日糧添加坡縷石對1～21 d肉雞生長性能、腸道免疫、抗氧化性能和腸道形態(tài)的影響

李 偉，王小建，劉耀東

（南陽農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，河南南陽 473003）

坡縷石是一種天然鎂鋁硅酸鹽黏土礦物質(zhì)，表面具有活性羥基和納米級晶體形態(tài)（Bergaya和Lagaly，2013）。由于其特殊的棒狀晶體堆積結(jié)構(gòu)及納米級尺寸，具有多氣孔、高縱橫比、離子交換和吸附能力（Murray，2000），可以作為添加劑用于增加顆粒飼料的黏結(jié)性。已有研究表明，坡縷石可以作為脫毒劑緩解黃曲霉污染的飼料對斷奶仔豬造成的影響（黃梓平等，2002）。此外，日糧添加坡縷石能改善斷奶仔豬腸道的完整性和屏障功能，其降低了血漿內(nèi)毒素濃度和二胺氧化酶（DAO）的活性，改善腸道形態(tài)（Zhang等，2013）。在蛋雞日糧中添加0.2%的坡縷石可以提高產(chǎn)蛋性能，促進消化酶的分泌（Qiao等，2015）。有研究表明，日糧添加坡縷石可以調(diào)控盲腸微生物菌群，同時黏土類礦物，如沸石粉、蒙脫石、高嶺土等對動物的免疫性能也有促進作用（Almeida等，2014；Wu等，2013；Song等，2012）。目前關(guān)于坡縷石對幼齡家禽的研究報道較少，因此，本試驗以1～21 d的AA肉雞為研究對象，在玉米-豆粕型日糧中添加0.4%或0.8%坡縷石，考察其對肉雞生長性能、免疫、抗氧化性能和腸道微生物菌群的影響，為其在家禽中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗日糧及分組 試驗用坡縷石（主要成分為二氧化硅、三氧化二鋁、硫酸亞鐵和氧化鎂等）購自聊城盛基農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司。選取1日齡雌性AA肉仔雞630只作試驗動物，隨機分為3組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)35羽。各組日糧分別在玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧中添加0、0.4%和0.8%坡縷石?；A(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.2 飼養(yǎng)管理 肉雞采用網(wǎng)上平養(yǎng)，雞舍內(nèi)用紅外線保溫?zé)舯?，第一周溫度在?2±1）℃，之后每周調(diào)節(jié)溫度直至溫度控制在22℃左右，舍內(nèi)相對濕度控制在65%，光照采用人工光照和自然光照結(jié)合，光照強度控制在30 lx。試驗雞只全期自由采食、飲水，按照商品肉雞免疫程序進行免疫，雞舍每周進行消毒。試驗時間為1日齡到21日齡。

1.3 測定指標(biāo)

1.3.1 生長性能 試驗期間每周按重復(fù)記錄肉雞的飼料消耗量，在試驗結(jié)束當(dāng)天早上對試驗雞只按重復(fù)進行稱重，記錄期末體重，計算試驗期間各組平均日采食量、平均日增重和料重比。

1.3.2 免疫、抗氧化指標(biāo) 試驗結(jié)束當(dāng)天，每個重復(fù)隨機選擇4只雞進行屠宰，收集空腸、回腸和盲腸。采用試劑盒法測定空腸和回腸免疫性能指標(biāo)IgG、IgM、SIgA的含量及抗氧化性能指標(biāo)超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的含量，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.3.3 絨毛形態(tài)及盲腸微生物含量 試驗雞只屠宰前翅下靜脈采血5 mL用于分離血清，血清二胺氧化酶活性采用南京建成生物研究所的試劑盒進行測定。參考Hu等（2013）研究報道測定絨毛形態(tài)。參考Huang等（2012）研究方法檢測腸道微生物數(shù)量。

1.3.4 腸道相關(guān)基因表達 參考Cheng等（2016）研究方法設(shè)計相關(guān)基因的引物，采用熒光定量PCR檢測腸道相關(guān)基因的mRNA表達水平。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 試驗數(shù)據(jù)使用使用Excel處理后，采用SAS單因子方差分析進行分析，各組均值采用Tukey’s多重比較進行差異顯著性檢驗，以P＜0.05作為差異顯著的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 日糧不同坡縷石水平對肉雞生長性能的影響 由表2可知，與對照組相比，日糧添加0.4%或0.8%坡縷石對肉雞平均日增重、平均日采食量及料重比均無顯著影響（P＞0.05）。

表2 日糧添加坡縷石對肉雞生長性能的影響

2.2 日糧不同坡縷石水平對肉雞腸道免疫性能的影響 由表3可知，對照組與處理1組、處理2組對空腸IgG、IgM和SIgA的含量均無顯著影響（P＞0.05）。處理2組較對照組顯著提高了肉雞回腸IgM和SIgA的含量（P＜0.05），而處理1組與處理2組對回腸IgM和SIgA的含量無顯著影響（P＞0.05）。日糧坡縷石水平對回腸IgG含量的影響無顯著差異（P＞0.05）。

表3 日糧添加坡縷石對肉雞腸道免疫性能的影響μg/mg

2.3 日糧不同坡縷石水平對肉雞腸道抗氧化性能的影響 肉雞抗氧化性能測定結(jié)果見表4，處理2組空腸SOD含量顯著高于對照組和處理1組（P＜0.05），處理2組較對照組顯著提高了回腸SOD含量（P＜0.05）。各組對空腸和回腸MDA含量的影響均無顯著差異（P＞0.05）。

表4 日糧添加坡縷石對肉雞腸道抗氧化性能的影響

2.4 日糧不同坡縷石水平對肉雞腸道形態(tài)的影響 由表5可知，對照組和處理1組血清二胺氧化酶的濃度顯著高于處理2組（P＜0.05）。與對照組和處理1組相比，處理2組顯著提高了空腸絨毛高度和杯狀細胞數(shù)量（P＜0.05）。處理1組和處理2組較對照組提高了回腸絨毛高度/隱窩深度（P＜0.05）。處理2組較處理1組和對照組顯著提高了回腸絨毛高度（P＜0.05），處理1組和處理2組回腸絨毛高度/隱窩深度、杯狀細胞數(shù)量均顯著高于對照組（P＜0.05）。

表5 日糧添加坡縷石對肉雞腸道形態(tài)的影響

2.5 日糧不同坡縷石水平對肉雞盲腸細菌含量和相關(guān)基因表達的影響 由表6可知，對照組較各處理組顯著提高了盲腸沙門氏菌含量（P＜0.05），而對照組和試驗組對盲腸乳酸桿菌和大腸桿菌含量均無顯著影響（P＞0.05）。處理1組較對照組和處理2組顯著提高了空腸TF2基因相對表達水平（P＜0.05），各組對空腸其他基因的相對表達水平無顯著影響（P＞0.05）。處理2組較對照組和處理1組顯著提高了回腸MUC2和ZO-1基因的相對表達水平（P＜0.05），處理1組和處理2組較對照組顯著降低了回腸TNF基因的相對表達水平（P＜0.05）。

表6 日糧添加坡縷石對盲腸細菌含量及腸道相關(guān)基因表達的影響

3 討論

3.1 日糧添加坡縷石對肉雞生長性能的影響本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，日糧添加0.4%或0.8%坡縷石對肉雞生長性能無顯著影響。Cheng等（2016）研究結(jié)果同樣發(fā)現(xiàn)，玉米豆粕型日糧添加0.1%坡縷石對42 d肉雞期末體重和料重比無顯著影響，這與本試驗研究結(jié)果一致。Qiao等（2015）發(fā)現(xiàn)，日糧0.2% g/kg坡縷石可以提高蛋雞產(chǎn)蛋率，各研究結(jié)果的差異可能與試驗動物、試驗持續(xù)時間、添加劑量及坡縷石的形態(tài)有關(guān)。

3.2 日糧添加坡縷石對肉雞腸道免疫和抗氧化性能的影響 免疫應(yīng)答反應(yīng)初期，大多數(shù)免疫球蛋白屬于IgM，其具有引起免疫反應(yīng)的能量，可以溶解抗原，通過吞噬作用清除抗原進而提高免疫性能（Dibner等，1998）。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，日糧添加坡縷石可以提高腸道IgM和SIgA的含量。SIgA的主要功能是限制病原微生物和抗原進入黏膜屏障，坡縷石可以提高免疫球蛋白的分泌，其粘土成分可以調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，增加多核白細胞、血清抗體的產(chǎn)生及脾臟的吞噬功能（Islam等，2014）。SOD是機體總清除氧自由基的抗氧化酶之一，本研究結(jié)果同樣發(fā)現(xiàn)，日糧添加坡縷石可以提高腸道SOD的活性，降低肉雞肝臟脂質(zhì)過氧化，從而降低MDA含量（Wu等，2013）。

3.3 日糧添加坡縷石對肉雞腸道形態(tài)和細菌含量的影響 血清二胺氧化酶的活性可以代表腸道損傷程度及黏膜的發(fā)育情況（Li等，2002）。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，日糧添加坡縷石可以降低血清二胺氧化酶的活性，這與試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)坡縷石提高了絨毛高度及絨毛高度/隱窩深度。Qiao等（2015）研究指出，0.2%坡縷石可以提高蛋雞絨毛的完整性，這與本試驗結(jié)果一致。已有研究表明，幾種黏土在體外表現(xiàn)出抗菌活性，在體內(nèi)也發(fā)現(xiàn)粘土對動物腸道菌群組成具有調(diào)節(jié)作用（Haydel等，2008 ；Otto，2014），如降低盲腸大腸桿菌數(shù)量，提高嗜酸乳桿菌數(shù)量（Wu等，2013）。

3.4 日糧添加坡縷石對肉雞腸道相關(guān)基因mRNA表達水平的影響 腸道中主要的粘膜蛋白MUC2可以在腸道與上皮之間形成一層物理屏障（Linden等，2008）。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，日糧添加坡縷石提高了杯狀細胞的數(shù)量，而杯狀細胞的形成與MUC2和TF2的基因表達密切相關(guān)，這與坡縷石的粒徑和腸道黏膜分泌蛋白有關(guān)（Reichardt等，2009）。此外，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，坡縷石可以降低IFN基因mRNA相對表達水。González等（2014）研究報道，沸石粉可以通過降低IL的產(chǎn)生，具有抗炎作用。Wu等（2013）研究發(fā)現(xiàn)，坡縷石可以作為抗炎劑降低脂多糖誘導(dǎo)應(yīng)激的肉雞腸道滋養(yǎng)層的活化，抑制血漿和腸道炎癥介質(zhì)的分泌；腸道功能的完整性和通透性可能受到多種細胞共同調(diào)節(jié)，如腫瘤壞死因子TNF、干擾素IFN及各種白細胞介素等，這些炎癥介質(zhì)可以釋放到細胞內(nèi)，具有緊密連接蛋白和調(diào)控腸道緊密連接的功能，通過血液循環(huán)作用到腸上皮細胞，進而維持腸屏障功能的完整性，這也與IFN mRNA表達水平下調(diào)有關(guān)。

4 結(jié)論

玉米-豆粕型日糧中添加0.4%或0.8%坡縷石可以提高1～21 d肉雞腸道免疫和抗氧化性能，改善腸道屏障功能，對肉雞的生長性能無負面影響。