水貂靜脈采血技術(shù)探索與應(yīng)用

陳杰，劉建東，王小龍，趙建軍※，閆喜軍※

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，長(zhǎng)春 130112；2.黃島出入境檢驗(yàn)檢疫局，山東 黃島 266555）

水貂易感病毒的相關(guān)研究中，血液是必不可少的分析材料，其涉及到淋巴細(xì)胞的分離、中和抗體滴度的測(cè)定、血液中病毒抗原的檢測(cè)，這些試驗(yàn)均需要大量且高質(zhì)量的血液樣本[1～3]。水貂全身被毛、體型較小、行動(dòng)靈活，捕捉和固定都比較困難，采血更是難以進(jìn)行。臨床上多采用剪趾甲或者心臟采血的方法。剪趾甲采血方法是緊貼腳趾肉墊剪掉無(wú)名指或中指的指甲，待有血液流出后，用容器接取，采血結(jié)束后用高錳酸鉀止血消毒。心臟采血?jiǎng)t是先用手指感觸水貂的心跳處，見(jiàn)針管有回血，緩慢抽出血液，然后止血消毒[4]。這2種方法都有很多弊端，剪趾甲采血不能保證無(wú)菌，心臟采血對(duì)心臟損傷較大，也易傷及其他臟器，容易造成內(nèi)臟出血，影響正常生長(zhǎng)，通常因針頭刺破心臟和肝臟導(dǎo)致出血過(guò)多而死，并且這2種方法都不能連續(xù)多次采血。近年來(lái)，很多研究學(xué)者將采血的部位鎖定在了水貂的靜脈，國(guó)內(nèi)、外均見(jiàn)有對(duì)不同靜脈的報(bào)道，如：尾靜脈[3]、后肢趾間靜脈[5]，但這些靜脈僅能滿足少量血液的需要，考慮到科研時(shí)需要用到較大量的血液，頸靜脈和前腔靜脈成為備選[6]，因頸靜脈在實(shí)際操作中不好定位，故選擇前腔靜脈采血法來(lái)替代現(xiàn)有水貂的采血方法。

1 材料

雌性水貂（吉林中特農(nóng)業(yè)科技有限公司）；舒泰（法國(guó)維克有限公司）；靜脈血樣采集針（濟(jì)寧市恒泰醫(yī)療用品有限公司）；靜脈真空血樣采集管（瀏陽(yáng)市三力醫(yī)用科技發(fā)展有限公司）；1mL注射器（圣光醫(yī)用制品有限公司）。

2 方法

2.1 試驗(yàn)分組

隨機(jī)選取10只47日齡水貂（分別編號(hào)為1～10）進(jìn)行前腔靜脈采血，每只水貂采血1.5mL，測(cè)定采血時(shí)間。

對(duì)于同一批水貂分別于47日齡、54日齡、61日齡、75日齡、89日齡時(shí)隨機(jī)選取16只，分別采血8mL；在47日齡、54日齡、61日齡、75日齡、89日齡時(shí)分別隨機(jī)選取16只水貂作為對(duì)照，不做采血處理。觀察水貂采血后的體征和計(jì)算存活率。

2.2 保定和麻醉

將水貂適應(yīng)性飼養(yǎng)2d～3d后進(jìn)行采血。水貂俯臥放置，按10mg/kg～15mg/kg臀部肌肉注射舒泰，達(dá)到呼吸平穩(wěn)、全身肌肉松弛、鉗夾皮膚反應(yīng)消失的最適麻醉指征。

2.3 定位和穿刺

將胸骨柄及其周圍洗干凈、擦干，再用酒精棉球由內(nèi)而外進(jìn)行消毒。食指和中指在胸骨柄末端的兩側(cè)，輕輕按壓，靜脈血樣采集針以胸骨柄的末端為基準(zhǔn)點(diǎn)，與胸骨板成30°～45°，體正中線稍向右向心方向穿刺進(jìn)針，待血液沿著軟質(zhì)硅膠管流出（圖1），靜脈真空血樣采集管接住，待血流穩(wěn)定后，用手掌輕輕擠壓心臟部位，有利血液流出。采血完畢，消毒止血，血止后將水貂俯臥放置回籠子，待其蘇醒（圖2）。

圖2 水貂采血部位示意圖Fig.2 The Schematic diagram of blood sampling site in mink

3 結(jié)果

3.1 前腔靜脈采血結(jié)果和所需時(shí)間

水貂臀部肌肉注射舒泰，2min～3min后即進(jìn)入麻醉狀態(tài)，麻醉持續(xù)時(shí)間為30min～45min。每只水貂采集1.5mL血液所需時(shí)間為0.4min～0.6min，這種方法簡(jiǎn)便易行，采血時(shí)間短，可以滿足科研試驗(yàn)對(duì)于血液的需求。水貂前腔靜脈采血的采血量和采血時(shí)間如表1所示。

表1 水貂前腔靜脈采血的采血量和采血時(shí)間Table 1 The volume and time of collecting blood from anterior vena in minks

3.2 不同日齡水貂采血結(jié)果

47日齡、54日齡、61日齡、75日齡、89日齡水貂采血8mL。47日齡、54日齡水貂均出現(xiàn)不適癥狀，存活率分別為68.75%和93.75%，表明47日齡、54日齡水貂不適宜采集8mL的血液；61日齡水貂出現(xiàn)不適的癥狀，采食量減少，活動(dòng)遲緩；75日齡、89日齡水貂未出現(xiàn)明顯的不適感，存活率均為100%，表明在采集8mL血量的情況下，75日齡以上為最佳。不同日齡水貂采血結(jié)果如表2所示。

表2 不同日齡水貂采血結(jié)果Table 2 The results of blood sampling at different age for minks

4 討論

臨床上多采用剪趾甲或心臟采血的方法采集水貂血液。剪趾甲采血方法在采血過(guò)程中血液暴露于空氣中，極易造成血液污染，影響血液指標(biāo)的檢測(cè)和分析，而且剪趾甲人為造成動(dòng)物創(chuàng)傷，使動(dòng)物疼痛，增加感染機(jī)率，動(dòng)物較長(zhǎng)時(shí)間才能恢復(fù)。與此同時(shí)，若需血液量較大，采集時(shí)間會(huì)很長(zhǎng)，這樣長(zhǎng)時(shí)間的保定對(duì)動(dòng)物會(huì)產(chǎn)生極大的刺激，不利于動(dòng)物健康。心臟采血避免血液造成污染的可能，而且血流速度快，但心臟采血極易照成內(nèi)臟損傷而出血，易造成采血水貂死亡，且不可循環(huán)采血。

由于前兩種采血方法存在很多問(wèn)題，且尾靜脈、后肢趾間靜脈等小靜脈不能滿足大量血液的需求，頸靜脈又不好定位。參考文獻(xiàn)[6，7，8]提出了前腔靜脈真空采血法。前腔靜脈真空采血法有以下幾點(diǎn)優(yōu)勢(shì)[9，10]：血液采集過(guò)程中基本上處于無(wú)菌的環(huán)境中；采血針采血易于固定；可縮短血液收集時(shí)間，保證檢測(cè)和分析結(jié)果穩(wěn)定；易操作，整個(gè)采血過(guò)程可以標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)行；采血量大、創(chuàng)口小，短時(shí)間內(nèi)可重復(fù)采血。本試驗(yàn)對(duì)10只水貂麻醉后采血，采血后水貂無(wú)明顯影響，表明前腔靜脈真空采血法完全可以替代現(xiàn)有水貂采血的方法。

本試驗(yàn)對(duì)不同日齡水貂進(jìn)行了采血，75日齡以上水貂采血8mL最佳，對(duì)水貂無(wú)明顯影響，這可以為血液的采集提供借鑒。

為減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的痛苦并保持安靜，需要對(duì)動(dòng)物進(jìn)行麻醉，待動(dòng)物已進(jìn)入麻醉狀態(tài)[11]時(shí)，方可進(jìn)行試驗(yàn)。同時(shí)考慮到動(dòng)物種屬間的差異等情況，不同動(dòng)物應(yīng)采用不同的麻醉方法和麻醉劑[12]。本試驗(yàn)采用舒泰麻醉藥對(duì)水貂進(jìn)行臀部肌肉注射，在其麻醉的狀態(tài)下采血，避免了動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng)。

本試驗(yàn)建立的前腔靜脈采血方法符合1988年頒布的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》第六章第29條中“從事實(shí)驗(yàn)動(dòng)物工作的人員對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物必須保護(hù)，不得戲弄或虐待”的規(guī)定[13]。這不僅達(dá)到“3R”原則[14]的要求，降低了血液浪費(fèi)，減少了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的損傷，而且節(jié)約了動(dòng)物資源；同時(shí)在科學(xué)原則的基礎(chǔ)上，優(yōu)化了實(shí)驗(yàn)程序和實(shí)驗(yàn)技術(shù)，減輕了給動(dòng)物造成的與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的疼痛和緊張不安的情緒。