兩種檢測系統(tǒng)檢測CRP的可比性研究

肖利 張易

（1自貢市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 四川 自貢 643000）

（2西南醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)系 四川 瀘州 646000）

1.前言

目前，CRP的檢測方法甚多，主要有單向免疫擴(kuò)散法、乳膠凝集法、散射比濁法、透射比濁法等?？焖俣繖z測CRP在門急診得到較好的應(yīng)用，能夠給臨床醫(yī)生及時(shí)提供定量結(jié)果，為是否使用抗生素提供了依據(jù)[1]。快速CRP檢測儀具有小巧、快速、定量的特點(diǎn)，是近幾年興起的一種小型CRP檢測儀器，在臨床實(shí)驗(yàn)室中逐漸被廣泛使用。上海艾瑞德生物科技有限公司CRP快速定量檢測系統(tǒng)能夠在數(shù)分鐘內(nèi)獲得CRP定量結(jié)果，可以滿足臨床早期診斷和及時(shí)判斷療效的需要。為評估兩種不同檢測系統(tǒng)對CRP測定的一致性，本文參照美國臨床檢驗(yàn)修正法規(guī)（CLIA,88)和EP9文件，對本科室快速CRP檢測儀與日立自動生化分析儀進(jìn)行了比對試驗(yàn)。

2.材料與方法

2.1 材料

2.1.1 檢測系統(tǒng)1 日立7600-020全自動生化分析儀、德賽診斷系統(tǒng)（上海）有限公司提供C-反應(yīng)蛋白免疫透射比濁法測定試劑盒（2～8℃避光保存可穩(wěn)定24個(gè)月，開瓶上機(jī)后2～8℃穩(wěn)定30天。）及配套校準(zhǔn)品（特定蛋白校準(zhǔn)品，德賽診斷系統(tǒng)上海有限公司提供。水平1批號：19732，水平2批號：19733，水平3批號：19734，水平4批號：19735，水平5批號19736）、質(zhì)控品(倍樂特定蛋白質(zhì)控品水平2和水平3分裝后，-20℃保存，需測定時(shí)候解凍）、反應(yīng)杯；

2.1.2 檢測系統(tǒng)2 POCT自動進(jìn)片機(jī)（RP-1000）以、超敏C-反應(yīng)蛋白測定試劑盒(上海艾瑞德生物科技有限公司)檢測系統(tǒng)及其配套試劑(批號)、含不同批號試劑標(biāo)準(zhǔn)曲線的磁卡及質(zhì)控品（倍樂特定蛋白質(zhì)控品水平3）。

實(shí)驗(yàn)前完成儀器維護(hù)、校準(zhǔn)以及室內(nèi)質(zhì)控等準(zhǔn)備工作。

2.2 檢測原理

2.2.1 全自動生化分析儀檢測CRP使用免疫透射比濁法 人體CRP與相應(yīng)的抗血清在液相中反應(yīng)，生成抗原-抗體復(fù)合物，并產(chǎn)生濁度，濁度的高低與抗原含量相關(guān)，與經(jīng)過同樣處理的校準(zhǔn)液進(jìn)行比較，計(jì)算出樣品中CRP含量。

2.2.2 快速CRP檢測儀使用免疫層析法檢測 將稀釋的測試液從測試孔滴下。樣本落到樣本墊上。樣本從樣品墊留到膠體金墊（含有標(biāo)記鼠抗人超敏C-反應(yīng)蛋白單克隆抗體膠體金物質(zhì)和標(biāo)記兔IgG膠體金物質(zhì)），并滲析出抗體，到達(dá)膜，在吸水墊發(fā)生毛細(xì)現(xiàn)象。此時(shí)，樣本中若存在C-反應(yīng)蛋白，則與膠體金墊中的標(biāo)記抗人C-反應(yīng)蛋白單克隆抗體膠體金物質(zhì)形成復(fù)合體。然后與T部的（測試部位）標(biāo)記抗人C-反應(yīng)蛋白單克隆抗體膠體金物質(zhì)反應(yīng)，產(chǎn)生紅色的線。另外，不論是否存在C-反應(yīng)蛋白，膠體金墊中的標(biāo)記兔IgG膠體金物質(zhì)都會與羊抗兔IgG多克隆抗體發(fā)生反應(yīng)，在C1及C2出現(xiàn)質(zhì)控線。

2.3 標(biāo)本來源

本實(shí)驗(yàn)室自動生化分析儀檢測CRP使用的標(biāo)本是分離膠采血管采集的靜脈血血清?？焖貱RP檢測儀檢測CRP使用的標(biāo)本是EDTA抗凝采血管采集的指尖血或靜脈全血。為降低實(shí)驗(yàn)成本，簡化實(shí)驗(yàn)程序，選用患者標(biāo)本程序如下：（1）選出當(dāng)天在全自動生化分析儀上檢測過CRP的患者并做好記錄。（2）在已記錄的患者中篩選出當(dāng)天同時(shí)做過血液分析的患者為最終選定的患者。（3）找出最終選定患者的兩個(gè)標(biāo)本為實(shí)驗(yàn)所用標(biāo)本。在此次試驗(yàn)選用2017年3月在自貢市第一人民醫(yī)院就診的患者40例。參照CLSI(NCCLS)EP9-A,收集住院患者血清。收集高中低值血清做比對試驗(yàn)標(biāo)本40例。將測定范圍分為高、中、低三段。要求低段濃度占25%，中段濃度占50%、高段濃度占25%；每8個(gè)（高中低濃度各2個(gè)、4個(gè)、2個(gè)）標(biāo)定為一組。

2.4 方法

兩種檢測系統(tǒng)精密度評價(jià)變異系數(shù)(CV)值均小于7%，因檢測系統(tǒng)l日立7600-020全自動生化分析儀.精密度評價(jià)試驗(yàn)好。且參加衛(wèi)生部和四川省實(shí)驗(yàn)室質(zhì)評結(jié)果均為優(yōu)秀，故以檢測系統(tǒng)1作為目標(biāo)檢測系統(tǒng)比較方法(X)，檢測系統(tǒng)2為試驗(yàn)方法(Y)，進(jìn)行方法間CRP檢測的比較試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)前對儀器進(jìn)行常規(guī)維護(hù)和保養(yǎng)，對各檢測系統(tǒng)按常規(guī)方法進(jìn)行校準(zhǔn)和質(zhì)控，室內(nèi)質(zhì)控在控時(shí)對樣本進(jìn)行檢測。醫(yī)學(xué)決定水平對CRP濃度的分類為高值3～10mg/L中值11～30mg/L、低值30～200mg/L。標(biāo)本選擇連續(xù)測試5d，每天檢測8例，其濃度含有高、中、低等不同水平，其中高值2例、中值4例、低值2例，每例標(biāo)本檢測2次，檢測順序?yàn)椋旱?次檢測按標(biāo)本隨機(jī)編號1、2，3、4.5、6、7、8的順序，第2次檢測按編號8、7、6、5、4、3、2、1順序進(jìn)行檢測[2]。所有數(shù)據(jù)均采用excel軟件處理。

3.結(jié)果

圖1 CRP比對圖（所有值）

圖2 CRP比對圖（高值）

圖3 CRP比對圖（中值）

圖4 CRP比對圖（低值）

表1 兩種檢測系統(tǒng)檢測CRP的線性回歸分析

試驗(yàn)檢測系統(tǒng)與目標(biāo)檢測系統(tǒng)CRP結(jié)果的相關(guān)分析以目標(biāo)檢測系統(tǒng)作為X，試驗(yàn)檢測系統(tǒng)Y分別與其進(jìn)行相關(guān)與回歸分析，結(jié)果為y=1.0044X-0.0266。檢測系統(tǒng)間相關(guān)系數(shù)為0.9931，見圖1。高值部分，結(jié)果為y=1.0094X+0.0035，檢測系統(tǒng)間相關(guān)系數(shù)為0.9981，見圖2；中值部分，結(jié)果為y=0.9940X+0.0205，檢測系統(tǒng)間相關(guān)系數(shù)為0.9933，見圖3；低值部分，結(jié)果為y=1.0866X+0.0286，檢測系統(tǒng)間相關(guān)系數(shù)為0.9898,見圖4。以上數(shù)據(jù)可以得出，待評系統(tǒng)與目標(biāo)檢測系統(tǒng)具有可比性[3]。相關(guān)性由強(qiáng)到弱依次為：高值＞中值＞低值。

4.討論

CRP作為一種人體重要的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，具有諸多生物學(xué)功能，包括識別外來物質(zhì)，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，增強(qiáng)調(diào)理作用，增強(qiáng)吞噬細(xì)胞吞噬作用，與血小板激活因子（RAF)結(jié)合，降低炎癥反應(yīng)，與染色體結(jié)合，清除壞死組織里的細(xì)胞DNA。由此可見CRP的測定在感染性疾病的輔助檢查中具有至關(guān)重要的作用。若在感染早期能快速及時(shí)發(fā)現(xiàn)CRP的變化，側(cè)回為臨床診療和患者康復(fù)贏得更早的機(jī)會。近幾年來，隨著技術(shù)的發(fā)展，市面上出現(xiàn)了一些快速CRP檢測儀，并得到各實(shí)驗(yàn)室的青睞。隨即，實(shí)驗(yàn)室同時(shí)擁有至少兩個(gè)檢測系統(tǒng)檢測CRP。

快速CRP檢測儀的使用特別適應(yīng)兒科需求，用手指末梢微量全血。克服了兒童靜脈采血的困難，患兒及家長均更容易接受，且快速報(bào)告定量CRP結(jié)果，操作簡便，整個(gè)過程僅需5min，以更早地為臨床提供具有診斷價(jià)值的依據(jù)。

同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不同檢測系統(tǒng)檢測相同項(xiàng)目時(shí)，結(jié)果經(jīng)常出現(xiàn)不一致，造成臨床判斷病情困難，導(dǎo)致臨床醫(yī)生和患者對檢驗(yàn)科投訴，嚴(yán)重影響檢驗(yàn)科信譽(yù)度[4]。如何實(shí)現(xiàn)同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不同檢測系統(tǒng)檢測同一項(xiàng)目的結(jié)果具有可比性顯得尤為重要，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部，可對不同檢測系統(tǒng)檢測相同項(xiàng)目進(jìn)行定期比對試驗(yàn)。并根據(jù)比對結(jié)果進(jìn)行相應(yīng)的整改，確保不同檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果的一致性。

同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部儀器檢測相同項(xiàng)目時(shí)必須嚴(yán)格做好比對工作，目標(biāo)儀器參加室間質(zhì)評成績優(yōu)秀，通過比對的方式來驗(yàn)證新購進(jìn)儀器的準(zhǔn)確性是否滿足要求，當(dāng)兩檢測系統(tǒng)可比性滿足要求時(shí)且在室內(nèi)質(zhì)控合格的前提下可以正常運(yùn)行檢測患者標(biāo)本；如果兩檢測系統(tǒng)可比性較差，不能滿足質(zhì)目標(biāo)的要求，且會對臨床診斷產(chǎn)生不良影響時(shí)，應(yīng)該以目標(biāo)儀器為參考儀器，對試驗(yàn)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，如果由于儀器性能原因在校準(zhǔn)后依然無法達(dá)到質(zhì)量日標(biāo)的要求，應(yīng)該與廠家聯(lián)系或者拒絕使用該儀器。

本文中，上海艾瑞德快速CRP測試儀是目前興起的袖珍式儀器，具有檢測速度快、穩(wěn)定性好、占用空間小、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，雖然是半自動儀器，但室內(nèi)質(zhì)控精密度較好，能夠滿足臨床檢測要求。本文通過實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部比對分析發(fā)現(xiàn)，該儀器與日立7600-020全自動生化分析儀檢測系統(tǒng)問具有很好的可比性。本文采用EP9-A文件方法進(jìn)行比對。線性同歸方程中斜率系數(shù)r2為0.9931，截距為0.0266，表明兩種檢測系統(tǒng)間間系統(tǒng)誤差很小。

5.結(jié)論

上海艾瑞德快速CRP檢測儀與日立7600-020全自動生化分析儀在測定CRP上，兩種檢測系統(tǒng)之間具有可比性。