苜蓿斑點(diǎn)病病原菌分離鑒定及紫花苜蓿品種的抗性篩選

方 ， ，

(北京林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，北京 100083)

紫花苜蓿有“牧草之王”的美稱[1]，因其適應(yīng)性、抗逆性及營養(yǎng)品質(zhì)突出而在世界廣泛栽培，在畜牧業(yè)中具有重要的作用。隨著品種單一化以及規(guī)?；图s化的生產(chǎn)，苜蓿的病害也越來越嚴(yán)重，其嚴(yán)重地降低了牧草的品質(zhì)和產(chǎn)量[2]，造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失[3]。苜蓿病害研究在我國起步較晚，直到上世紀(jì)70年代才開始進(jìn)行系統(tǒng)的研究[4]，當(dāng)前多種病害研究資料依然匱乏，因此，加強(qiáng)苜蓿病害研究是我國苜蓿安全生產(chǎn)的重要保障之一。

苜蓿斑點(diǎn)病可嚴(yán)重降低苜蓿產(chǎn)量和飼用價值，鏈格孢菌(Alternariasp.)是苜蓿斑點(diǎn)病的病原菌之一。Naseri等[5]2000年在Kheirabad對生長期具有斑點(diǎn)病癥狀的苜蓿進(jìn)行了病原物分離，發(fā)現(xiàn)發(fā)病苜蓿植株的葉、莖、根等器官中均含有鏈格孢菌，并證明其可產(chǎn)生降低飼草品質(zhì)的真菌毒素。鏈格孢菌作為苜蓿斑點(diǎn)病的病原菌的描述記載較多[6-7]，但國內(nèi)的系統(tǒng)研究報道目前還較少。2010年，國內(nèi)首次報道鏈格孢引起的苜蓿斑點(diǎn)病，并分離得到交鏈格孢(Alternariaalternata)[8]。由于鏈格孢屬分生孢子的形態(tài)學(xué)特征易受外界環(huán)境影響，因此根據(jù)形態(tài)學(xué)觀察難以對鏈格孢屬進(jìn)行種級分類；但隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，利用內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)ITS和 OPA2-1核苷酸序列對苜蓿斑點(diǎn)病鏈格孢屬病原菌種一級的分子鑒定已有報道[9]。

目前，交鏈格孢菌斑點(diǎn)病尚無抗性品種育出，因此主要依賴化學(xué)防治[10]?？共∮N是防治病害提高牧草效益的核心手段之一。由于每一種病原物的致病機(jī)理都有其獨(dú)特的遺傳特性，則篩選出對應(yīng)病原物的抗性材料是培育抗病品種的關(guān)鍵。抗病篩選的方法主要有孢子懸浮液接種法和離體葉片接種法，前者具有準(zhǔn)確、快速的優(yōu)點(diǎn)，后者便于控制環(huán)境條件且差異明顯，都廣泛地用于抗病性評價[11-12]。除接種方法外，抗病相關(guān)酶活性變化的生理指標(biāo)也可用于抗病性評價[13]。苯丙氨酸解氨酶PAL是苯丙烷類代謝的關(guān)鍵酶和限速酶，參與多種抗菌化合物的合成。多項研究表明PAL酶活性與抗病性呈正相關(guān)，因此苯丙氨酸解氨酶活性可用于抗病性評價[14]。

根據(jù)對北京林業(yè)大學(xué)順義草地植物實驗站中紫花苜蓿的病害調(diào)查，苜蓿斑點(diǎn)病發(fā)生極其嚴(yán)重，本研究對該實驗站中苜蓿斑點(diǎn)病的病原菌進(jìn)行了分離鑒定，并將其侵染21個紫花苜蓿品種，綜合評價這些品種對該病原菌的抗病性，為我國苜蓿斑點(diǎn)病的抗病性研究奠定基礎(chǔ)，也為生產(chǎn)中選擇對苜蓿斑點(diǎn)病抗性強(qiáng)的苜蓿品種提供參考。

1 材料與方法

1.1 植物材料

2017年4月11日于北京林業(yè)大學(xué)八家試驗地大田分區(qū)播種21個紫花苜蓿品種(表1)，進(jìn)行常規(guī)田間養(yǎng)護(hù)。

表1 紫花苜蓿品種及編號Table 1 Alfalfa varieties and numbers

1.2 菌種材料

1.2.1采樣及病菌分離 2017年6月于北京林業(yè)大學(xué)順義草地植物實驗站采集苜蓿典型病樣，采用常規(guī)組織分離法[15]對病原菌進(jìn)行分離，多次純化獲得純菌株。

1.2.2病原菌分子鑒定 病原菌DNA提取利用試劑盒(OMEGA E.Z.N.ATM Fungal DNA Mini Kit)進(jìn)行。 采用真菌核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)通用引物ITS1(5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’)和 ITS4(5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’)[16]、小分子鏈格孢特異引物OPA2-1R(5’-TGCCGA GCTGTCAGATAATTG-3’)和OPA2-1F(5’-GCCGAG CTGGTGGAGAGAGT-3’)[17]進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系為25 μL，2×Taq Master Mix 12.5 μl，DNA模板為1 μL，上下引物各1μL，ddH2O 9.5 μL。反應(yīng)程序為94℃預(yù)變性3 min，94℃變性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸1 min，35個循環(huán)，72℃延伸5 min。

PCR產(chǎn)物經(jīng)1.0%的瓊脂糖凝膠電泳檢測。引物由北京天一輝遠(yuǎn)生物科技有限公司合成，擴(kuò)增產(chǎn)物送該公司測序，測序結(jié)果在NCBI數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行登錄和比對。

1.3 接種方法

采用孢子懸浮液接種，參考袁慶華[11]等方法并加以改良，用血球計數(shù)板計算孢子濃度，制成濃度約為1×106個·ml-1的孢子懸浮液。

1.3.1離體葉片接種 參考李洪建[18]關(guān)于苜蓿莖點(diǎn)霉葉斑病的離體葉片接種方法，并稍作修改。選取無病且長勢良好的植株，以復(fù)葉為單位采集相同部位葉片，每個培養(yǎng)皿放置4片大小相似的復(fù)葉，每處理3皿，設(shè)3次重復(fù)。每天噴霧蒸餾水以保證培養(yǎng)皿內(nèi)濕度。

1.3.2田間接種 選取長勢一致、健康的苜蓿植株，采用孢子懸浮液噴霧接種，套袋遮光保濕24 h后去袋，對照噴霧等量蒸餾水，每處理10株，設(shè)3次重復(fù)。

1.3.3離體枝條水培接種 選取健康枝條于蒸餾水中水培，采用孢子懸浮液噴霧法接種，遮光保濕24 h后放置在27℃，80%濕度的光照培養(yǎng)箱中，于4天后取相同部位葉片測PAL酶活性。對照噴等量蒸餾水，設(shè)3次重復(fù)。

1.3.4病情測定

1.3.4.1 發(fā)病率

發(fā)病率的統(tǒng)計方法是發(fā)病葉片占總?cè)~片的比例。每天觀察發(fā)病情況。

1.3.4.2 分級標(biāo)準(zhǔn)

按每片小葉片病斑面積占總單片葉片面積的比例來分級測定病情。0級：無病斑；1級：病斑占葉片面積0～25%；2級：病斑占葉片面積26%～50%；3級：病斑占葉片面積51%～75%；4級：病斑占葉片面積76%～100%。

抗病級別實驗室離體葉片實驗病情指數(shù)<15為高抗，病情指數(shù)16～30為中抗，病情指數(shù)31～45為中感，病情指數(shù)>45為高感。

田間試驗擬抗病級別病情指數(shù)<5為高抗，病情指數(shù)5～10為中抗，病情指數(shù)10～15為中感，病情指數(shù)>15為高感。

1.3.5酶活性測定 PAL測定方法參考陳建隕[19]的方法，以每30 min A290增加0.01所需酶量為1個酶活性單位(U·g-1)，使用UV-2600分光光度計測量。為了消除材料本身的差異和測量之間的誤差，本試驗所測定的酶活性采用相對酶活性：

相對酶活性(%)=接菌株系酶活性/未接菌株系酶活性×100%

1.3.6隸屬函數(shù)計算方法 利用公式求出具體函數(shù)值，Zij為i苜蓿品種的j指標(biāo)的隸屬函數(shù)值，Xij為i苜蓿品種的j指標(biāo)值，Xjmin、Xjmax分別為21個供試品種j性狀指標(biāo)的最小值和最大值。當(dāng)j指標(biāo)與苜?？共⌒猿烧嚓P(guān)時，用(1)式；反之，當(dāng)j指標(biāo)與苜?？共⌒猿韶?fù)相關(guān)時用(2)式。

Zij=(Xij-Xjmin)/(Xjmax-Xjmin) (1)

Zij=(Xjmax-Xij)/(Xjmax-Xjmin) (2)

把21個品種大田實驗測得的病情指數(shù)、離體葉片實驗測得的病情指數(shù)和枝條水培取樣測得的PAL酶活性指標(biāo)的隸屬函數(shù)值求平均值，值越大，抗性越強(qiáng)；反之越小。利用各品種指標(biāo)隸屬值的大小來評價其抗病性強(qiáng)弱。

1.3.7數(shù)據(jù)分析 應(yīng)用Excel、SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和作圖，采用one-way ANOVA進(jìn)行單因素方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 苜蓿斑點(diǎn)病癥狀及病原真菌形態(tài)特征

經(jīng)實地調(diào)查分析，6月初苜蓿斑點(diǎn)病發(fā)生極嚴(yán)重，病葉占整個植株近70%，且所有植株都感病，感病植株表現(xiàn)出活力減弱，葉片萎黃；病斑正反面均為黑褐色，融合擴(kuò)大表現(xiàn)出與褪綠暈環(huán)繞的同心區(qū)，周圍葉片黃化，表面平滑無凸出感，病斑直徑為0.1～0.6 mm，且病斑所占葉片面積按病害嚴(yán)重程度遞增，病情輕微的葉片僅葉尖發(fā)黃，嚴(yán)重時整個葉片發(fā)黃，對植株生長和苜蓿的品質(zhì)造成極大影響。

對采集的病葉分離純化，在PDA平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)，菌落前期灰白色，后期呈墨綠色，有絮狀氣生菌絲，分生孢子梗單生或簇生，有分隔；在顯微鏡下觀察分生孢子呈梭形、倒棍棒型、長卵型。有2～5個橫隔，0～3個縱隔，大小約為20 μm×10 μm，隔膜處稍有縊縮。根據(jù)分生孢子的形態(tài)特征初步鑒定為鏈格孢屬真菌(Alternariasp.)。

圖1 苜蓿斑點(diǎn)病發(fā)病癥狀及病原形態(tài)特征Fig.1 The symptoms of alfalfa Leaf spot and morphology of isolated pathogen注：A：苜蓿斑點(diǎn)病病葉癥狀；B：病原菌落形態(tài)；C：病原菌分生孢子(400×)Note：A：The symptom of alfalfa leaf spot；B：Isolation and culture of pathogen；C ：Conidia(400×)

2.2 分子鑒定結(jié)果

以病原菌DNA為模板，分別用ITS1/ITS4引物和OPA2-1L/OPA2-1R引物做PCR擴(kuò)增，電泳后紫外凝膠成像(圖2)，條帶單一較亮，且無非特異性擴(kuò)增條帶，將PCR產(chǎn)物進(jìn)行雙向測序。

圖2 真菌基因組的DNA PCR檢測電泳圖譜Fig.2 Electrophoresis pattern of fungal genomic DNA PCR test

通過分析rDNA-ITS和rDNA-OPA2-1測序比對的結(jié)果，將得到的序列導(dǎo)入Genbank中進(jìn)行同源性比對，并結(jié)合形態(tài)學(xué)特征確認(rèn)致病菌是交鏈格孢菌(Alternariaalternata)。

擴(kuò)增的ITS序列結(jié)果(547bp)：

A C C T G C G G A G G G A T C A T T A C A C A A A T A T G A A G G C G G G C T G G A A C C T C T C G G G G T T A C A G C C T T G C T G A A T T A T T C A C C C T T G T C T T T T G C G T A C T T C T T G T T T C C T T G G T G G G T T C G C C C A C C A C T A G G A C A A A C A T A A A C C T T T T G T A A T T G C A A T C A G C G T C A G T A A C A A A T T A A T A A T T A C A A C T T T C A A C A A C G G A T C T C T T G G T T C T G G C A T C G A T G A A G A A C G C A G C G A A A T G C G A T A A G T A G T G T G A A T T G C A G A A T T C A G T G A A T C A T C G A A T C T T T G A A C G C A C A T T G C G C C C T T T G G T A T T C C A A A G G G C A T G C C T G T T C G A G C G T C A T T T G T A C C C T C A A G C T T T G C T T G G T G T T G G G C G T C T T G T C TC T A G C T T T G C T G G A G A C T C G C C T T A A A G T A A T T G G C A G C C G G C C T A C T G G T T T C G G A G C G C A G C A C A A G TC G C A C T C T C T A T C A G C A A A G G T C T A G C A T C C A C T A A G C C T T T T T T T C A A C T T T T G A C C T C G G A T C A G G T A G G G A T A C C C G C T G A A C T T A A G C A T A T C A

擴(kuò)增的OPA2-1序列結(jié)果(599bp)：

C T G T C A G A T A A T T G A A G C T T T G A T G C T A A G A A A G T A G T T T A T T T G G T A T G A T G G T G G C T G T T G G G C G C A G C T A C C T T T A A G A A G G G T C C G C G A A G T T T A T G G C A A T G A G G T C A T G T C C G G T C T T T A C C G G C C A G C G C C A T T G T T G G G C G C G T C T C G T G C G A G T G C A T C G G G T G G A C G T G G G A C A C T G C A C C A T A G T A A C G C G A C G C G C T G C A T A C A C G C T G T T T G T C A G C C C A G G T G G C G T G A G G T A T C A G A T C T G C G G C G T G G T C T T G C T A C C G A A T G C G T G C G C T T G C A G C T C G A G G C T T C G T T T A C G C T C A C G A T T T T C T T C G T A C T A A C A C T G T T A T C G C G G C G T G G A A A T A A C T T G T A T C A A G C A C G A G A T T G T T G G T C A G A G T G G A A T C GA G A C A T T T G A A A G C G G G G C G C C T C G T G G G C C G T A C C A C T C C A T C C A C A T G T A T T T G G T C A A T C T G C A T C A T C A C C C G T C T A T C C A C A G C A G A A T C C C A A C A T T C A T C C A A G T C T G A A T T T T G C T A A T C A T A C A T C A G A A C G T G A A G A T C A C G A C C C A G C T C C C C G C A G C T T A T C T G C A G T C A T T T C C T G A A C T C T C T C C A C A A

2.3 離體葉片實驗篩選

離體葉片侵染后2～3 d有明顯發(fā)病葉片，8～10 d發(fā)病率趨于穩(wěn)定，10 d后測定病情指數(shù)(圖3)。

由圖3可知，21份材料的病情指數(shù)為5.79～53.01；品種間存在顯著差異(P<0.05)，病情指數(shù)越小抗病性越強(qiáng)，‘英斯特’病情指數(shù)5.79，抗病性最強(qiáng)，其次是‘SK3010’病情指數(shù)6.02，‘北林201’病情指數(shù)7.87，‘皇冠’病情指數(shù)8.10；抗病性最弱的為‘新疆大葉’，病情指數(shù)高達(dá)53.01，其次是‘準(zhǔn)葛爾’病情指數(shù)50.46，‘維多利亞’病情指數(shù)40.05，‘肇東’病情指數(shù)38.43；將所有21個品種分為以下四個抗性水平，高抗水平(病情指數(shù)<15)的編號為：3，5，6，7，8，12，15，16，17；中抗水平(病情指數(shù)16～30)的編號為：2，1，4，9，10，11，13；中感水平(病情指數(shù)31～45)的品種編號為：14，18，21；高感水平(病情指數(shù)>45)的品種編號為：19，20。

圖3 離體葉片實驗不同苜蓿品種的病情指數(shù)Fig.3 Disease index of different alfalfa cultivars in vitro leaf experiments注：品種編號參考表1；不同小寫字母間差異顯著(P<0.05)；下同Note: Varieties number in Table1. Different small letters (P<0.05) are significant different among the treatment. The same as below

2.4 大田實驗篩選

大田實驗侵染一周后開始有病癥葉片，20 d后病情明顯測定病情指數(shù)(圖4)。

由圖4可知，21份材料的病情指數(shù)為0.49～29.75，品種間存在顯著差異(P<0.05)?？剐宰顝?qiáng)的為‘威神’，病情指數(shù)0.49，‘皇冠’病情指數(shù)0.62，其次是‘SK3010’病情指數(shù)0.74，‘MF4020’和‘Tango’的病情指數(shù)均為1.11，最易感病的品種為‘新疆大葉’病情指數(shù)29.75，其次是‘耐鹽之星’病情指數(shù)26.79、‘準(zhǔn)葛爾’病情指數(shù)22.59。將所有21個品種分為以下四個抗性水平，高抗水平(病情指數(shù)<5)的品種編號為：2，3，5，6，7，8，13，14，15，16，17，18；中抗水平(病情指數(shù)5～10)的品種編號為：1，4，11，12，21；中感水平(病情指數(shù)10～15)的品種編號為：10；高感水平(病情指數(shù)>15)的品種編號為：9，19，20。

圖4 大田實驗不同苜蓿品種的病情指數(shù)Fig.4 Disease index of different alfalfa varieties in field experiments

2.5 苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性差異篩選抗感病

枝條水培實驗的葉片侵染后4 d病癥初現(xiàn)，各苜蓿品種葉片取樣測苯丙氨酸解氨酶活性(圖5)。

圖5 不同品種侵染后四天苯丙氨酸解氨酶(PAL)相對酶活性Fig.5 Relative enzyme activity of phenylalanine ammonia-lyase (PAL) in four days after infestation of different cultivars

由圖5可知，品種間PAL相對酶活性存在顯著差異(P<0.05)，其中‘英斯特’相對酶活性最強(qiáng)，達(dá)到136%；其次是‘MT4015’，相對酶活性達(dá)131%；相對酶活性較低的是‘巨能7’和‘新疆大葉’，分別為82%和84%；‘巨能601’相對酶活性居中為100%。

利用生理生化指標(biāo)進(jìn)行抗病性鑒定是一種輔助性鑒定方法，許多研究表明，植物受到病原菌侵染后，一些代謝相關(guān)酶會發(fā)生一定的變化，這些變化與植物的抗病機(jī)制有關(guān)。多項研究表明[20]，PAL活性與抗病性呈正相關(guān)，因此可利用PAL活性來測定品種的抗病性，即PAL酶活性越高，抗病性也較強(qiáng)。由圖4可知，抗性較強(qiáng)(病情指數(shù)>110)的品種編號為：1，2，4，5，13，14，15，17，21；抗性中等(病情指數(shù)90～110)的品種編號為：3，6，7，9，11，12，16，19；抗性較弱(病情指數(shù)<90)的品種編號為：8，10，18，20。

2.6 利用模糊隸屬函數(shù)法綜合篩選

不同紫花苜蓿種質(zhì)抗病強(qiáng)弱的程度可以通過隸屬函數(shù)值反映，值越大植株受病原菌影響越小，其抗病性就越強(qiáng)；反之，隸屬函數(shù)值越小，植株受病原菌影響越大，抗病性越弱。通過隸屬函數(shù)法綜合大田侵染實驗的病情指數(shù)、離體葉片實驗的病情指數(shù)和PAL相對酶活性指標(biāo)進(jìn)行了評價，對21個紫花苜蓿品種進(jìn)行抗病性強(qiáng)弱的排序(表2)，抗性由強(qiáng)至弱分別為‘英斯特’>‘MT4015’>‘北林201’>‘Tango’>‘威神’>‘皇冠’>‘巨能995’>‘SK3010’>‘斯貝德’>‘Dryland’>‘MF4020’>‘巨能2’>‘巨能801’>‘巨能601’>‘巨能7-耐望’>‘維多利亞’>‘巨能7’>‘肇東’>‘耐鹽之星’>‘準(zhǔn)葛爾’>‘新疆大葉’。

3 討論與結(jié)論

苜蓿有許多常見且危害嚴(yán)重的真菌病害，如霜霉病[21]、褐斑病[22]、銹病[23]、根腐病[24]等，近年來已有對這些病害進(jìn)行了系統(tǒng)研究[25]。張麗[14]從苜蓿葉部病害分離到的苜蓿真菌中鏈格孢的分離頻率最高，但是致病性較弱，因此該病菌引起的苜蓿病害易受研究者忽視。

2017年6月，本研究通過對北京林業(yè)大學(xué)順義草地植物實驗站紫花苜蓿的調(diào)查發(fā)現(xiàn)一種葉部病害發(fā)生嚴(yán)重，對苜蓿的品質(zhì)和產(chǎn)量造成了極大的影響，通過發(fā)病葉片的病斑觀察并結(jié)合顯微鏡下孢子形態(tài)觀察，初步確定病原菌為鏈格孢屬(Alternariasp.)，通過查閱文獻(xiàn)確定該苜蓿病害為苜蓿斑點(diǎn)病[8-9]。傳統(tǒng)的菌種鑒定方法易受到環(huán)境和人為因素的影響而表現(xiàn)不穩(wěn)定且難以準(zhǔn)確鑒定到種。真菌DNA堿基具有穩(wěn)定性，借助PCR和測序等分子生物技術(shù)可以快速鑒定出真菌種類[25]。本實驗利用試劑盒提取了真菌DNA，分別利用引物ITS1/ITS4和OPA2-1R/OPA2-1F擴(kuò)增出真菌核糖體ITS片段(547 bp)和OPA2-1片段(599bp)，經(jīng)過Genbank比對結(jié)果均為交鏈格孢(Alternariaalternata)。

利用分離培養(yǎng)的真菌進(jìn)行田間侵染、實驗室離體葉片法和水培枝條法侵染實驗，苜蓿發(fā)病癥狀均相似，葉尖發(fā)黃，病斑大小視嚴(yán)重程度而異，發(fā)病嚴(yán)重的葉片黃化、變干脫落(室外大田)、葉片變薄透明(離體葉片)，采集病葉重新鑒定真菌，仍為交鏈格孢菌，利用柯赫氏法則保證了實驗的準(zhǔn)確性。本研究結(jié)合大田侵染實驗和室內(nèi)侵染實驗，對21個紫花苜蓿品種對分離得到的鏈格孢做了抗性的初步研究，分析3種實驗方法，大田侵染、枝條水培侵染、離體葉片侵染后葉片病癥相似，但發(fā)病速度離體葉片>枝條水培>大田；離體葉片實驗易于控制100%濕度和最適宜孢子生長的溫度，3 d出現(xiàn)病癥，10 d發(fā)病率趨于穩(wěn)定；枝條水培實驗控制80%的濕度和最適宜溫度，4 d天侵染成功出現(xiàn)癥狀；大田實驗視環(huán)境不可控因素影響未能達(dá)到最適發(fā)病條件，發(fā)病癥狀沒有實驗室條件控制下明顯，一周之后葉片出現(xiàn)病癥，病情指數(shù)低于實驗室條件下病情指數(shù)，但是大田侵染更接近自然發(fā)病條件，對于生產(chǎn)應(yīng)用有直觀的參考價值。

寄主植物與病原真菌的相互作用具有復(fù)雜性，利用生理生化指標(biāo)可作為抗病性評價的輔助性方法。本實驗利用苯丙氨酸解氨酶活性作為指標(biāo)參與抗病性評價。結(jié)果表明各苜蓿品種PAL酶活性存在顯著差異(P<0.05)，與大田實驗和離體葉片實驗的病情指數(shù)評價抗感病結(jié)果存在極大相似度。

由于3種實驗的影響因素不同，所造成評價苜?？共⌒缘挠绊懖町愡€有待研究。3種指標(biāo)所占的權(quán)重?zé)o法準(zhǔn)確衡量，利用模糊隸屬函數(shù)法，對3個指標(biāo)隸屬值求平均來綜合評價21個紫花苜蓿品種的抗病性強(qiáng)弱，抗性最強(qiáng)的是加拿大進(jìn)口的英斯特品種，抗性最弱的是本土新疆大葉品種，為生產(chǎn)中選擇對苜蓿斑點(diǎn)病抗性強(qiáng)的苜蓿品種提供了參考。此外，多品種的抗性差異，為深入研究紫花苜蓿對苜蓿斑點(diǎn)病的抗感機(jī)理奠定了基礎(chǔ)，有利于今后深入研究抗病機(jī)理，減小鏈格孢菌產(chǎn)生的霉菌毒素和植物毒素對苜蓿生產(chǎn)造成的危害。