HPLC法測定注射用泮托拉唑鈉中EDTA—2Na的含量

趙杰

摘 要：目的 建立高效液相色譜（HPLC）法測定注射用泮托拉唑鈉中EDTA-2Na的含量。方法 選擇固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠（直徑為5 μm），尺寸為250 mm×4.6 mm色譜柱，以乙腈-磷酸鹽緩沖液（15∶85，v/v，用磷酸調節(jié)pH至2.5±0.1）為流動相，流速為1.0 ml/min，檢測波長為255 nm，柱溫為35 ℃。結果 EDTA-2Na濃度在2.0～32.0 μg/ml范圍內線性方程為A=2.317×104C-1.235×103（r=0.9998），EDTA-2Na的平均回收率為100.40%，RSD 為0.92%（n=9）。結論 本方法簡便、可靠、準確度高、重復性好，可用于測定注射用泮托拉唑鈉中EDTA-2Na的含量。

關鍵詞：泮托拉唑鈉；EDTA-2Na；高效液相色譜法；含量測定

中圖分類號：R927.2 文獻標識碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.11.044

文章編號：1006-1959（2018）11-0138-02

Determination of EDTA-2Na in Pantoprazole Sodium for Injection by HPLC

ZHAO Jie

（Department of Pharmacy，Baodi Clinical College of Tianjin Medical University，Tianjin 301800，China）

Abstract：Objective To establish a（HPLC）method for the determination of EDTA-2Na in Pantoprazole sodium for injection.Methods The stationary phase was octadecylsilane chemically bonded silica（diameter of 5μm），the chromatographic column was of 250 mm×4.6 mm size，the mobile phase consisted of acetonitrile-phosphate buffer（15：85，v/v and pH adjusted to 2.5±0.1 with phosphoric acid），flow rate 1.0ml/min，detection wave length 255nm，column temperature 35 ℃.Results The linear equation of EDTA-2Na concentration in the range of 2.0～32.0μg/ml is A=2.317x104C-1.235x103（r=0.9998），the average recovery of EDTA-2Na is 100.40% and RSD is 0.92%（n=9）.Conclusion The method is simple，reliable，accurate and reproducible，and can be used for the determination of EDTA-2Na in Pantoprazole sodium for Injection.

Key words：Pantoprazole sodium；；EDTA-2Na；HPLC；Content determination

注射用泮托拉唑鈉主要用于十二指腸潰瘍、胃潰瘍、急性胃粘膜病變、復合型胃潰瘍等所致的急性上消化道出血[1-3]，為質子泵抑制劑，是一種良好的抑制胃酸藥物，臨床使用廣泛。由于泮托拉唑鈉容易與金屬離子相互作用發(fā)生水解反應，影響了產品制備過程中以及在使用過程中的穩(wěn)定性，因此需要在處方中加入金屬離子螯合劑EDTA-2Na提高產品的穩(wěn)定性[4，5]。為了更好地控制產品質量，本研究開發(fā)了一種簡單、迅速、精確的用于測定注射用泮托拉唑鈉中的金屬螯合劑EDTA-2Na的含量測定方法[5]。

1儀器與材料

1.1儀器 Waters Alliance HPLC高效液相色譜系統(tǒng)（沃特世科技上海有限公司）；XJ120ASCS電子天平（上海精科天美科學儀器有限公司）；PHSJ-6L型實驗室pH計（上海儀電科學儀器股份有限公司）；SK1200H超聲波清洗器（上?？茖С晝x器有限公司）。

1.2材料 磷酸二氫鈉（分析純，國藥集團化學試劑有限公司，批號：20170105）；磷酸（分析純，國藥集團化學試劑有限公司，批號：20160901）；硫酸銅（分析純，湖州展望藥業(yè)股份有限公司，批號：20170222）；乙腈（色譜純，德國默克公司，批號：394857104）；EDTA-2Na對照品（國藥集團化學試劑有限公司，批號20130428）；注射用泮托拉唑鈉（日本武田制藥公司，批號：271940712）；蒸餾水自制。

2方法與結果

2.1色譜條件 色譜柱：固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠（直徑為5 μm），尺寸為250 mm×4.6 mm，流動相：乙腈-磷酸鹽緩沖液（15∶85，v/v，用磷酸調節(jié)pH至2.5±0.1），流速：1.0 ml/min，檢測波長：255 nm，柱溫：35 ℃。

2.2溶液制備

2.2.1對照品溶液制備 稱EDTA-2Na對照品約10.0 mg，精密稱定置50 ml容量瓶中，加入蒸餾水溶解并定容，精密移取EDTA-2Na對照品儲備液2.0 ml置25 ml容量瓶中，加入1.0 ml濃度為5%硫酸銅溶液，輕輕振搖，加入蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，取上述溶液經0.22 μm微孔濾膜過濾，備用。

2.2.2供試品溶液制備 取1瓶市售注射用泮托拉唑鈉固體粉末，全部取出稱重為45.3 mg（粉末中含EDTA-2Na重量為1.0 mg），將粉末全部加入到50 ml容量瓶中，加入大約5 ml蒸餾水溶解粉末，加入1.0 ml濃度為5%硫酸銅溶液，輕輕振搖，加入蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，取上述溶液經0.22 μm微孔濾膜過濾，備用。

2.2.3空白溶液制備 取1瓶自制注射用泮托拉唑鈉固體粉末（不含EDTA-2Na），將粉末全加入到50 ml容量瓶中，加入約5 ml蒸餾水溶解粉末，加入濃度為5%硫酸銅溶液0.5 ml，輕輕振搖，加入蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，取上述溶液經0.22 μm微孔濾膜過濾，備用。

2.3系統(tǒng)適用性試驗 分別取“對照品溶液”、“供試品溶液”和“空白溶液”三份樣品采用“2.1”項下色譜條件進樣檢測，得到三份樣品色譜圖，由色譜圖可知，EDTA-2Na的保留時間為約為6.8 min，理論塔板數均為5600，拖尾因子為1.02。

2.4線性關系考察 稱取EDTA-2Na對照品大約10.0 mg，精密稱定置50 ml容量瓶中，加入蒸餾水溶解并定容，分別精密移取EDTA-2Na對照品儲備液0.25 ml、0.5 ml、1.0 ml、2.0 ml、4.0 ml分別加入到25 ml容量瓶中，再分別加入1.0 ml濃度為5%硫酸銅溶液，輕輕振搖，加入蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，即得系列對照品溶液，含有EDTA-2Na質量濃度分別為2.0 μg/ml、4.0 μg/ml、8.0 μg/ml、16.0 μg/ml、32.0 μg/ml，采用“2.1”項下色譜條件進樣檢測，以峰面積（A）對濃度（C）為進行線性回歸，得到標準曲線方程為A=2.317×104C-1.235×103（r=0.9998），說明EDTA-2Na濃度在2.0～32.0 μg/ml范圍內線性關系良好，日間、日內精密度均符合要求，平均回收率為100.40%，RSD為0.92%（n=9）。

2.5樣品含量測定 取3批自制注射用泮托拉唑鈉固體粉末各1瓶，全部取出稱重（粉末中含EDTA-2Na重量約為1.0 mg），分別將粉末全部加入到50 ml容量瓶中，加入大約5.0 ml蒸餾水溶解粉末，加入1.0 ml濃度為5%硫酸銅溶液，輕輕振搖，加入蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，取上述溶液經0.22 μm微孔濾膜過濾，進樣檢測；同時取對照溶液進樣測定，按照外標一點法計算每瓶中EDTA-2Na的含量。3瓶注射用泮托拉唑鈉固體粉末中EDTA-2Na含量分別為1.03 mg、1.08 mg、0.982 mg。

3討論

3.1測定方法選擇 EDTA-2Na現有的檢測方法包括滴定法和比色法，該方法的靈敏度和專屬性較差，無法將目標螯合物和其他螯合物區(qū)分開[5]；有報道采用HPLC法測EDTA-2Na的方法，但該方法經驗證后峰形較差，檢測的準確性和重現性較差[6，7]。本研究在預實驗中考察了甲醇-磷酸鹽緩沖液、乙腈-磷酸鹽緩沖液、乙腈-甲醇-磷酸鹽緩沖液、乙腈-磷酸-磷酸鹽緩沖液等多個流動相系統(tǒng)，以乙腈-磷酸鹽緩沖液（15∶85，v/v，用磷酸調節(jié)pH至2.5±0.1）作為流動相時，EDTA-2Na出峰時間適宜，峰形較好，基線平穩(wěn)，檢測結果準確可靠，專屬性強，主峰保留時間在7 min左右，檢測時間較短。

3.2硫酸銅用量的選擇 EDTA-2Na可與硫酸銅結合形成螯合物，泮托拉唑鈉也可以與硫酸銅結合形成螯合物，共同存在下，硫酸銅優(yōu)先與EDTA-2Na結合，形成螯合物，經過預實驗篩選確定了硫酸銅的用量，避免藥物與過量的硫酸銅反應，生成其他螯合物，影響測定，泮托拉唑鈉與硫酸銅結合形成藍綠色沉淀，以此判定硫酸銅的用量[8]。此外研究還考察pH對EDTA-2Na硫酸銅螯合物的穩(wěn)定性，研究顯示，在pH 2.5條件下，螯合物穩(wěn)定性較好，故選擇磷酸調節(jié)pH至2.5±0.1，以磷酸調節(jié)流動相pH，有效改善了目標物質的峰形，提高檢測的靈敏度和準確性。

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收稿日期：2018-1-31；修回日期：2018-3-1

編輯/楊倩