不同麻醉方式對非小細(xì)胞肺癌患者圍術(shù)期免疫功能的影響

梁富球 林 群

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院麻醉科，福建 福州 350005)

肺癌是致死率最高的惡性腫瘤，其中非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)約占肺癌的80%〔1〕。Ⅰ～Ⅱ期NSCLS患者首選手術(shù)治療，但手術(shù)中麻醉方式、麻醉藥物的類型會影響患者免疫功能〔2,3〕。肺癌患者根治術(shù)常采用靜脈丙泊酚復(fù)合硬膜外麻醉和全憑靜脈麻醉，但鮮有兩種麻醉方式對T細(xì)胞亞群、自然殺傷(NK)細(xì)胞比例、血漿白細(xì)胞介素(IL)-6、IL-8、IL-10、腫瘤壞死因子(TNF)-α和干擾素(INF)-γ等的全面研究。麻醉狀態(tài)下T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞比例和多種炎癥或抗炎因子均同時參與機(jī)體的應(yīng)激反應(yīng)。本研究對比分析靜脈丙泊酚復(fù)合硬膜外麻醉和全憑靜脈麻醉對NSCLC患者圍術(shù)期T細(xì)胞亞型、NK比例、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α和INF-γ的動態(tài)變化，并建立主成分分析(PCA)模型以評估兩種麻醉方式綜合指標(biāo)對免疫功能的影響。

1 對象與方法

1.1一般資料 選取2015年2月至2016年1月福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院行肺癌根治手術(shù)的NSCLS患者60例，美國麻醉師協(xié)會(ASA)標(biāo)準(zhǔn)Ⅰ～Ⅱ級，男51例，女9例，一側(cè)肺全部切除18例，肺葉切除42例，平均年齡(58.9±9.7)歲，有吸煙史37例。隨機(jī)分為觀察組(靜脈丙泊酚復(fù)合硬膜外麻醉)和對照組(全憑靜脈麻醉)各30例，兩組性別(男/女25/5 vs 26/4例)、年齡〔(58.5±10.2)vs(59.3±9.2)歲〕差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2方法 麻醉方法參照文獻(xiàn)〔4〕，手術(shù)前肌肉注射苯巴比妥和阿托品0.1 g和0.5 g。觀察組術(shù)中以羅哌卡因控制麻醉平面在T2～T10，全麻下行氣管插管，采用Drager麻醉機(jī)控制單肺通氣。全麻時靜注丙泊酚、維庫溴銨和芬太尼0.5～1.5 mg/kg、0.1 mg/kg和5.0 μg/kg。手術(shù)中吸入1.0%～ 4.0%七氟烷，靜注0.5～2.0 mg維庫溴銨維持麻醉。對照組為單純?nèi)?，用藥與操作同復(fù)合硬膜外麻醉。

1.3標(biāo)本采集及檢測指標(biāo) 兩組分別于麻醉前30 min(T0)、手術(shù)畢(T1)、術(shù)后2 h(T2)、2 d(T3)和5 d(T4)采集靜脈血各6 ml于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管，采用梯度離心分離單個核細(xì)胞。采用貝克曼流式細(xì)胞儀及配套試劑盒檢測T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)和NK細(xì)胞活性。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)及配套試劑盒檢測血漿細(xì)胞因子INF-γ、TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10水平。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS17.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn)，SIMCA-P+12.0軟件建立PCA模型。

2 結(jié) 果

2.1兩組外周血T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞比例比較 兩組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和NK細(xì)胞比例均在T1期顯著下降、T2期降至最低(P<0.05)。對照組外周血CD8+的比例在T1期顯著升高并于T2期升至高峰(P<0.05)，而觀察組各期CD8+比例變化差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。觀察組外周血CD3+和CD4+水平在T2～T4期均顯著高于對照組，CD4+/CD8+在T4期顯著高于對照組(P<0.05)。兩組外周血CD8+和NK細(xì)胞比例與同期比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

2.2兩組INF-γ、TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10水平比較 兩組血漿INF-γ和TNF-α水平均在T1期開始顯著下降(P<0.05)，INF-γ均于T2期降至最低，T3期逐漸恢復(fù)，且觀察組恢復(fù)較對照組更快(P<0.05)。對照組TNF-α在T3期降至最低，并于T4期開始恢復(fù)，觀察組在T2期降至最低，并于T3期開始恢復(fù)，觀察組T2期TNF-α水平顯著低于對照組(P<0.05)。兩組IL-6、IL-8和IL-10水平均在T1期顯著升高(P<0.05)，對照組IL-6和IL-10在T2期達(dá)到高峰，并于T3期逐漸恢復(fù)(P<0.05)，IL-8在T3期達(dá)到高峰，并于T4期逐漸恢復(fù)；觀察組IL-6和IL-8在T2期達(dá)到高峰，并于T3期逐漸恢復(fù)，而IL-10在T1顯著升高(P<0.05)；T2期觀察組IL-6和IL-8水平顯著低于對照組，而IL-10水平在T1期顯著高于對照組(P<0.05)，見表2。

表1 兩組T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞水平比較

與T0比較：1)P<0.05；與對照組同期比較：2)P<0.05；同表2

表2 兩組血清細(xì)胞因子水平的變化

2.3兩組基于外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK細(xì)胞比例和血漿細(xì)胞因子INF-γ、TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10水平的PCA分析 對照組T0期主要分布在橢圓的右側(cè)區(qū)域，T1期患者體內(nèi)的T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞比例和細(xì)胞因子(INF-γ、TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10)水平發(fā)生了明顯紊亂，主要分布于橢圓中心偏左側(cè)，T2期，個體分布已完全偏離T0期，分布在橢圓最左側(cè)；對照組個體在T3期逐漸恢復(fù)，表現(xiàn)為個體分布向T0期逐漸靠近，分布于T2期上方；對照組個體在T4期逐漸恢復(fù)，但仍不能完全恢復(fù)正常。觀察組T0期主要分布在橢圓的右側(cè)區(qū)域，T1期患者體內(nèi)T細(xì)胞亞型、NK細(xì)胞比例和細(xì)胞因子INF-γ、TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10水平發(fā)生了明顯紊亂，主要分布于橢圓中心偏左側(cè)；T2期個體分布已完全偏離T0期，分布在橢圓最左側(cè)，但觀察組個體在T3迅速恢復(fù)到T2期水平，并于T4期基本恢復(fù)正常水平。見圖1。

圖1 兩組外周血T細(xì)胞亞型、NK細(xì)胞比例和血漿細(xì)胞因子水平的PCA圖

3 討 論

肺癌是與細(xì)胞免疫功能密切相關(guān)的惡性腫瘤，而手術(shù)的應(yīng)激反應(yīng)、麻醉藥物的種類、麻醉方法均會影響機(jī)體的免疫功能〔5〕。麻醉時T細(xì)胞主要參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)和應(yīng)答，其中CD3+體現(xiàn)細(xì)胞免疫的總體水平，CD4+輔助其他細(xì)胞參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)而CD8+主要抑制其他免疫細(xì)胞功能〔6,7〕。邢玉英等〔8〕研究表明，靜脈丙泊酚復(fù)合硬膜外麻醉和全憑麻醉均會抑制肺癌患者體內(nèi)CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+水平，丙泊酚硬膜外麻醉優(yōu)于全憑麻醉。手術(shù)中肺癌患者CD4+、CD4+/CD8+比例下降、CD8+活性增加〔9〕，而丙泊酚硬膜外麻醉和全憑麻醉也會導(dǎo)致CD8+活性的增高〔10〕。NK細(xì)胞活性的高低揭示了機(jī)體非特異性抗免疫的能力。本研究表明手術(shù)應(yīng)激和麻醉狀態(tài)下可明顯抑制機(jī)體的非特異免疫。INF-γ主要由活化的T細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生，可增強(qiáng)機(jī)體的免疫〔8〕。IL-6是炎癥介質(zhì)中最強(qiáng)的細(xì)胞因子，能夠反映手術(shù)應(yīng)激導(dǎo)致的炎癥嚴(yán)重程度〔11〕。IL-8主要來自肺泡巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞，也是主要的炎癥因子〔12〕。IL-10主要由NK細(xì)胞產(chǎn)生，對TNF-α、IL-6和IL-8有明顯的抑制作用〔13〕。本研究提示復(fù)合硬膜外麻醉時炎癥反應(yīng)較全憑麻醉輕、優(yōu)于全憑麻醉。

PCA模型是代謝組學(xué)中常用的數(shù)據(jù)降維技術(shù)，通過將多個指標(biāo)綜合為1～2個主成分從而形象地揭示個體的綜合代謝變化和空間分布特征〔14〕。本研究結(jié)果提示，復(fù)合硬膜外麻醉對圍術(shù)期NSCLS患者的免疫功能綜合影響較小，優(yōu)于全憑麻醉。本研究有助于全面認(rèn)識復(fù)合硬膜外麻醉和全憑麻醉對NSCLS患者免疫功能的影響、為代謝組學(xué)的模式識別技術(shù)用于麻醉中免疫功能的評估提供了一種新思路。