安捷倫食品安全之“僵尸肉”鑒別完整自動化解決方案
——基于代謝組學(xué)思想的“僵尸肉”鑒別技術(shù)平臺

□ 安捷倫 供稿

“僵尸肉”一詞，最早源于2015年6月23日新聞報道的《走私“僵尸肉”竄上餐桌，誰之過？》一文?！敖┦狻庇捎谄淅鋬鰰r間長、運輸及儲存條件惡劣，容易滋生各種細菌，甚至發(fā)生腐爛。而這些肉一旦被搬上餐桌，將極大地危害消費者的身體健康，所以需要對“僵尸肉”進行極為嚴格的管控。

在監(jiān)管法規(guī)方面，目前GB 2707-2005 《鮮(凍)畜肉衛(wèi)生標準》和GB/T 17238-2008 《鮮、凍分割牛肉》等標準多通過感官檢測的方法進行判斷。但是感官檢測對人的感官靈敏度有較高要求，同時要求具有一定的檢測經(jīng)驗，需要長期的積累，因此準確性及科學(xué)性等方面存在一定問題。為有效改善冷鮮肉檢測當(dāng)前面臨的問題，急需建立科學(xué)的儀器檢測方法并逐步形成檢測標準來有效推動“僵尸肉”的檢測與判別。

1 代謝組學(xué)用于鑒別“僵尸肉”的思路

圖1 “僵尸肉”鑒別方案流程及檢測平臺單元組成

代謝組學(xué)經(jīng)過20年的發(fā)展，已成為組間樣品小分子代謝物差異研究的一種重要手段，并在諸多領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，如疾病發(fā)生發(fā)展、藥物開發(fā)與療效、轉(zhuǎn)基因作物等。代謝組學(xué)分為非靶向與靶向兩個研究層次：非靶向代謝組學(xué)通過全譜輪廓差異分析，尋找組間差異化合物并進行鑒定；靶向代謝組學(xué)進而對差異化合物進行定量分析，實現(xiàn)大規(guī)模樣品的驗證及差異濃度變化動態(tài)范圍的研究。由于“僵尸肉”在冷凍時間、儲存條件等方面與鮮肉或鮮凍肉之間存在巨大差異，所以在化合物的組成方面也會存在顯著區(qū)別。M.K. Pettersen等學(xué)者2004年發(fā)表于Poultry Science的文章“Lipid Oxidation in Frozen,Mechanically Deboned Turkey Meat as Affected by Packaging Parameters and Storage Conditions”中指出，包裝以及儲存時間的差異會導(dǎo)致脂肪氧化水平的差異。Amy Elizabeth Johnson等學(xué)者2018年5月發(fā)表于Analytical Chemistry的研究文章“The Metabonomic Profiling of Chicken Eggs During Storage Using High Performance Liquid Chromatography Quadrupole Timeof-Flight Mass Spectrometry”中稱，代謝組學(xué)方法可以應(yīng)用于鑒別不同儲存時間的雞蛋，并且發(fā)現(xiàn)膽堿可以作為區(qū)分不同儲存時間的雞蛋的標志物。同樣的方法學(xué)也可以應(yīng)用于“僵尸肉”的鑒別。

1.1 基于安捷倫UHPLC-QTOF的“僵尸肉”鑒別方案

基于UHPLC-QTOF技術(shù)的非靶向代謝組學(xué)可為全面了解“僵尸肉”在長時間冷凍后成分的變化提供有效研究手段。首先，使用QTOF對樣品進行全譜輪廓分析，盡可能采集所有代謝物響應(yīng)的信息，然后結(jié)合代謝組學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行峰提取、對齊、差異分析、差異化合物鑒定等流程分析，最終尋找并鑒定出“僵尸肉”長時間存儲與反復(fù)凍融導(dǎo)致的變化成分，為“僵尸肉”的檢測提供靶標。

除硬件外，鑒別“僵尸肉”還需專業(yè)的代謝組學(xué)分析軟件——Mass Profiler Professional（MPP），其是在分析質(zhì)譜數(shù)據(jù)中發(fā)現(xiàn)代謝物生物標志的有效工具，可在大量樣品組和復(fù)雜的實驗設(shè)計中方便地進行質(zhì)譜數(shù)據(jù)的導(dǎo)入、歸一化和比較，包括 GC/MS、LC/MS、CE/MS的多種數(shù)據(jù)。MPP軟件可整合多種數(shù)據(jù)庫對未知物進行定性分析，如安捷倫獨有的Metlin、Fiehn及Nist、ChemIDPlus、Pubchem、HMP等公共數(shù)據(jù)庫。MPP軟件擁有用于統(tǒng)計分析、數(shù)據(jù)挖掘和可視化的綜合工具，包括：方差分析(ANOVA)、主成分分析(PCA)、t-檢驗(t-tests)、火山圖、樹狀分級圖（系統(tǒng)樹圖）、自組織圖(SOM)、質(zhì)量閾值(QT)聚類、支持矢量設(shè)計(SVM)等。此外，MPP軟件支持KEGG、Wikipathway、BioCyc等 全 面 的Pathway數(shù)據(jù)庫匹配，并可根據(jù)文獻記載自建Pathway，從而達到對代謝物之間的相互作用以及生物功能進行研究的目的。

圖2 “僵尸肉”鑒別模型

圖3 安捷倫發(fā)現(xiàn)代謝組學(xué)工作流程

MPP結(jié)合了先進的處理功能以及強大的統(tǒng)計和數(shù)學(xué)模型對復(fù)雜的質(zhì)譜數(shù)據(jù)集進行分析。對于“僵尸肉”的鑒別分析，只需對一系列鮮肉、鮮凍肉以及“僵尸肉”的樣品進行測試，使用這些檢測結(jié)果建立預(yù)測模型，然后僅需采集未知肉樣的數(shù)據(jù)放入所建模型，即可對該未知樣品進行預(yù)測。

如果需要對“僵尸肉“與鮮肉或鮮凍肉之間存在差異的化合物進行明確鑒定，用于后續(xù)的靶標性分析，則可按照圖3所示流程進行相關(guān)分析。

1.2 基于安捷倫UHPLC-QQQ的“僵尸肉”靶標化合物定量方案

M.K. Pettersen等學(xué)者2004年發(fā)表于Poultry Science的文章“Lipid Oxidation in Frozen, Mechanically Deboned Turkey Meat as Affected by Packaging Parameters and Storage Conditions”中提到，TBARS（硫代巴比妥酸反應(yīng)物）值在儲存時間不同的樣品組間存在顯著差異，因此可以用該類化合物作為靶標進行定量并作為判別樣品儲存時間的依據(jù)。利用QTOF尋找及鑒定差異化合物只是鑒別“僵尸肉”的一部分，若需進一步確定特征化合物并對其進行定量分析，可采用靶向代謝組學(xué)的方法。靶向代謝組學(xué)是有目標的對體內(nèi)特定的一系列內(nèi)源性化合物進行靶向定量檢測與差異比較研究的技術(shù)。三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜是靶向代謝組學(xué)的有利工具，在監(jiān)測復(fù)雜基質(zhì)中痕量物質(zhì)的濃度的變化研究、制定相應(yīng)的監(jiān)管標準中有巨大優(yōu)勢。

Agilent串聯(lián)四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀的全方位功能造就了最高靈敏度的性能，可輕易達到柱上fg級樣品的檢出限，配以全新多反應(yīng)采集模式：Dynamic MRM（dMRM）功能以及Triggered MRM（tMRM），可以在獲得高通量定量數(shù)據(jù)的同時，實現(xiàn)數(shù)據(jù)定性功能。

圖4 安捷倫產(chǎn)品圖片

在傳統(tǒng)的多化合物同時定量分析時，由于受到Dwell time（離子駐留時間）和色譜峰寬的制約，需要根據(jù)樣品的色譜分離情況設(shè)置多個time segment（時間窗口）以保證檢測的靈敏度和結(jié)果的重復(fù)性。但是隨著樣品復(fù)雜程度的增加，設(shè)置time segment具有眾多局限性，有可能會導(dǎo)致樣品檢測信息的丟失。Agilent最新推出的dMRM功能是市場上唯一一款成熟的無需設(shè)定time segment的MRM采集模式。在具備dMRM功能以及Dwell time低至1ms的基礎(chǔ)上，Agilent 6400型串聯(lián)四級桿液質(zhì)聯(lián)用儀，配以Agilent的高分辨快速液相色譜系統(tǒng)，可以實現(xiàn)15分鐘內(nèi)對300種靶標化合物同時進行高靈敏度、高重復(fù)性、高可靠性的準確定量分析。Agilent 6400獨有的tMRM功能可以在定量的同時，自動觸發(fā)完成二級離子檢測的定性工作，而且保證定量MRM的靈敏度不受損失。由于采用tMRM技術(shù)，因此很好的解決了以往串聯(lián)四極桿類質(zhì)譜必須分配時間來做二級離子掃描所帶來的定量靈敏度下降的問題。

圖5 安捷倫提供非靶向與靶向代謝組學(xué)全流程解決方案

靶向代謝組學(xué)的數(shù)據(jù)一樣可以在MPP中進行差異比較，安捷倫最終提供整合非靶向和靶向代謝組學(xué)全流程分析的解決方案。

1.3 基于安捷倫Bravo自動化液體處理平臺的高通量樣品前處理方案

代謝組學(xué)分析的一大特點就是樣品量大?；赒TOF的發(fā)現(xiàn)代謝組學(xué)應(yīng)用，需要大批量的樣品用于差異分析、模型建立等工作；基于QQQ靶向驗證代謝組學(xué)，需要更廣泛的樣品驗證與測定濃度變化動態(tài)范圍，這將大大增加實驗人員在樣品前處理部分所花費的時間。

安捷倫Bravo自動化液體處理平臺可在寬移液量范圍內(nèi)實現(xiàn)準確而精密的移液，從而改善數(shù)據(jù)的質(zhì)量和一致性。該平臺配置靈活，容易擴展，使用戶具有更多的選擇，同時它獨特的開放式設(shè)計使其便于融入實驗室的其他工作流程。在研究中使用Bravo平臺，可以讓用戶從花費大量時間進行手動設(shè)置和復(fù)雜應(yīng)用中解放出來。

簡而言之，基于UHPLC-QTOF、UHPLC-QQQ定性與定量質(zhì)譜硬件平臺與功能強大的MassHunter、Mass Profiler Professional等軟件所構(gòu)成的非靶向與靶向代謝組學(xué)完整工作流程，可有效識別“僵尸肉”長期冷凍及反復(fù)凍融導(dǎo)致的成分變化，并對變化的濃度范圍提供定量分析。另外，結(jié)合Bravo自動化解決方案，可以大大提高鑒別“僵尸肉”的工作效率。

2 安捷倫6545 QTOF的技術(shù)優(yōu)勢

Agilent于2014年推出新一代超高分辨率、質(zhì)量準確度、靈敏度的四級桿飛行時間串聯(lián)液質(zhì)聯(lián)用儀，即6545型四級桿飛行時間串聯(lián)液質(zhì)聯(lián)用儀，并 配 以 MassHunter、Mass Proflier Professional專業(yè)代謝組學(xué)軟件等質(zhì)譜軟件以及包括代謝物、毒物、農(nóng)殘等化合物數(shù)據(jù)庫，可對復(fù)雜基質(zhì)中的痕量未知化合物進行快速準確的鑒別。

安捷倫6545 QTOF具有卓越的MS/MS分析性能，加上先進的分析軟件(包括數(shù)據(jù)處理工具)，能迅速地對大部分具有挑戰(zhàn)性的復(fù)雜問題做出對應(yīng)方案。在代謝組學(xué)和蛋白組學(xué)研究中，6545 QTOF可用來發(fā)現(xiàn)和鑒定生物標記物。優(yōu)異的分辨率、質(zhì)量準確度、靈敏度以及動態(tài)范圍等性能，能保證其結(jié)果科學(xué)、可靠。安捷倫6545 QTOF具有以下幾方面特色。

2.1 全新的設(shè)計理念：讓儀器更好的為數(shù)據(jù)服務(wù)

全新PSO技術(shù)：6545 QTOF采用了安捷倫專利的全自動調(diào)諧校正系統(tǒng)。其采用的軟件控制，通過一鍵式操作模式，自動進行質(zhì)譜參數(shù)調(diào)諧及質(zhì)量軸校正，并將調(diào)諧結(jié)果自動存儲為分析方法的一部分。在全自動調(diào)諧基礎(chǔ)上，利用全新設(shè)計的PSO粒子群優(yōu)化技術(shù)，讓儀器更好的為數(shù)據(jù)服務(wù)。

圖6 垂直雙噴霧離子源

無論是采用QTOF進行定性分析還是定量分析，其數(shù)據(jù)基礎(chǔ)都是儀器提供的高準確度質(zhì)量信息（即質(zhì)荷比m/z），一旦質(zhì)荷比數(shù)據(jù)產(chǎn)生偏差，定性及定量分析都會產(chǎn)生錯誤的結(jié)果。對于QTOF而言，獲取高準確度的質(zhì)量信息，需要借助參比標樣進行校正，而這一校正過程就發(fā)生在離子源部分。

Agilent公司的專利——垂直雙噴霧離子源采用樣品和參比標樣都通過兩個噴針進樣的方式，能夠很好的避免參比標樣對待測樣品產(chǎn)生的離子抑制效應(yīng)，可以有效保證系統(tǒng)的靈敏度。且整個校正過程是通過儀器內(nèi)置的校正液自動傳輸系統(tǒng)（CDS）完成的，整個過程無需人工參與，所獲取的數(shù)據(jù)即為經(jīng)過校正的準確質(zhì)量信息。

全新設(shè)計的安捷倫脈沖發(fā)生器，能實現(xiàn)更好的動態(tài)溫度監(jiān)控和補償技術(shù)。安捷倫脈沖發(fā)生器具有獨特的動態(tài)溫度監(jiān)控技術(shù)和補償技術(shù)，在儀器長期運行過程中實時監(jiān)測，確保每個離子束的加速能量都恒定不變，進一步降低離子束擴散，從而達到最佳質(zhì)量的準確度，并獲得更高的分辨率和穩(wěn)定性。

全新離子光學(xué)系統(tǒng)：新型幾何設(shè)計的len2透鏡以及更加靈活的離子束壓縮和成形（IBCS）技術(shù)，可提高進入TOF離子數(shù)量，在保證超高分辨率的同時，極大提升靈敏度，同時進一步提高離子光學(xué)系統(tǒng)的抗污染能力，縮短維護周期。

專利的離子束壓縮技術(shù)(Ion Beam Compression，IBC)：離子束壓縮技術(shù)通過離子傳輸系統(tǒng)以及四級桿的離子壓縮并有效冷卻，從而獲得了更高密度、擴散更小的離子束，并引導(dǎo)至脈沖加壓區(qū)域，這些狹窄的冷卻離子束使6545 QTOF達到45000分辨率的同時，保持超高的靈敏度。

新型長壽命檢測器：使用新一代檢測器，極大延長檢測器壽命，同時不損失高靈敏度和寬動態(tài)范圍。6GHz高速檢測器和ADC技術(shù)源于Agilent電子測量部門領(lǐng)先全球的高速示波器技術(shù)，ADC技術(shù)使質(zhì)譜檢測器可檢測并采集所有到達檢測器的離子信息，相對于傳統(tǒng)的時間數(shù)字轉(zhuǎn)換模式即TDC技術(shù)，可實現(xiàn)更寬的掃描內(nèi)動態(tài)范圍、更高的質(zhì)量準確度和更高的質(zhì)譜分辨率。

2.2 出色的性能表現(xiàn)：篩查定量、同步實現(xiàn)

超高分辨率——分辨率45000FWHM以上：Agilent QTOF無需犧牲采集速度和靈敏度，在全質(zhì)量范圍內(nèi)均可實現(xiàn)超高分辨率。對于小分子和大分子的復(fù)雜樣品分析，如植物提取物及蛋白質(zhì)分析，具有更高的結(jié)果可靠性。

優(yōu)異質(zhì)量穩(wěn)定性——質(zhì)量誤差＜0.3ppm：在保證高靈敏度、高分辨率和高采集速度的前提下，仍保證優(yōu)異的質(zhì)量準確度。安捷倫QTOF的飛行管使用膨脹系統(tǒng)極小的航天用飛行材料制成，并帶有真空隔熱夾套設(shè)計，電路系統(tǒng)亦進行溫度敏感性處理，因此具有良好的環(huán)境溫度變化穩(wěn)定性。經(jīng)測試，Agilent QTOF在環(huán)境溫度變化±10℃、濕度15%～95%條件下，質(zhì)量準確度依然可以保證＜0.25ppm，是業(yè)界少有的能達到此標準的廠家。

2.3 強大的專業(yè)軟件及數(shù)據(jù)庫平臺

MassHunter軟件獨特的分子特征提取算法：Agilent MFE軟件功能可根據(jù)采集所得質(zhì)譜數(shù)據(jù)的保留時間以及精確質(zhì)量數(shù)，將化合物的相關(guān)質(zhì)譜信息如M+H、M+Na、M+K、2M+H等分子特征信息從海量的質(zhì)譜數(shù)據(jù)中提取出來，可簡化操作并大大提高質(zhì)譜工作人員的效率，提高痕量化合物的檢出率，增加發(fā)現(xiàn)代謝物的數(shù)量。

完整的同位素計算軟件：對于小分子的質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析來說，同位素信息有時比準確的質(zhì)量更為重要。同一準確質(zhì)量往往可推算出多個不同元素組成的分子式，如果缺失同位素信息或同位素計算不準確，就無法判斷最終分子式結(jié)果。Agilent可自動計算每個分子式的同位素豐度，并與理論同位素豐度比對，可以模擬化合物的理論同位素質(zhì)譜圖軟件；自動與分子式計算功能關(guān)聯(lián)進行元素組成確認；通過精確質(zhì)量、同位素豐度比、同位素精確質(zhì)量比及MS/MS四維信息可靠關(guān)聯(lián)分析，給出最終結(jié)構(gòu)信息。

3 安捷倫6470 QQQ的技術(shù)優(yōu)勢

3.1 創(chuàng)新的硬件設(shè)計，高質(zhì)量數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)

超高靈敏度離子源（專利的噴射流離子聚焦技術(shù)）：對于串聯(lián)四極桿質(zhì)譜而言，最主要的性能指標就是靈敏度。6470串聯(lián)四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀可配備Agilent專利的噴射流離子聚焦源(Jet Stream)，借助離子聚焦技術(shù)，可以大大提高離子化效率和離子傳輸效率，使6470具有行業(yè)內(nèi)最優(yōu)異的靈敏度和線性范圍。

另外，Agilent的液質(zhì)聯(lián)用儀是市場上唯一不需要根據(jù)液相條件調(diào)節(jié)噴霧針位置的液質(zhì)產(chǎn)品——噴霧針位置采用出廠預(yù)優(yōu)化設(shè)計，無需人工調(diào)節(jié)，操作便捷，且能夠保證數(shù)據(jù)的重現(xiàn)性。離子源接口適應(yīng)全流速范圍，液相無需分流，同時保持高靈敏度和優(yōu)異的抗污染能力。從操作安全角度出發(fā)，Agilent離子源采用獨有的噴霧針零電位設(shè)計，能夠最大程度保證操作安全。

圖7 安捷倫6470 QQQ進樣處示意圖

全新設(shè)計高傳輸離子光學(xué)組件：離子傳輸路徑的優(yōu)化對于儀器的靈敏度提升也非常關(guān)鍵，安捷倫6470 QQQ采用預(yù)四極桿取代了原來的離子透鏡，提升了離子傳輸?shù)男?，從而進一步提高了儀器的靈敏度。

專利的加熱控溫雙曲面四極桿，保證四極場穩(wěn)定性及抗污染能力：串聯(lián)四極桿質(zhì)譜的核心部件就是四極桿質(zhì)量分析器。目前，市場上的四極桿主要有雙曲面和圓柱形兩種，而Agilent的串聯(lián)四極桿質(zhì)譜所采用的四極桿為雙曲面四極桿，其四極場純度高于圓柱形四極桿。

四極場是四極桿質(zhì)譜工作的基礎(chǔ)，而四極場主要受兩方面因素的影響：電壓和四個電極的相對位置。電壓波動會造成四極場的變化，這一影響因素可以通過穩(wěn)壓電源等進行消除。能夠?qū)е码姌O相對位置發(fā)生變化的主要是溫度，溫度變化能夠?qū)е滤臉O桿熱脹冷縮，從而影響四極場。Agilent的四極桿具有專利的加熱控溫設(shè)計，能夠?qū)⑺臉O桿的溫度恒定在100℃，從而消除溫度對于四極場的影響，確保四極場長期處于穩(wěn)定的狀態(tài)。這一專利設(shè)計可以確保實現(xiàn)對極為復(fù)雜的基質(zhì)中極低含量化合物的準確檢測。

另外，100℃加熱處理使四極桿表面的分子熱力學(xué)運動更加劇烈，污染物不容易吸附在四極桿上，從而起到了很好的抗污染的作用，所以Agilent的四極桿可以做到免維護，這是其他任何廠家的質(zhì)譜都無法做到的。

90彎曲的六極桿碰撞池：在6470 QQQ中，綜合考慮離子聚焦以及離子的傳輸效率，保留了六極桿碰撞池以及線性加速的設(shè)計，新增90°直角彎曲設(shè)計。其一方面可以降低儀器的占地面積，另一方面可以減少中性粒子造成的背景噪音，提高儀器的信噪比。而且在碰撞池的入口端開口比出口端大，可以保證接收更多由第一級四極桿過來的母離子，以及更好地聚焦由碰撞池產(chǎn)生的二級碎片離子。

全新設(shè)計的高能打拿極檢測器：近年來，液質(zhì)QQQ的正離子靈敏度已經(jīng)足夠高，且能夠滿足各種應(yīng)用的需要，但是負離子的靈敏度略顯不足，各家液質(zhì)的研發(fā)都圍繞提高負離子的靈敏度進行。安捷倫最新設(shè)計的高能打拿極采用超低噪音的設(shè)計，并將其能量提高一倍，顯著提高了負離子的靈敏度和低濃度的重復(fù)性。

3.2 功能強大的軟件，簡化操作，保證結(jié)果的可信度

全自動質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化軟件：Masshunter Optimzer質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化軟件是市場上唯一一款可使用自動進樣器、注射泵等多種進樣方式對小分子化合物（如內(nèi)源性代謝物、農(nóng)殘及獸殘等）和大分子化合物（如多肽等）質(zhì)譜參數(shù)進行優(yōu)化的軟件，并且優(yōu)化后的參數(shù)可存儲在數(shù)據(jù)庫中。當(dāng)建立目標化合物定量分析方法時，可從數(shù)據(jù)庫將優(yōu)化后的質(zhì)譜參數(shù)直接導(dǎo)入采集方法，實現(xiàn)數(shù)據(jù)庫與采集方法的無縫連接。

自動方法編輯動能——動態(tài)MRM（Dynamic MRM，dMRM）功能：在傳統(tǒng)的多化合物同時定量分析時，由于受到Dwell time（離子駐留時間）和色譜峰寬的制約，需要根據(jù)樣品的色譜分離情況設(shè)置多個time segment（時間窗口），以保證檢測的靈敏度和結(jié)果的重復(fù)性。但是隨著樣品復(fù)雜程度的增加，設(shè)置time segment具有眾多的局限性，有可能會導(dǎo)致樣品檢測信息的丟失。Agilent最新推出的DMRM功能是市場上唯一一款成熟的無需設(shè)定time segment的MRM采集模式：在具備DMRM功能以及Dwell time低至1ms的基礎(chǔ)上，Agilent 6400型串聯(lián)四級桿液質(zhì)聯(lián)用儀，配以Agilent的高分辨快速液相色譜系統(tǒng)，可以實現(xiàn)15分鐘內(nèi)對300種農(nóng)殘同時進行高靈敏度、高重復(fù)性、高可靠性的準確定量分析。

同時定量及定性確證功能——觸發(fā)式MRM（Triggered MRM，tMRM）功能：在實際樣品檢測中，假陽性干擾是經(jīng)常遇到的問題。在對化合物進行準確定量的同時，還需要采用一定的手段對信號進行定性確認，以避免假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。

觸發(fā)多反應(yīng)監(jiān)測(tMRM)是一種能夠在所有安捷倫三重串聯(lián)四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)上使用的分析方法。tMRM以化合物的碎片離子作為識別化合物的身份信息，在進行分析時以MRM模式自動采集化合物的碎片離子信息并整合為一張譜圖，該子離子譜圖可以用于譜庫鑒定和確認，并自動進行匹配度計算。tMRM分析縮短了分析時間，提高了分析通量，只需一臺儀器和一次進樣即可實現(xiàn)快速、靈敏的定量和定性分析。且由于tMRM的子離子信息采集時采用的是MRM模式，所以即使在極低含量水平時，依然能夠采集到有效的定性圖譜。

4 安捷倫Bravo自動化系統(tǒng)的優(yōu)勢

移液的高精準度：安捷倫Bravo自動化液體處理平臺是目前功能最豐富、速度最快、精密度最高的緊湊型系統(tǒng)之一。Bravo有3種移液頭：①384ST-384通道小體積移液頭：移液范圍300nL～70μL。②96ST-96通道小體積移液頭：移液范圍300nL～70μL。③96LT-96通道大體積移液頭：移液范圍2μL～250μL。安捷倫Bravo自動化液體處理平臺能夠移取低至300nL的液體，確保CV＜5%。

靈活使用和易于維護的移液頭：Bravo移液頭是目前市場上最易于更換的移液頭之一，只需解除3個鎖扣，即可實現(xiàn)取下并更換移液頭，實驗人員均可以輕松掌握，而無需專業(yè)人員上門即可快速更換。易于更換的移液頭方便了用戶針對不同應(yīng)用，靈活選用不同通道、不同移液范圍的移液頭；擴展了平臺的功能，確保了相應(yīng)移液范圍的移液精準度。Bravo的移液頭可以靈活選取吸頭，支持全部、單行/多行、單列/多列、矩陣、單根吸頭模式，滿足各種不用應(yīng)用需求。另外，它的每個活塞相互獨立，可對單個移液通道進行維護，有效降低維護成本。

圖標式操作軟件：自動化控制軟件VWorks具有圖標式的特點，簡單易學(xué)，即使沒有自動化液體處理工作站使用經(jīng)驗，也可以輕松入門，掌握protocol編輯方法。VWorks還擁有豐富的可編輯參數(shù)，滿足各種不同液體性質(zhì)的處理需求，支持表單控制，讓操作變得更加簡單。

設(shè)計精巧：Bravo設(shè)計非常緊湊，采用節(jié)省空間的九臺板設(shè)計，占地面積小，適合放置于層流凈化罩中進行細胞實驗或?qū)τ卸驹噭┳鲎詣踊后w處理。

臺面配件豐富，功能全面：Bravo平臺具有9個板位，可容納60多種附件。其具有多個可選擇板塊，可選振蕩器模塊：可進行震蕩混合，實現(xiàn)振蕩+吹打混勻同時進行；可選半導(dǎo)體溫控模塊：能夠在大約4～100℃范圍內(nèi)提供溫度循環(huán)；可選制冷循環(huán)溫控模塊：溫控范圍-5～50℃，溫度控制可精確至±0.1℃，確保整個微孔板的熱均一性；可選真空過濾臺板：實現(xiàn)廢物過濾和過濾液收集應(yīng)用，使分離變得簡單、快速且高效。另有眾多配件可根據(jù)實驗需求進行選擇。

圖8 Bravo平臺的9個板位

使用安全：Bravo單機儀器均配有基于紅外的LED安全光簾，以及緊急制動按鈕，從而提高操作的安全性。系統(tǒng)暫停后仍可從斷點處繼續(xù)，增加操作安全性的同時不影響實驗流程。