TK1和HIF-1α在甲狀腺癌中的表達(dá)及其相互關(guān)系

郭 晶，趙王成

甲狀腺癌為臨床常見(jiàn)內(nèi)分泌腫瘤，其發(fā)病率有逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)[1]，為全球范圍內(nèi)備受關(guān)注的惡性腫瘤之一。其病理類型以甲狀腺乳頭狀癌最為常見(jiàn)，臨床多采用病理學(xué)聯(lián)合影像學(xué)檢查對(duì)甲狀腺癌進(jìn)行診斷，但這些檢查方法較為繁雜，且缺乏特異性檢測(cè)指標(biāo)，因而其早期準(zhǔn)確診斷率仍不高[2]。近年來(lái)，在惡性腫瘤診斷中，細(xì)胞增殖標(biāo)志物的應(yīng)用日益增多，胸苷激酶1（TK1）屬于一種與細(xì)胞增殖緊密相關(guān)的細(xì)胞質(zhì)激酶，其水平高低可較好反映多種惡性腫瘤細(xì)胞增殖程度[3]。缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）是普遍存在于人和哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的缺氧應(yīng)答調(diào)控因子[4]，研究證實(shí)其在甲狀腺腫瘤中存在明顯上調(diào)[5]。但有關(guān)TK1在甲狀腺癌中的表達(dá)及與HIF-1α的關(guān)系研究尚未見(jiàn)報(bào)道，為此本課題探討了TK1在甲狀腺癌中的表達(dá)及與HIF-1α表達(dá)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 病例資料 選取2014年3月～2017年1月醫(yī)院收治的80例甲狀腺癌患者的癌組織（研究組）和同期收治的40例甲狀腺腫患者的組織（對(duì)照組）為研究樣本，均經(jīng)組織病理活檢確診。研究組中，男47 例，女 33 例，年齡 35～68(51.26±5.33)歲，均于醫(yī)院腫瘤外科行手術(shù)切除術(shù)治療；對(duì)照組中，男27例，女 13 例，年齡 38～68(52.58±5.31)歲。兩組上述基線資料比較無(wú)顯著差異（P＞0.05），具有可比性。

1.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 合并其他類型惡性腫瘤者；妊娠期和哺乳期婦女；合并嚴(yán)重心、肝、腎等重要臟器功能障礙。

1.3 主要試劑與設(shè)備 TK1診斷試劑盒和CSI-1型化學(xué)發(fā)光數(shù)字成像分析儀（深圳華瑞同康生物技術(shù)有限公司）；兔抗人HIF-1α多克隆抗體（Abcam公司），免疫組化試劑盒、DAB試劑盒和二抗（北京中杉金橋公司），RIPA裂解液和cDNA試劑盒、SYBR Green熒光染料（溫州長(zhǎng)豐生物科技有限公司）。

1.4 標(biāo)本取材與處理 組織標(biāo)本用10%甲醛固定、石蠟包埋、切片，行免疫組化檢測(cè)。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)

1.5.1 TK1 免疫組化SP法檢測(cè)標(biāo)本TK1表達(dá)情況，操作嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，由醫(yī)院專業(yè)病理醫(yī)師在高倍鏡下觀察結(jié)果，TK1表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，表現(xiàn)為棕黃色顆粒狀物為TK1陽(yáng)性。

1.5.2 HIF-1α 兩組標(biāo)本蠟塊均行4 μm的切片，68℃烤片2 h，二甲苯浸泡，采用PBS洗滌后滴加3%雙氧水，EDTA緩沖液95℃煮沸抗原修復(fù)，密閉后滴加一抗 50～100 μl(濃度 1：100)4 ℃過(guò)夜，37 ℃復(fù)溫 1 h， 滴加 40～50 μl二抗，37 ℃孵育 1 h，DAB 顯色2 min，蘇木精復(fù)染30 s，梯度乙醇脫水和透明后封片鏡檢，細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有棕黃色細(xì)顆粒為HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)。

1.6 臨床資料收集 采集納入患者性別、年齡、腫瘤直徑、中央?yún)^(qū)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分化程度等資料。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0軟件分析，計(jì)數(shù)資料以例和百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以±s表示，行t檢驗(yàn)；等級(jí)資料比較采用Z檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Spearman法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組TK1和HIF-1α陽(yáng)性率比較 研究組TK1和HIF-1α陽(yáng)性率均明顯高于對(duì)照組（P＜0.01，表 1）。

表1兩組TK1和HIF-1α陽(yáng)性率比較

2.2 TK1和HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)與甲狀腺癌病理因素的關(guān)系 TK1陽(yáng)性表達(dá)甲狀腺癌者TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、浸潤(rùn)深度為T3+T4的構(gòu)成比明顯高于TK1陰性表達(dá)者（P＜0.05），而HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期的構(gòu)成比明顯高于 HIF-1α 陰性表達(dá)者（P＜ 0.05），見(jiàn)表 2、3。

2.3 甲狀腺癌組織中TK1與HIF-1α的分析 相關(guān)性分析顯示，甲狀腺癌組織中HIF-1α表達(dá)與TK1表達(dá)呈明顯正相關(guān)（r=0.451，P＜ 0.01）。

表2TK1陽(yáng)性表達(dá)與甲狀腺癌病理因素的關(guān)系（例）

3 討論

甲狀腺癌腫瘤病灶生長(zhǎng)較為緩慢，但癌瘤早期易發(fā)生頸部淋巴結(jié)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，因而患者預(yù)后不良，且病死率高，目前其早期準(zhǔn)確診斷率不高[6]。相關(guān)研究表明，在惡性腫瘤轉(zhuǎn)移中缺氧發(fā)揮著重要作用[7]。HIF屬于一種有轉(zhuǎn)錄活性的核蛋白，有刺激血管生成、腫瘤轉(zhuǎn)移等活性，HIF-1α為最常見(jiàn)類型。既往研究證實(shí)，HIF-1α在乳腺癌和宮頸癌等患者中存在高表達(dá)[8-9]。TK1是胸苷激酶在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)存在的重要形式之一，在細(xì)胞DNA合成以及細(xì)胞增殖發(fā)揮著重要作用，劉京生等[10]研究表明，TK1在尿路上皮癌組織中存在高表達(dá)；薄維波等[11]研究則表明，血清TK1可作為原發(fā)性肝癌診療和預(yù)后效果評(píng)估的一項(xiàng)潛在指標(biāo)。

本研究發(fā)現(xiàn)，研究組TK1和HIF-1α陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組，表明甲狀腺癌組織中，TK1和HIF-1α表達(dá)水平升高，與任若冰等[13]和宋秋艷等[14]的結(jié)果一致。本研究還發(fā)現(xiàn)，TK1陽(yáng)性表達(dá)甲狀腺癌者TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、浸潤(rùn)深度為T3+T4的構(gòu)成比明顯高于TK1陰性表達(dá)者（P＜0.05），而HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期的構(gòu)成比明顯高于HIF-1α陰性表達(dá)者（P＜0.05），提示TK1和HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)與甲狀腺癌的腫瘤分期和轉(zhuǎn)移有關(guān)，與劉艷梅等[15]的結(jié)果一致。這是因?yàn)樵趯?shí)體瘤發(fā)生和發(fā)展各個(gè)階段，HIF-1α通過(guò)調(diào)節(jié)不同靶基因發(fā)揮重要作用，主要包括血管生成和細(xì)胞增殖及腫瘤干細(xì)胞分化等多個(gè)方面。

表3HIF-1a陽(yáng)性表達(dá)與甲狀腺癌病理因素的關(guān)系（例）

TK1是嘧啶補(bǔ)救途徑中一種細(xì)胞周期依賴性酶，與DNA合成有關(guān)，在增殖細(xì)胞中高表達(dá)[12]。本研究進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，甲狀腺癌組織中HIF-1α表達(dá)水平與TK1表達(dá)水平呈明顯正相關(guān)，提示TK1可能對(duì)HIF-1α表達(dá)有正調(diào)控作用，但其機(jī)制尚不明確，有待今后進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，TK1和HIF-1α在甲狀腺癌組織中的表達(dá)明顯上調(diào)，TK1可能對(duì)HIF-1α表達(dá)有正調(diào)控作用，聯(lián)合檢測(cè)TK1和HIF-1α對(duì)甲狀腺癌早期診治方案的制定有重要臨床意義。