn)展的生物學(xué)標(biāo)志物的可能性。認(rèn)知功能評(píng)定量表是目前較為實(shí)用的判斷AD病情嚴(yán)重程度的方法。AD患者表現(xiàn)為學(xué)習(xí)、記憶、日常生活能力及功能活動(dòng)能力減退,但其各方面的損害程度與病情的嚴(yán)重程度并不一致,并且各方面減退是不平行的〔8〕。本研究提示無(wú)論是輕度還是中度AD患者，其血漿GAL水平均與認(rèn)知功能損害程度存在一定的相關(guān)性，并且與MMSE、ADL及FAQ的相關(guān)度較好。

海馬的損傷和萎縮在AD的早期已出現(xiàn)〔9〕，通過(guò)MRI計(jì)算海馬體積輔助診斷AD具有一定的臨床實(shí)用性。與以往的研究結(jié)果〔8〕類(lèi)似，本研究證實(shí)綜合分析左海馬體積及血漿GAL水平對(duì)于診斷AD及判斷病情嚴(yán)重程度有重要作用。

綜上所述，血漿GAL水平結(jié)合臨床表現(xiàn)及影像學(xué)依據(jù)可應(yīng)用于AD 的早期診斷，并且動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)其水平可能預(yù)測(cè)AD癥狀的進(jìn)展，為臨床干預(yù)AD的病程進(jìn)展提供客觀依據(jù)。但由于本研究樣本量較小，血漿GAL水平對(duì)AD的診斷價(jià)值及其臨床意義還需要深入研究。