人乳頭瘤病毒E6/E7 mRNA檢測在30歲以下年輕女性宮頸疾病診治中的應(yīng)用探討

王武 葉鳳如

【摘要】 目的：探討人乳頭瘤病毒（HPV）E6/E7 mRNA檢測在30歲以下年輕女性宮頸疾病診治中的應(yīng)用。方法：選取2015年5月-2017年1月就診于本院行細(xì)胞學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)的無明確診斷意義的鱗狀上皮細(xì)胞病變（ASCUSAIL）患者100例，均為30歲以下年輕女性。按照隨機(jī)數(shù)字表法將其分為對照組和研究組，各50例。對照組予傳統(tǒng)HPV DNA分型檢測，研究組直接進(jìn)行HPV E6/E7 mRNA檢測。比較兩組病變預(yù)測準(zhǔn)確度、特異度、陰道轉(zhuǎn)診率、患者滿意度。結(jié)果：HPV E6/E7 mRNA檢測診斷CINⅡ+準(zhǔn)確度、特異度為72.00%、43.75%，均高于HPV DNA檢測的64.00%、21.05%，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；HPV E6/E7 mRNA檢測陰道轉(zhuǎn)診率為76.0%，低于HPV DNA檢測的86.0%（P<0.05）；HPV E6/E7 mRNA檢測患者滿意度為92.0%，高于HPV DNA檢測的76.0%（P<0.05）。結(jié)論：HPV E6/E7 mRNA檢測診斷CINⅡ+較HPV DNA檢測準(zhǔn)確率高、陰道轉(zhuǎn)診率低、患者滿意度高，對宮頸疾病的診治有較好應(yīng)用價值。

【關(guān)鍵詞】 人乳頭瘤病毒； 宮頸內(nèi)瘤變； HPV E6/E7 mRNA檢測； HPV DNA檢測

【Abstract】 Objective：To investigate the application of human papillomavirus（HPV） E6/E7 mRNA in diagnosis and treatment of cervical diseases in young women under 30 years old.Method：A total of 100 ASCUSAIL patients who had been treated for cytological examination in our hospital from May 2015 to January 2017 were selected，they were young women under 30 years old.According to the random number table method，they were divided into control group and study group，50 cases in each group.The control group was given conventional HPV DNA typing test，and study group was directly tested by HPV E6/E7 mRNA.The accuracy，specificity，vaginal referral rate and patient satisfaction were compared between two groups.Result：The accuracy and specificity of CINⅡ+ were 72.00% and 43.75% in the diagnosis of HPV E6/E7 mRNA，which were all higher than 64.00% and 21.05% of HPV DNA（P<0.05）.The vaginal referral rate in HPV E6/E7 mRNA was 76.0% lower than 86.0% of HPV DNA（P<0.05）.The patient satisfaction with HPV E6/E7 mRNA was 92.0% higher than 76.0% of HPV DNA（P<0.05）.Conclusion：Compared with HPV DNA detection，HPV E6/E7 mRNA detection has high accuracy，low vaginal referral rate and high patient satisfaction，has good application value for the diagnosis and treatment of cervix disease.

【Key words】 Human papillomavirus； Cervical intracervical tumorigenesis； HPV E6/E7 mRNA detection； HPV DNA detection

First-authors address：Dalang Hospital of Dongguan，Dongguan 523770，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.15.032

人乳頭瘤病毒（HPV）感染是宮頸癌發(fā)展的主要風(fēng)險因素，幾乎100%的宮頸癌合并HPV感染[1]，但是感染了HPV并不一定患宮頸癌，尤其是年輕女性，大多數(shù)感染是一過性的或是無癥狀的[2]。對于宮頸癌的篩查，傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)篩查雖然仍為主要手段但篩查的特異性和準(zhǔn)確性及預(yù)測病變的發(fā)展趨勢都有其局限性[3]。HPV E6/E7 mRNA檢測比常規(guī)HPV DNA分型檢查更準(zhǔn)確，更可預(yù)測30歲以下年輕女性宮頸病變進(jìn)展及其轉(zhuǎn)歸，以緩解年輕女性對宮頸HPV感染的心理恐懼并可預(yù)防因?qū)m頸HPV感染所導(dǎo)致的過度治療[4]，本研究即重在探討HPV E6/E7 mRNA檢測在30歲以下年輕女性宮頸疾病診治中的應(yīng)用[3]?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年5月-2017年1月就診于本院行細(xì)胞學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)的無明確診斷意義的鱗狀上皮細(xì)胞病變（ASCUSAIL）患者100例，均為30歲以下年輕女性。納入標(biāo)準(zhǔn)：無宮頸手術(shù)史；無宮頸物理治療史；無盆腔放射史。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠；合并嚴(yán)重的全身疾?。挥芯窦不紵o法配合治療者。按照隨機(jī)數(shù)字表法將其分為對照組和研究組，各50例。所有患者均知情同意并簽署知情同意書，該研究已經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法 對照組予傳統(tǒng)HPV DNA分型，研究組直接做HPV E6/E7 mRNA檢測。兩組陽性者行陰道鏡檢+活檢，子宮頸上皮非典型增生（CIN）Ⅱ級以下的再定期復(fù)查TCT及HPV DNA檢測繼續(xù)隨訪，CINⅡ級以上的再行相關(guān)治療。若E6/E7 mRNA檢測轉(zhuǎn)陰，轉(zhuǎn)為6～12個月復(fù)查TCT，若E6/E7 mRNA檢測持續(xù)陽性但TCT檢測細(xì)胞學(xué)分級無升級，則選擇適宜治療[5-6]。（1）TCT：采用TCT專用毛刷進(jìn)行取材，將采集的細(xì)胞涮洗于TCT取樣品中，制成薄片，經(jīng)巴氏染色后鏡檢。（2）HPV DNA檢測：采用PCR反向點雜交技術(shù)，儀器及試劑盒均購自杭州新捷生物科技有限公司，使用專用毛刷取材后，涮洗于HPV專用取樣瓶中，并按照試劑盒操作。（3）組織病理學(xué)檢查：宮頸組織學(xué)診斷分為：正常、炎癥、宮頸上皮內(nèi)瘤變，浸潤癌，對于病理檢查結(jié)果≥CINⅠ級的患者則行宮頸電環(huán)切術(shù)，獲取進(jìn)一步準(zhǔn)確病理診斷，不同部位級別不同時則以病理級別高的為準(zhǔn)。（4）HPV E6/E7 mRNA檢測：采用購自河南中美合資科蒂亞生物技術(shù)有限公司的儀器及試劑盒，嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行操作，標(biāo)本采用冷光儀進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果經(jīng)計算機(jī)相關(guān)處理后轉(zhuǎn)換為拷貝數(shù)，若拷貝數(shù)≥1 copy/mL則為陽性。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 比較兩組對CINⅡ+的診斷價值、陰道轉(zhuǎn)診率（為患者行HPV E6/E7 mRNA或HPV DNA檢測結(jié)果為陽性后行陰道鏡檢查與該組總例數(shù)的比值）、滿意度（患者根據(jù)檢查效果、檢查效率及對檢查的信任度對該檢查綜合評定，評定等級為滿意、一般、不滿意，滿意度為評定等級為滿意例數(shù)占該組總例數(shù)的比值）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS 13.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組基線資料比較 對照組年齡21～29歲，平均（25.0±1.4）歲；有性生活史40例；1周內(nèi)有陰道沖洗及用藥0例。研究組年齡21～28歲，平均（25.0±1.6）歲；有性生活史42例，1周內(nèi)有陰道沖洗及用藥0例。兩組患者在年齡、性生活史、1周內(nèi)有陰道沖洗及用藥方面比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA檢測CINⅡ+的診斷結(jié)果與診斷價值 HPV E6/E7 mRNA檢測診斷CINⅡ+準(zhǔn)確度、特異度為72.00%、43.75%，均高于HPV DNA檢測的64.00%、21.05%，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1～3。

2.3 HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA檢測陰道轉(zhuǎn)診率、滿意度比較 HPV E6/E7 mRNA檢測陰道轉(zhuǎn)診率為76.0%（38/50），低于HPV DNA檢測的86.0%（43/50）（P<0.05）；HPV E6/E7 mRNA檢測患者滿意度為92.0%（46/50），高于HPV DNA檢測的76.0%（38/50）（P<0.05）。

3 討論

子宮頸癌習(xí)稱宮頸癌，是最常見的婦科惡性腫瘤，常見的病理類型有鱗狀細(xì)胞浸潤癌、腺癌、腺鱗癌，在病變的發(fā)展過程中，可能出現(xiàn)以下幾種癥狀：陰道接觸性出血[7-8]、陰道排液、晚期據(jù)癌灶累及的范圍不同還可出現(xiàn)不同的繼發(fā)癥狀。宮頸癌危害重大，嚴(yán)重危及患者生命健康[9-10]。

隨著中國經(jīng)濟(jì)發(fā)展，社會環(huán)境日趨復(fù)雜，年輕女性的性保護(hù)意識薄弱，早性史、早育史、多個性伴侶這些因素均是HPV感染高危因素，目前宮頸癌的發(fā)生已明確與HPV感染有關(guān)，而且年輕化趨勢已日益明顯，對于宮頸癌前病變，大多數(shù)都有三種發(fā)展趨勢：進(jìn)展、保持、消退[11-12]，即使高危型HPV感染，約有60%仍為一過性，不致癌，宮頸疾病篩查指南指出年輕女性的宮頸癌篩查目前主要是細(xì)胞學(xué)檢查[13]。但細(xì)胞學(xué)不能很好地預(yù)測病變的發(fā)展趨勢，且篩查的敏感性和特異性有一定局限，HPV感染后的一過性和不致病性尤其在30歲以下女性中尤為突出，雖然30歲以下女性HPV感染率高，但因為該人群有較強(qiáng)的免疫力等原因，其自然清除率也同樣高，即使有一定的病變，也可以自然清除，所以中外指南不建議HPV用于30歲以下年輕女性的宮頸癌篩查[14-15]。故認(rèn)為宮頸癌的有效篩查及癌前病變的精準(zhǔn)診治需要一種特異強(qiáng)、陽性預(yù)測值好的檢測方法[16]。HPV E6/E7 mRNA是一種特異性物質(zhì)，HPV早期編碼區(qū)中E6、E7基因是病毒癌基因，一般情況下不會表達(dá)，但是若病毒DNA整合進(jìn)入宿主細(xì)胞DNA，E6、E7基因則將高水平表達(dá)，且不受控制，從而引起宮頸癌細(xì)胞惡化[17-18]。E6、E7基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物E6/E7 mRNA的水平可以反映癌基因活性，進(jìn)行E6/E7 mRNA檢測，則可避免反復(fù)進(jìn)行HPV檢測，且可以判斷HR-HPV是否反復(fù)感染。HPV E6/E7 mRNA檢測具有較好的特異性和陽性預(yù)測值，認(rèn)為只有HPV的感染存在持續(xù)性時，病毒基因和人類基因才會發(fā)生整合，導(dǎo)致E6/E7基因激活，以及大量mRNA的轉(zhuǎn)錄，從而導(dǎo)致大量E6/E7癌蛋白的表達(dá)，進(jìn)一步導(dǎo)致細(xì)胞癌變的風(fēng)險增大[19]，故只有HPV E6/E7 mRNA檢測陽性才有必要行陰道鏡轉(zhuǎn)診及活檢，并根據(jù)結(jié)果指導(dǎo)診治，有效避免過度治療、漏診等，同時降低陰道鏡轉(zhuǎn)診率，節(jié)省了醫(yī)療資源，減輕了患者心理及經(jīng)濟(jì)壓力，減少過度醫(yī)療對該人群生殖健康的影響[20]。

本研究結(jié)果顯示，HPV E6/E7 mRNA檢測診斷CINⅡ+準(zhǔn)確度、特異度為72.00%、43.75%，均高于HPV DNA檢測的64.00%、21.05%，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；HPV E6/E7 mRNA檢測陰道轉(zhuǎn)診率為76.0%，低于HPV DNA檢測的86.0%（P<0.05）；HPV E6/E7 mRNA檢測患者滿意度為92.0%，高于HPV DNA檢測的76.0%（P<0.05）。故HPV E6/E7 mRNA檢測因其較好的特異性和準(zhǔn)確度滿足當(dāng)下精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的需要，在未來相關(guān)檢測發(fā)展中有相當(dāng)大的潛力，也將因其在宮頸癌篩查及宮頸疾病診治中的重要作用為30歲以下年輕患者帶來福音。

綜上所述，HPV E6/E7 mRNA檢測診斷CINⅡ+較HPV DNA檢測準(zhǔn)確率高、陰道轉(zhuǎn)診率低、患者滿意度高，對宮頸疾病的診治有較好應(yīng)用價值。

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