Autocue Innova全自動血型儀正反定型不符原因分析和對策

陳振興 莫筠 楊月星 杜鳳云 王少玲

【摘要】 目的：調(diào)查Autovue Innova全自動血型儀在ABO血型鑒定中正反定型不符的原因，探討相應的處理措施。方法：選取2016年1-12月采集送檢的全血標本4 371份，采用Autovue Innova全自動血型儀進行ABO血型鑒定，并采用手工方法復查。結(jié)合病史資料、抗體篩查、抗體鑒定、蛋白定量等方法，分析兩種方法出現(xiàn)正反定型不一致的原因及其對策。結(jié)果：（1）Autovue Innova系統(tǒng)成功鑒定4 312份（98.65%），系統(tǒng)提示錯誤信息的11份（0.25%）經(jīng)系統(tǒng)重新檢測均可成功分級，另48份（1.10%）正反定型不符；手工方法成功鑒定4 345份（99.41%），正反定型不符26份（0.59%）。兩種方法的成功鑒定率比較差異無統(tǒng)計學意義（字2=0.003，P=0.959）。（2）經(jīng)Autovue Innova系統(tǒng)判定為正反定型不符者含正定型不符7份及反定型不符41份。7份正定型不符包括紅細胞弱反應（4份）及混合紅細胞反應（3份）；41份反定型不符包括血清額外反應（9份）及血清弱反應（32份，其中22份可被手工法糾正）。（3）嬰幼兒樣本（37.50%）、惡性血液?。?2.50%）、同種異體抗體（8.33%）、冷抗體（8.33%）是造成Autovue Innova系統(tǒng)48份正反定型不一致的主要原因，但絕大部分（16/18）嬰幼兒樣本及全部冷抗體、M蛋白所致的正反定型不符者可被手工法糾正。結(jié)論：Autovue Innova全自動血型儀的ABO血型鑒定準確率高，對于其判斷為正反定型不符者，首先應采用凝膠卡式法、試管法等手工方法復查，若經(jīng)手工復查仍不能糾正結(jié)果者，可考慮行抗體篩查、抗體鑒定、蛋白定量等進一步檢查。

【關(guān)鍵詞】 Autovue Innova； 全自動血型儀； ABO血型； 正反定型不符

【Abstract】 Objective：To investigate the causes of ABO typing discrepancies on Autocue Innova System and to discuss the corresponding treatment measures.Method：A total of 4 371 samples of blood from January to December 2016 were collected.Autovue Innova System was used to identify ABO blood type and then they are reexamined by manual method.Combined with medical history data， antibody screening， antibody identification， protein quantification and other methods to analyze the two methods appear positive and negative stereotypes of the reasons and their countermeasures.Result：（1）Autovue Innova system was successfully identified in 4 312 cases（98.65%），11 cases（0.25%） with systematic error information were successfully classified by systematic re examination，and the other 48 cases（1.10%） were incompatible with positive and negative stereotypes.Manual method successfully identified 4 345 cases（99.41%），and 26 cases（0.59%） showed that the positive and negative stereotypes were inconsistent，the successful identification rate of two methods were compared，the difference was not statistically significant（字2=0.003，P=0.959）.（2）Among those who are judged by Autovue Innova system to be positive or negative stereotypes，there were 7 cases of positive definite inconsistency and 41 cases of reverse typing inconsistency.Erythrocyte weak response（4 cases） and mixed red blood cell reaction（3 cases） were found in 7 cases with positive definite inconsistency.Serum extra reaction

（9 cases） and serum weak reaction（32 cases，22 cases can be corrected by manual method） were included in 41 cases of reverse typing inconsistency.（3）Infant samples（37.50%），malignant hematopathy（12.50%），allogeneic antibody（8.33%） and cold antibody（8.33%） were the main causes of the negative stereotypes in the Autovue Innova system，but most of the（16/18） infant samples and all the positive and negative stereotypes caused by the cold antibody and M protein caused by positive and negative stereotypes can be corrected by manual method.Conclusion：Autovue Innova System howed a high accuracy in the identification of ABO blood type，for its judgment of positive and negative stereotypes，first should be used gel card method，test tube method and other manual methods，if the manual reexamination can not correct the results，can consider the antibody screening，antibody identification，protein quantitative and other further examination.

【Key words】 Autovue Innova； Automatic blood typing system； ABO blood type； ABO typing discrepancies

First-authors address：Taishan Peoples Hospital，Taishan 529200，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.15.040

在采供血系統(tǒng)及器官移植中，ABO血型定型是一個重要組成部分[1]。血型鑒定錯誤會引發(fā)致命性輸血反應，因此血型鑒定的正確性極為重要和關(guān)鍵。目前臨床常用的血型檢測方法包括試管法、微量板法、手工凝膠卡式法、全自動儀器法等[2]。試管離心法是經(jīng)典也最可信賴的方法，但其操作費時，且易受主觀因素影響[3]。隨著醫(yī)學技術(shù)的不斷發(fā)展，全自動血型儀具備自動化、客觀、快速、直接、數(shù)據(jù)保存周期長等優(yōu)點，大大提高了血型鑒定的效率。然而，全自動血型儀在運行過程中可能受到多種因素的干擾，造成正反定型不一致而無法自動判讀結(jié)果[4]。這無疑給血型鑒定工作造成了一定隱患，必須引起醫(yī)學工作者的高度重視。若能了解全自動血型儀檢測過程中出現(xiàn)正反定型不一致的特點及其原因，將有助于解決此類問題[5]。本研究采用Autovue Innova全自動血型儀檢測血液樣本，并采用手工方法和抗體篩查、抗體鑒定、蛋白定量等鑒定方法來分析自動系統(tǒng)中出現(xiàn)正反定型不一致的原因，提出相應的解決措施?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 （1）標本來源：血液標本取自于本院2016年1-12月采集送檢的全血標本，選取采用AutoVue系統(tǒng)測試并通過手工方法復查的樣本共4 371份。所有樣本均采用枸櫞酸-枸櫞酸鉀真空抗凝試管留取3 mL全血血液標本。（2）試劑與儀器：Autovue Innova全自動血型儀，美國強生公司；TD4N血型血清學多用離心機，湖南易達京華儀器有限公司；DT5-6B型低度臺式離心機，北京時代北利離心機有限公司；抗A、抗B單克隆抗體血型定型試劑，北京金豪制藥股份有限公司；RhD IgM單克隆抗體血型定型試劑，北京金豪制藥股份有限公司；ABO/Rh正反定型血型定型試劑卡，強生上海醫(yī)療器材有限公司。

1.2 方法 本研究所選樣本均采用Autovue Innova全自動血型儀測試并通過手工方法復查。

1.2.1 全自動儀器法 應用基于微柱凝膠技術(shù)的Autovue Innova全自動血型儀對血液樣本加樣、試劑加樣、試劑卡打孔、樣本預溫和離心、拍照，并在最后一步自動讀取測試結(jié)果。在離心過程中，非凝集的紅細胞沉降到凝膠管底部，而凝集的紅細胞則根據(jù)凝集量保持在不同的柱級：-、0.5+、1+、2+、3+或4+，以表示反應的強度。每個樣品根據(jù)系統(tǒng)的正定型和反定型結(jié)果判斷為特定的ABO血型，并顯示出未成功分級的樣本。

1.2.2 手工法 按照全國臨床檢驗操作規(guī)程操作[6]。正向分型檢測中，將單克隆抗體血型定型試劑滴加到紅細胞懸浮液中（2%～5%）。反向分型檢測中，將單克隆抗體血型定型試劑加入到含兩滴血樣試管中。另外，將樣本的紅細胞和血清加入另一個試管中進行反應，以作對照。

1.2.3 正反定型不符標本的處理 對所有樣本進行正反定型結(jié)果相互驗證，對于正反定型結(jié)果不符者，參考ABO疑難血型三步分析法及AABB指南進行血型鑒定[7-8]。查閱樣本提供者可能影響血型的臨床資料，包括臨床資料及診斷結(jié)果、既往血型、輸血史、最近用藥等，并進行相應的亞型（抗-A1、抗-AB、抗-H等）鑒定、不規(guī)則抗體篩查及抗體特異性鑒定（抗人球蛋白檢測卡法）、自身抗體篩查試驗等，分析正反不一致的原因。

1.3 統(tǒng)計學處理 使用SPSS 15.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 血型鑒定結(jié)果 4 371份樣本中，Autovue Innova成功鑒定4 312份（98.65%），系統(tǒng)提示錯誤信息11份，正反定型不符48份；手工方法成功鑒定4 345例（99.41%），正反定型不符26份。兩種方法的成功鑒定率比較差異無統(tǒng)計學意義（字2=0.003，P=0.959）。見表1、2。

2.2 正反定型不符情況 Autovue Innova全自動檢測中出現(xiàn)的11例系統(tǒng)提示錯誤信息樣本包括紅細胞過多、液位錯誤、光線過高/低等，這些樣本經(jīng)系統(tǒng)重新檢測或手工方法鑒定均可被確定血型結(jié)果。經(jīng)Autovue Innova系統(tǒng)判定為正反定型不符的樣本48份，其中正定型不符7份均無法用手工法糾正，反定型不符41份可被手工法糾正22份，見表3。因此，4 371份樣本中，實際正反定型不符樣本26份（0.59%）。

2.3 正反定型不符的原因分析

2.3.1 Autovue Innova正反定型不符原因分析 （1）正定型不符：7份正定型不符樣本中存在4份紅細胞反應級<3+，經(jīng)手工法分析，其中1份判斷為ABO血型亞組，1份為ABO不相容造血干細胞移植（HSCT），1份為早產(chǎn)兒，1份為惡性血液??；存在3份樣本呈混合紅細胞反應，經(jīng)手工法分析，其中1份判斷為ABO血型亞組，另外2份為HSCT。（2）反定型不符：41份反定型不符樣本中，9份為血清額外反應，經(jīng)手工法及附加方法分析，其中4份血清中存在同種異體抗體（1份抗-E，2份抗-M，1份抗-Lea），3份血清冷凝集菌素，另2份分別為血清中存在自身抗體或血清蛋白過高；余下的32份為血清反應<2+者，經(jīng)手工法分析，其中10份樣本仍然判斷為血清弱反應（包括惡性血液病5份，老年2份，早產(chǎn)兒1份，另2份為低免疫球蛋白）。而另22份樣本的正反定型結(jié)果相符，其經(jīng)Autovue Innova檢查為正反定型不符的結(jié)果可被糾正，值得注意的是，這22份樣本也正是所有Autovue Innova正反定型不符樣本可被手工法糾正者。見表4。

2.3.2 可被手工法糾正的Autovue Innova正反定型不符原因分析 32份反定型血清弱反應者中22份經(jīng)手工法復查顯示為≥2+的反應級，即可被糾正結(jié)果者，經(jīng)分析原因，其中16份為嬰幼兒抗體，4份為冷抗體，另2份為M蛋白；10份仍顯示為<2+的反應級中8份與Autovue Innova系統(tǒng)檢查的反應級相同，經(jīng)檢查其免疫球蛋白水平正常；另2份手工法復查的反應級高于Autovue Innova系統(tǒng)者，經(jīng)檢查其免疫球蛋白水平較低。見表5。

2.3.3 Autovue Innova及手工法正反定型不符的具體原因?qū)φ辗治?嬰幼兒樣本（37.50%）、惡性血液?。?2.50%）、同種異體抗體（8.33%）、冷抗體（8.33%）是造成Autovue Innova系統(tǒng)正反定型不一致的主要原因；在這些具體原因中，絕大部分（16/18）嬰幼兒樣本及全部冷抗體、M蛋白所致的正反定型不符者可被手工法糾正。見表6。

2.4 Autovue Innova正反定型不符處理方法 對于Autovue Innova正反定型不符的樣本，首先應采用凝膠卡式法、試管法等手工方法復查。對通過手工法測量仍然顯示為弱血清反應的樣本，可檢測其實際的免疫球蛋白水平。若樣本冷凝集菌素，則將其進行鹽水洗滌紅細胞后于室溫下（37 ℃）靜置30 min后重新測試。若樣本為早產(chǎn)兒及老年，則增加樣本量重新測定。

3 討論

ABO血型定型在采供血及器官移植等系統(tǒng)中發(fā)揮了重要作用，即根據(jù)紅細胞表面有無特異性抗原（凝集原）A和B來劃分樣本的血液類型[9]。根據(jù)凝集原A、B的分布可將血液類型為A、B、AB、O四類，其鑒定方法包括正反定型兩種[10]。所謂正定型即用已知抗體的標準血清的抗A抗-B抗體檢測樣本紅細胞上的未知抗原；所謂反定型則是用已知血型的標準紅細胞表面的A、B抗原檢測血清中未知的抗體[11]。一般來說，在血型鑒定中需同時進行正反定型，使結(jié)果相互驗證從而更為嚴謹。通常來說，ABO正反定型不符可能由紅細胞或血清內(nèi)在因素、操作不當?shù)仍蛞餥12-15]。當血型鑒定過程中發(fā)現(xiàn)正反定型不符時，為避免造成輸血性事故，必須明確原因，并采用更加精密的鑒定方法進行鑒定，如增加抗-A1，抗-AB，抗-H抗體，甚至進行基因鑒定等。

雖然試管法手工鑒定是血型鑒定最值得信賴的方法，但其效率低，不利于進行大批量血液樣本的鑒定[16]。隨著醫(yī)學技術(shù)的不斷發(fā)展，全自動血型鑒定儀的出現(xiàn)很好地解決了這個問題，大大提高了血型鑒定的效率。但與此同時，全自動血型鑒定儀的應用也帶來了一些新的問題，如其運行過程中可能受到多種因素的干擾，造成正反定型不一致而無法自動判讀結(jié)果。這無疑給血型鑒定工作造成了一定隱患，必須引起醫(yī)學工作者的高度重視。

Autovue Innova全自動血型儀是基于微柱凝膠技術(shù)的全自動檢測系統(tǒng)[17]，抗原和抗體在凝膠管內(nèi)反應，離心后非凝集的紅細胞沉降到底部，而凝集的紅細胞則根據(jù)凝集量保持在不同的柱級（-，0.5+，1+，2+，3+或4+），表示反應的強度，并對應不同的血型[18-20]。本研究對比了Autovue Innova全自動血型儀與手工法在4 317份血樣中的鑒定結(jié)果，其中Autovue Innova成功分級4 312份（98.65%），低于手工方法的4 345份（99.41%），但比較差異無統(tǒng)計學意義（字2=0.003，P=0.959）?？紤]到試管法手工鑒定是血型鑒定最值得信賴的方法，以上結(jié)果提示Autovue Innova全自動血型儀在ABO血型鑒定中具有足夠的可靠度。值得注意的是，在Autovue Innova系統(tǒng)中，11份樣本被系統(tǒng)提示錯誤信息，包括細胞過多、液位錯誤、光線過高/低等。但這些樣本經(jīng)系統(tǒng)重新檢測均可被確定血型，可以證實是操作原因所致。

本研究結(jié)果顯示，Autovue Innova全自動血型儀提示48份（1.11%）正反定型不符，其中正定型不符7份包括紅細胞弱反應（4份）及混合紅細胞反應（3份），反定型不符41份包括血清額外反應（9份）及血清弱反應（32份）。為分析48份正反定型不符的原因，本研究結(jié)合病史以其他手段進行了進一步的檢測。經(jīng)手工法復查，反定型32份血清弱反應中有22份可被糾正，其被手工法復查顯示為≥2+的反應級。因此，手工法復查后的正反定型不符實際為26份（0.59%）。對于可被糾正者被Autovue Innova系統(tǒng)誤讀為血清弱反應的原因，經(jīng)分析，其中16份為嬰幼兒抗體，4份為冷抗體，另2份為M蛋白。進一步分析，造成正定型紅細胞弱反應的原因包括ABO血型亞組、HSCT、早產(chǎn)兒及惡性血液病（各1份），造成正定型混合紅細胞反應的原因包括ABO血型亞組（1份）及ABO不相容造血干細胞移植（2份）；造成反定型血清額外反應的原因包括血清中存在同種異體抗體（1份抗-E，2份抗-M，1例抗-Lea）、血清冷凝集菌素（3份）、血清中存在自身抗體或血清蛋白過高（各1份），造成反定型血清弱反應的原因，除22份可被糾正者，還包括惡性血液?。?份）、老年（2份）、早產(chǎn)兒（1份）及低免疫球蛋白（2份）。綜合分析得出，嬰幼兒樣本、惡性血液病、同種異體抗體、冷抗體是造成Autovue Innova系統(tǒng)48份正反定型不一致的主要原因，但絕大部分嬰幼兒樣本及全部冷抗體、M蛋白所致的正反定型不符者可被手工法糾正。

綜上所述，Autovue Innova全自動血型儀的ABO血型鑒定準確率高，對于其判斷為正反定型不符者，首先應排除人為因素及技術(shù)問題，然后采用試管法等手工方法復查可糾正大部分不符結(jié)果。若經(jīng)手工復查仍不能糾正結(jié)果者，可考慮行抗體篩查、抗體鑒定、蛋白定量等進一步檢查。

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