AE滅活疫苗ELISA抗體與攻毒保護效果試驗

羅文仁，李忠曉，李富金

(1.北京市華都峪口禽業(yè)有限責任公司，北京 101206；2.山東魯豐集團有限公司，山東 安丘 262100；3.齊魯動物保健品有限公司，山東 濟南 250100)

禽腦脊髓炎（AE）是一種主要侵害幼雞的病毒病，以運動失調(diào)和頭頸部震顫為特征，產(chǎn)蛋雞可出現(xiàn)一時性產(chǎn)蛋急劇下降，種蛋孵化率降低,死雛、弱雛增多等[1]。國內(nèi)1980年開始有疑似病例報道，1983年確診該病存在，此后國內(nèi)多個省份都有該疫病流行的報道[2]，國內(nèi)對該病的相關(guān)研究也比較多，并研制了有效疫苗用于該病防控，通過疫苗免疫該病得到了有效控制。近幾年發(fā)病又開始增多，呈區(qū)域流行趨勢。禽腦脊髓炎病毒感染無抗體雛雞有明顯臨床癥狀，但青年雞、產(chǎn)蛋雞無明顯臨床癥狀，也無特征性肉眼病理變化，給該病臨床診斷帶來一定困難，常通過采集發(fā)病雞腦組織進行SPF雞胚連續(xù)傳代分離病原、人工感染試驗、PCR、瓊脂擴散試驗 (AGP)、ELISA檢測血清中抗體等進行鑒定、診斷和控制該疫病，其中ELISA檢測方法是一種快速的檢測系統(tǒng)，可以準確、及時了解雞群抗體陽性率及數(shù)值高低[3]，但抗體值與攻毒保護之間的相關(guān)性資料介紹很少，本實驗目的就是找到兩者之間的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 試驗用雞 28日齡SPF雞15只，購自濟南斯帕法斯公司。

1.1.2 試劑盒 ELISA試劑盒，IDEXX公司生產(chǎn)。

1.1.3 疫苗及強毒 禽腦脊髓炎滅活疫苗，齊魯動物保健品有限公司生產(chǎn)（批號：1612006）；禽腦脊髓炎強毒，山東省農(nóng)業(yè)科學院家禽研究所提供。

1.1.4 試驗器具及設備 負壓隔離器、酶標儀、離心機、一次性注射器、離心管等。

1.2 方法

1.2.1 試驗分組 選取體況相同的28日齡SPF雞15只，隨機分為試驗組和對照組2組，其中試驗組10只，每只肌肉注射禽腦脊髓炎滅活疫苗0.5ml；對照組5只，每只注射生理鹽水0.5ml。

1.2.2 試驗方法 試驗雞與對照組雞都進行編號，飼養(yǎng)在同一個負壓隔離器內(nèi)，為了容易辨認，對照雞頭部染為綠色。試驗組免疫疫苗后21d，全部雞只采血，1ml/只，分離血清，ELISA抗體效價檢測，采血后全部試驗雞采用腦內(nèi)接種方式攻毒(按照禽腦脊髓炎滅活疫苗效力檢測規(guī)程操作)，每日觀察攻毒雞發(fā)病情況，攻毒雞出現(xiàn)臨床癥狀時和攻毒后21d試驗結(jié)束，采集存活雞血，分離血清，檢測抗體，統(tǒng)計攻毒雞發(fā)病情況，與檢測抗體進行對比。

1.2.3 血清抗體檢測方法 ELISA抗體檢測按照酶聯(lián)免疫吸附試驗規(guī)程進行。

2 試驗結(jié)果

2.1 臨床觀察結(jié)果

2.1.1 免疫副反應 試驗組與對照組雞只臨床表現(xiàn)均未見異常，采食、精神與免疫前無差異。

2.1.2 發(fā)病雞臨床癥狀 攻毒后11d，試驗組雞只出現(xiàn)明顯臨床癥狀，嚴重的表現(xiàn)為精神不振、腹瀉及癱瘓（見圖 1）、頭頸震顫等，最后衰竭死亡（見圖2）；輕微的出現(xiàn)精神不振、不愿意運動、驅(qū)趕行走瘸腿等。試驗雞均未發(fā)現(xiàn)有視力問題及眼觀病變。

圖1 發(fā)病雞精神不振、癱瘓

圖2 癱瘓雞衰竭死亡

2.1.3 發(fā)病及存活結(jié)果 攻毒后21d，試驗組有1只發(fā)?。òl(fā)病率10%），10只存活（存活率 100%）；對照組5只全部發(fā)?。òl(fā)病率100%），有1只存活（存活率 20%）。

2.2 抗體結(jié)果 結(jié)果顯示：免疫后21d，試驗組抗體陽性率為80%，均值為1042.17；對照組抗體陽性率為0，均值為 28.68；攻毒后11d，發(fā)病雞表現(xiàn)明顯臨床癥狀，試驗組抗體陽性率90%，均值為2789.36；對照組抗體陽性率為 0，均值為84.44；攻毒后21d，試驗結(jié)束，試驗組抗體陽性率100%，均值為2254.15；對照組抗體陽性率為20%，均值為570.85。試驗組、對照組抗體值及攻毒結(jié)果見小表1。

3 小結(jié)與分析

3.1 禽腦脊髓炎滅活疫苗免疫效果良好，免疫后21d，攻毒保護效果高達90%。攻毒前后的抗體陽性率結(jié)果見圖3。

圖3 攻毒前后抗體陽性率、發(fā)病率及成活率結(jié)果

3.2 對比攻毒前ELISA抗體結(jié)果與攻毒后發(fā)病結(jié)果，可以看出試驗雞免疫抗體陽性（≥396）雞攻毒后100%未發(fā)??；對照組ELISA抗體均為陰性，100%發(fā)病，可見ELISA抗體值陽性與攻毒保護是正相關(guān)的，因此，臨床上可以通過抽檢免疫雞群的ELISA抗體陽性率，來了解雞群對該病的保護效果，抗體陽性率越高、值越高，保護效果越好。

表1 試驗組、對照組抗體值及攻毒結(jié)果

3.3 編號為2286的免疫雞，攻毒時抗體為陰性（185.37＜396），對照雞發(fā)病時，其抗體值已經(jīng)達到2937.34，未見發(fā)病，懷疑是檢測誤差造成的。

3.4 編號為2287、385的兩只雞，攻毒后發(fā)病，最終耐過存活，攻毒后21d的ELISA抗體值均遠大于陽性值，但臨床上有區(qū)別，2287為免疫雞，臨床癥狀輕微，385雖然存活，但有明顯后遺癥（出現(xiàn)點頭癥狀）。

3.5 對比免疫試驗雞在攻毒前后ELISA抗體均值，先升后降，推測是疫苗免疫抗體繼續(xù)增長達到峰值的過程，此后受到野毒攻擊后抗體消耗，稍有下降，攻毒前后不同階段抗體見圖4。

圖4 攻毒前后不同階段抗體均值

3.6 非免疫對照雞攻毒前的ELISA抗體均值為28.68，攻毒后ELISA抗體均值為84.44，抗體雖有產(chǎn)生，但值不高，很難達到有效抵抗病毒攻擊（即ELISA抗體達到陽性的程度）的值（圖4），雞仍然發(fā)病。