無償獻血者中與免疫性TRALI相關(guān)HLA抗體及水平分析

任 俊

廣州血液中心 廣州市醫(yī)學(xué) （血液安全）重點實驗室，廣東廣州 510095

TRALI（輸血相關(guān)性急性肺損傷) 是一種在輸血后可能會發(fā)生的具有致命性的反應(yīng)類型之一，其臨床表現(xiàn)主要在輸血6h 內(nèi)發(fā)生低氧血癥以及急性呼吸窘迫等，對患者的身心健康影響較大[1-2]。臨床相關(guān)研究報道指出，因輸血處理導(dǎo)致TRALI 的患者中超過85% 的供血血樣中均發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞抗體的存在[2]。據(jù)不完全統(tǒng)計，TRALI 的發(fā)生率約為0.02%，出現(xiàn)死亡等不良情況的概率超過10%，因此有必要對血液樣本進行相應(yīng)的篩選與檢測處理[3]。我國

表1 無償獻血者中不同類群的HLA發(fā)生率情況比較[n（%）]

是人口大國，用血量也相對較高，因此有必要對無償獻血等血液來源方式進行白細(xì)胞抗體的篩查工作，改善和提高用血安全性。本研究對2015 年8月～ 2017 年5 月期間296 例合格無償獻血者的HLA 和HNA-3a 抗體進行了檢測與初步分析，獲得了一定的結(jié)論，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究以296 例于2015 年8 月～ 2017 年5月期間合格的無償獻血者作為主要研究對象。患者中男 159 例，年齡 19 ～ 54 歲，平均（33.4±8.7）歲；女性已婚已育者87 例，年齡28 ～ 54 歲，平均（40.1±6.5）歲；女性未婚未育者共計50 例，年齡19 ～ 26 歲，平均（20.9±2.2）歲。所有患者均抽取5mL 抗凝全血標(biāo)本，并通過離心分離的方式分離血漿，并將其-20℃保存。

1.2 HLA抗體檢測

利用 Lifecodes（LMX）儀器、Lifecodes（LSA試劑）以及陳大偉等描述的檢測方式對所有患者的HLA 抗體進行篩查檢測，并利用LSA1 以及LSA2對篩查結(jié)果為陽性的標(biāo)本進行HLA 抗體鑒定[4]。即將20μL 磁珠、7μL 待測血清樣本分別加入反應(yīng)板中混勻，于200r/min、0.5cm 振幅、室溫的條件下孵育30min。然后將120μL 洗液加入反應(yīng)極并利用真空泵抽吸，重復(fù)洗板2 遍，加入PE-IgG 二抗，避光振蕩混勻30min 后，加入120μL 洗液垂懸混勻。最后，利用Luminex 以及Launch MatchIT 對相關(guān)數(shù)據(jù)結(jié)果進行收集整理以及基本分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS20.0 軟件對數(shù)據(jù)結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料行χ2檢驗，計量資料行t檢驗。P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同類群中HLA抗體的發(fā)生率概況分析

在本研究中，男性以及已婚已育女性和未婚未育女性三類不同類群無償獻血者的HLA 抗體發(fā)生情況存在有一定的差異。其中，已婚已育女性患者整體情況高于男性以及未婚未育女性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05）。見表 1。

2.2 女性生育次數(shù)對HLA抗體產(chǎn)生具有的影響分析

本研究對不同生育次數(shù)的女性進行對比分析發(fā)現(xiàn)，其HLA 抗體表現(xiàn)存在一定的差異。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05）。見表2。

表2 生育次數(shù)與HLA抗體產(chǎn)生的相關(guān)情況比較[n（%）]

3 討論

輸血處理后患者發(fā)生嚴(yán)重的臨床并發(fā)癥甚至死亡等情況與TRALI 具有較高的相關(guān)性[4，7]。相關(guān)研究報道指出，TRALI 導(dǎo)致的不良情況與血液成分中的某些致病因素具有一定聯(lián)系，而結(jié)合病理因素類型可大致劃分為免疫性與非免疫性TRALI 兩類[8-9]。目前非免疫性TRALI 的發(fā)病主要機制尚未明晰，但免疫性TRALI 與抗體具有密切相關(guān)性[9]。相關(guān)研究報道指出，受到血液樣本提供方與接受方存在的抗原抗體反應(yīng)影響，患者機體內(nèi)中性粒細(xì)胞與氧自由基以及蛋白酶等多種活性物質(zhì)發(fā)生異常性的變化，從而致使肺毛細(xì)血管出現(xiàn)一定程度的損傷，出現(xiàn)液體外滲的情況，致使肺水腫的發(fā)生[10]。有調(diào)查研究表明，約65% ～ 89% 的TRALI 患者輸注的血液樣本中均存在以HNA-3a 以及HLA- Ⅱ抗體類型為主的白細(xì)胞抗體，因此其可能與重癥TRALI的發(fā)生具有較高的相關(guān)性[5，11]。在本研究中，36例無償獻血者血液樣本的HLA 抗體檢測為陽性，占12.2%（36/296）。HLA 抗體檢測陽性中HLA- Ⅰ相對較高，共計19 例，占52.8%（19/36）。雖然本研究中HLA- Ⅰ的檢出率相對較高，但相關(guān)研究報道指出，在相關(guān)因素與發(fā)生TRALI 的相關(guān)性方面，HLA- Ⅰ較低，HLA-II 則較高[6，12]。中性粒細(xì)胞以及內(nèi)皮細(xì)胞雖然不具備HLA-II 抗原的表達能力，但HLA- Ⅱ抗體以及具有HLA- Ⅱ抗原表達能力的單核細(xì)胞可能發(fā)生結(jié)合作用，從而釋放TNF-α等多種活性因子，使得中性粒細(xì)胞被激活，進而誘導(dǎo)患者出現(xiàn)TRALI[12]。在本研究中，通過對不同類群下 HLA- Ⅰ與 HLA- Ⅱ以及 HLA- Ⅰ +HLA- Ⅱ抗體類型的患者進行統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，已婚已育女性無償獻血者其HLA 抗體發(fā)生率達到26.4%，而男性無償獻血者為6.3%，女性未婚未育無償獻血者為6.0%。男性與未婚未育女性的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞ 0.05），而已婚已育女性與男性和未婚未育女性比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05）。此外，有研究報道指出，具有多次生育史的女性獻血者血液樣本HLA 抗體呈陽性的概率較高，因而輸血后誘發(fā)TRALI 的風(fēng)險性相對較高[13]。本研究中，兩次及以上生育次數(shù)的女性獻血者其HLA 抗體陽性率為38.1%，高于一次生育者的22.7%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05）。相關(guān)結(jié)果與現(xiàn)有報道一致。

有相關(guān)統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，在TRALI 的發(fā)生中約80% 的患者是因輸注血液中存在治病因素有關(guān)，其中以血液樣本來源為具有生育史的女性為甚[15]。應(yīng)對此種情況，國外發(fā)達國家通常采用男性血液樣本以用于血液輸注，效果較好[12，15]。然而我國的用血量相對較高，若血液輸注操作中僅僅采集與使用男性血液樣本，可能導(dǎo)致供血緊張的不良情況發(fā)生。TRALI 另一類主要誘導(dǎo)抗體類型為HNA-3a[7，10]。有相關(guān)研究報道指出，大約80% 的高加索人群存在HNA-3a 表達，其中基因型為HNA-3bb的女性懷孕過程中機體內(nèi)會產(chǎn)生一定量的HNA-3a 抗體，而當(dāng)其血液樣本被應(yīng)用于輸血后，則該成份進入受血者機體血液中導(dǎo)致中性粒細(xì)胞的異常變化，致使肺部內(nèi)皮細(xì)胞受損，從而發(fā)生TRALI[14]。因此在后續(xù)研究中可通過進行HNA-3a 抗體的檢測以及分析工作，從而獲得更為精確的結(jié)果。

綜上所述，在臨床實踐中可通過對女性獻血者免疫性TRALI 相關(guān)的抗體進行篩查，進而選擇適合輸注的血液樣本，緩解或者避免供血緊張局面的發(fā)生，亦可以保障用血安全，降低TRALI 發(fā)生率。