奶牛乳房炎早期診斷試劑盒判定標(biāo)準(zhǔn)的制定

陳偉，渠慎

摘 要：建立奶牛乳房炎早期診斷試劑盒判定標(biāo)準(zhǔn)，能夠有效確定現(xiàn)有畜牧行業(yè)內(nèi)部數(shù)據(jù)條件，并為奶牛飼養(yǎng)工作提供良好的病情判斷依據(jù)，以確保后續(xù)奶制產(chǎn)品的質(zhì)量?jī)?yōu)勢(shì)滿足市場(chǎng)環(huán)境需求，并確保奶牛健康程度具備可持續(xù)協(xié)調(diào)的前提。本文基于奶牛乳房炎早期診斷試劑盒實(shí)驗(yàn)特性展開(kāi)分析，確定有效的染色條件和體細(xì)胞數(shù)目統(tǒng)計(jì)條件，通過(guò)完善的數(shù)據(jù)關(guān)聯(lián)系統(tǒng)鞏固判定標(biāo)準(zhǔn)，為后續(xù)劃分區(qū)間的制定提供良好數(shù)據(jù)參照。

關(guān)鍵詞：奶牛乳房炎；早期診斷；試劑盒判定；標(biāo)準(zhǔn)制定

奶牛乳房炎是當(dāng)前奶牛生產(chǎn)環(huán)境中較為嚴(yán)重的疾病，不但動(dòng)搖了相關(guān)企業(yè)在現(xiàn)有市場(chǎng)中的經(jīng)濟(jì)地位，更在產(chǎn)品質(zhì)量上對(duì)食品安全造成不良影響。故而，在實(shí)際監(jiān)測(cè)工作開(kāi)展時(shí)，需要針對(duì)有效的判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行構(gòu)建，這樣才能夠確保奶牛市場(chǎng)環(huán)境穩(wěn)定，并為后續(xù)畜牧業(yè)提供完善的功能統(tǒng)籌條件。

1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

實(shí)驗(yàn)材料：奶牛乳汁、甲基綠、碘化鉀、冰醋酸、醋酸鈉、美藍(lán)染色液。

試驗(yàn)儀器：顯微鏡、滅菌管、玻片、溫箱。

2 實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果

2.1 乳樣試劑制備

在開(kāi)展乳樣采集工作中，應(yīng)當(dāng)針對(duì)牧場(chǎng)內(nèi)部奶牛進(jìn)行隨機(jī)選取，通過(guò)專用的奶牛乳頭藥浴液進(jìn)行清理，確保藥液作用滿足20～30s持續(xù)性條件下，使用一次性消毒紙巾對(duì)乳頭和基部進(jìn)行仔細(xì)擦干處理，而后在第三把奶中進(jìn)行收集，并利用滅菌管進(jìn)行承接。

2.2 顯微鏡計(jì)數(shù)方法

（1） 樣本制備。充分搖勻乳樣試劑，以便確保實(shí)際顯微鏡審查過(guò)程中具備深入分析的條件，而后使用微量加樣器針對(duì)滅菌管內(nèi)部乳汁進(jìn)行精細(xì)提取，并將乳樣滴在審查玻片中心，在通過(guò)無(wú)菌環(huán)境內(nèi)部攤涂工作后，確定實(shí)驗(yàn)觀察面積滿足1cm2面積的乳膜審查條件。（2）樣本處理。在制備好乳膜樣品之后，應(yīng)當(dāng)將其置于37°C溫箱環(huán)境內(nèi)，確保已經(jīng)干燥再利用二甲苯進(jìn)行脫脂工作，待貫徹完全便置于95%濃度的乙醇溶液環(huán)境中，固定5～10min時(shí)間便可確保觀察樣本內(nèi)部環(huán)境穩(wěn)定，具備實(shí)際染色審查的條件。（3）樣本染色。在玻片干燥處理之后，選用美蘭染色液進(jìn)行染色，確保滲透時(shí)間滿足5min，再進(jìn)行水洗，確保95%乙醇脫色數(shù)分鐘，進(jìn)行干燥處理，并展開(kāi)顯微鏡觀察。（4）觀察計(jì)數(shù)。在生物顯微鏡觀察環(huán)境中，可利用10倍目鏡展開(kāi)貫徹，確保視野環(huán)境中滿足100個(gè)細(xì)胞數(shù)，再依據(jù)實(shí)際染色條件和相應(yīng)系數(shù)進(jìn)行分析，以確保每毫升乳液中體細(xì)胞數(shù)量。

2.3 試劑盒檢測(cè)乳樣顏色變化

以移液裝置進(jìn)行奶牛乳汁樣品提取，而后再加入相對(duì)計(jì)量參數(shù)的裂解液，確保靜置時(shí)間滿足2min后，再通過(guò)甲基綠染色液進(jìn)行染色工作，經(jīng)由3min時(shí)間進(jìn)行顏色變化記錄，并確保相應(yīng)記錄條件的準(zhǔn)確性。

2.4 制定有效的判斷標(biāo)準(zhǔn)

將顯微鏡技術(shù)結(jié)果與甲基綠染色記錄相結(jié)合，針對(duì)其中奶牛乳房炎早期診斷試劑盒變化進(jìn)行比對(duì)，通過(guò)數(shù)據(jù)信息統(tǒng)一細(xì)胞數(shù)進(jìn)行結(jié)果記錄，另外將染色條件關(guān)系進(jìn)行關(guān)聯(lián)，從而依據(jù)其中功能條件確定有效的標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 顯微鏡計(jì)數(shù)與奶牛乳房炎染色變化的比對(duì)

顯微鏡計(jì)數(shù)結(jié)果與奶牛乳房炎早期診斷試劑盒顏色變化比對(duì)試驗(yàn)結(jié)果表明，體細(xì)胞數(shù)量變化區(qū)間對(duì)應(yīng)著DNA染色的顏色變化梯度，體細(xì)胞數(shù)越多，綠色越深。其中，乳樣體細(xì)胞數(shù)低于2.9×105個(gè)/mL時(shí)，對(duì)應(yīng)顯色顏色為淺藍(lán)綠色；體細(xì)胞數(shù)在3.0×105～4.9×105個(gè)/mL范圍內(nèi)時(shí)，對(duì)應(yīng)顯色顏色為淺綠色；體細(xì)胞數(shù)在5.0×105～7.9×105個(gè)/mL范圍內(nèi)時(shí)，對(duì)應(yīng)顯色顏色為淡綠色；體細(xì)胞數(shù)在8.0×105～14.9×105個(gè)/mL范圍內(nèi)時(shí)，對(duì)應(yīng)顯色顏色為綠色體細(xì)胞數(shù)在15.0×105～49.9×105個(gè)/mL范圍內(nèi)，對(duì)應(yīng)顯色顏色為深綠色；體細(xì)胞數(shù)多于50.0×105個(gè)/mL時(shí)，對(duì)應(yīng)顯色顏色為墨綠色。

3.2 判定標(biāo)準(zhǔn)的制定

“-”為陰性，淺藍(lán)綠色（體細(xì)胞數(shù)為0～2.9×105個(gè)/mL）；“±”為疑似，淺綠色（體細(xì)胞數(shù)為3.0×105～4.9×105個(gè)/mL）；“+”為弱陽(yáng)性，淡綠色（體細(xì)胞數(shù)為5.0×105～7.9×105個(gè)/mL）；“++”為陽(yáng)性，綠色（體細(xì)胞數(shù)為8.0×105～14.9×105個(gè)/mL）；“+++”為強(qiáng)陽(yáng)性，深綠色（體細(xì)胞數(shù)為15.0×105-49.9×105個(gè)/mL）；“++++”為極強(qiáng)陽(yáng)性，墨綠色（體細(xì)胞數(shù)多于50×105個(gè)/mL）。具體參見(jiàn)表1。

4 實(shí)驗(yàn)分析結(jié)論

4.1 奶牛乳房炎早期診斷試劑盒判斷標(biāo)準(zhǔn)，是以目前檢測(cè)奶牛是否患有乳房炎最為準(zhǔn)確的顯微鏡直接計(jì)數(shù)法為設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)，對(duì)同一樣品同時(shí)用顯微鏡計(jì)數(shù)法和早期診斷試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，比較體細(xì)胞數(shù)目多少和試劑盒染色深淺變化關(guān)系，確定早期診斷試劑盒的反應(yīng)范圍，從而制定出早期診斷試劑盒的判定標(biāo)準(zhǔn)。

4.2 本試驗(yàn)中，診斷試劑盒的顏色變化隨著體細(xì)胞數(shù)量的變化而變化，而且呈正相關(guān)，隨著乳汁中體細(xì)胞數(shù)量的增多，診斷試劑盒的顏色越變?cè)缴?，符合?guī)律性變化。

4.3 本試驗(yàn)制定的奶牛乳房炎早期診斷試劑盒判斷標(biāo)準(zhǔn)是按照國(guó)際上通用的乳汁中體細(xì)胞數(shù)變化范圍對(duì)應(yīng)試劑盒的顏色變化程度而確定，其判斷標(biāo)準(zhǔn)符合奶牛乳房炎的發(fā)生程度，與我國(guó)及國(guó)際對(duì)奶牛乳房炎的判斷一致，符合奶牛乳房炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)斷標(biāo)準(zhǔn)，是以目前檢測(cè)奶牛是否志有乳房炎最為準(zhǔn)確的顯微鏡細(xì)胞計(jì)數(shù)法為設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)，以染色顏色深淺與體細(xì)胞中DNA含量多少成正比、DNA含量多少與體細(xì)胞數(shù)量成正比的數(shù)量關(guān)系做對(duì)比，制定的奶牛乳房炎早期診斷試劑盒判定標(biāo)準(zhǔn)。判定標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)確、劃分區(qū)間細(xì)致，能夠以明確的顏色變化準(zhǔn)確快速判別奶牛乳房炎發(fā)生的程度。

該試劑盒判定結(jié)果準(zhǔn)確反映體細(xì)胞數(shù)量變化區(qū)間，能夠快速判定出奶牛乳房炎發(fā)生的程度。其標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范、操作簡(jiǎn)便，判定迅速準(zhǔn)確，便于攜帶和現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用，為判定乳汁中體細(xì)胞數(shù)目、DNA數(shù)量及食品安全行業(yè)提供了一種經(jīng)濟(jì)、便捷、有效、現(xiàn)場(chǎng)、適時(shí)、及時(shí)的檢測(cè)手段。適用于養(yǎng)殖場(chǎng)自主大規(guī)模批量檢測(cè)篩查，也適用于平時(shí)對(duì)疑似隱性乳房炎奶牛隨時(shí)判定。比對(duì)目前判斷奶牛乳房炎結(jié)果最為準(zhǔn)確的體細(xì)胞計(jì)數(shù)法，該試劑盒顯色正確指示了體細(xì)胞數(shù)量變化關(guān)系，進(jìn)而對(duì)應(yīng)判斷出奶牛的健康情況。同時(shí)它還規(guī)避了體細(xì)胞計(jì)數(shù)法（SCC）、PCR檢測(cè)法和乳汁電導(dǎo)率檢測(cè)法需要在實(shí)驗(yàn)室中檢測(cè)的局限性，也規(guī)避了乳汁PH值檢測(cè)法和乳汁電導(dǎo)率檢測(cè)法的不準(zhǔn)確性。

5 結(jié)束語(yǔ)

奶牛乳房炎早期診斷試劑盒判斷標(biāo)準(zhǔn)的有效制定能夠確保整體奶牛功能體系環(huán)境中具備有效審查的條件，并基于食品健康安全提供了更加豐富識(shí)別方法，并依據(jù)相應(yīng)判斷數(shù)據(jù)強(qiáng)弱，提供有效的治療條件，這樣才能夠確保在后續(xù)企業(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展環(huán)境中，具備可持續(xù)延伸的條件，并能夠?qū)⒆陨斫?jīng)濟(jì)財(cái)產(chǎn)損失有效降低。故而，在落實(shí)奶牛乳房炎判斷標(biāo)準(zhǔn)過(guò)程中，應(yīng)當(dāng)基于功能環(huán)境確定檢測(cè)條件，這樣才能夠應(yīng)用到更加廣泛的檢測(cè)環(huán)境中，并為畜牧產(chǎn)業(yè)質(zhì)量提升埋下扎實(shí)基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[1]周慶民，徐馨，馮萬(wàn)宇，等.奶牛乳房炎早期診斷試劑盒判定標(biāo)準(zhǔn)的制定[J].中國(guó)乳業(yè)，2017（7）：49-51.

[2]周慶民，徐馨，馮萬(wàn)宇，等.奶牛乳房炎早期診斷試劑盒的制備及穩(wěn)定性評(píng)價(jià)[J].中國(guó)乳業(yè)，2018（1）.

[3]劉思當(dāng)，程子龍，劉朋，等.一種隱性乳房炎試劑盒：，CN106248954A[P].2016.

[4]李佳，李亞娟，胡俊菁，等.奶牛乳房炎主要致病菌DNA不同提取方法的比較[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2017（2）：40-41.