非洲獅肝內(nèi)膽管癌的病理形態(tài)學(xué)研究

邱波劉青仉偉英永王鳳乾張海靜胡建廷

(1.山東省藥學(xué)科學(xué)院，濟(jì)南，250101；2.濟(jì)南動物園管理處，濟(jì)南，250031)

肝內(nèi)膽管癌(ICC)屬于肝癌的范疇，是指左右肝管匯合部以上的膽管上皮細(xì)胞起源的惡性腫瘤，也稱膽管細(xì)胞癌或外周型膽管癌，預(yù)后較差。ICC是僅次于肝細(xì)胞肝癌(HCC)的原發(fā)性肝臟惡性腫瘤，占原發(fā)性肝癌的5%[1]。與肝外膽管癌不同，肝內(nèi)膽管癌早期無明顯臨床癥狀，患者就診時往往已處于晚期[2]。目前人們已經(jīng)建立了多種實(shí)驗(yàn)動物模型來研究肝內(nèi)膽管癌并積累了相關(guān)的病例資料[3-9]，但對于野生動物來說，肝內(nèi)膽管癌的病例較為罕見，對其缺乏足夠的了解。本研究將對來自濟(jì)南某動物園的一例自發(fā)性非洲獅(Pantheraleo)肝內(nèi)膽管癌為研究對象，通過肉眼形態(tài)學(xué)及組織病理學(xué)觀察，對該病例進(jìn)行初步的病理形態(tài)學(xué)探討。

1 背景資料

1.1 個體資料

非洲獅，雌性，8歲，性情機(jī)警，易暴躁，曾繁殖1胎，未成活。

1.2 既往病史

該獅于2017年4月28 ～30日出現(xiàn)一過性食欲下降、嘔吐，精神狀態(tài)差等癥狀，口服消炎健胃藥物后康復(fù)。2017年6月8日該獅出現(xiàn)嘔吐、不食等癥狀，根據(jù)情況先后調(diào)整飼料配比，吹管注射藥物治療3 d，同時配合口服助消化藥物，效果明顯，精神食欲好轉(zhuǎn)，恢復(fù)正常。

1.3 此次發(fā)病及治療

2017年7月以來，該獅外放時經(jīng)常趴臥于內(nèi)舍與外活動場之間的假山洞口，活動減少，并出現(xiàn)不食，嘔吐等癥狀。糞便含有草團(tuán)及毛發(fā)，取糞便化驗(yàn)可見有少量炎性細(xì)胞，未見寄生蟲。經(jīng)培養(yǎng)并作藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)對頭孢曲松、頭孢噻肟、慶大霉素敏感。根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果吹注抗菌藥物頭孢曲松鈉和促進(jìn)胃腸動力藥物胃復(fù)安、維生素B1。同時飲水中添加葡萄糖、口服補(bǔ)液鹽和香油；投喂活食時只見咬死并不食。經(jīng)過上述治療未見明顯效果，遂決定串籠至壓縮籠內(nèi)采血化驗(yàn)、腹部B超檢查，輸液治療。血常規(guī)、血生化結(jié)果顯示白細(xì)胞升高，心臟、肝臟、腎臟、胰臟功能異常。B超檢查顯示肝臟、胃底、膀胱有占位病變，腹腔腸腔有大量液性暗區(qū)。

根據(jù)檢查結(jié)果對癥治療：(1)糾正水、電解質(zhì)、酸堿紊亂：乳酸林格氏液、葡萄糖酸鈣、氯化鉀、小蘇打；(2)補(bǔ)充能量：氨基酸3AA，20%白蛋白、輔酶A、ATP、維生素B6、維生素C；(3)抗菌消炎：5%葡萄糖氯化鈉、頭孢曲松鈉、地塞米松；(4)抑酸解痙保護(hù)胃黏膜：奧美拉唑注射液、鹽酸消旋山莨菪堿；(5)強(qiáng)心保肝護(hù)腎：去乙酰毛花苷注射液、復(fù)方甘草酸銨注射液。連續(xù)治療5 d后狀態(tài)有所好轉(zhuǎn)，為避免造成更大應(yīng)激，轉(zhuǎn)出治療籠放置于過廊增加活動空間，同時繼續(xù)口服藥物。該獅在治療期間未見主動采食，每天人工投喂塞食，精神狀態(tài)逐漸變差，數(shù)次進(jìn)行血液、尿液、糞便的化驗(yàn)，結(jié)果顯示肝臟、腎臟功能進(jìn)一步下降，終因病情嚴(yán)重于2017年8月5日死亡。

2 方法

通過肉眼形態(tài)學(xué)及組織病理學(xué)觀察，對該病例進(jìn)行初步的病理形態(tài)學(xué)探討。死亡的非洲獅立即進(jìn)行大體解剖并記錄肉眼觀察異常的組織臟器改變。所取組織均保存于甲醛溶液中并進(jìn)行常規(guī)取材、脫水、石蠟包埋、切片(厚3～5μm)、HE染色，光鏡下進(jìn)行組織病理學(xué)觀察。

3 結(jié)果

3.1 肉眼形態(tài)學(xué)

3.1.1 外觀檢查

形體消瘦，體毛脫落。體重98 kg，體長139 cm，頭縱徑33 cm，橫徑28 cm，前肢長95 cm，后肢長118 cm，尾長91 cm。口腔黏膜及皮下脂肪及結(jié)締組織黃染(圖1A)。

圖1 非洲獅肉眼形態(tài)學(xué)觀察Fig.1 The gross morphology of African lion

3.1.2 剖檢檢查

消化系統(tǒng)：肝臟土黃色，表面及實(shí)質(zhì)布滿大小不一的白色結(jié)節(jié)，小者如黃豆大小，大者呈菜花狀，質(zhì)地較硬，占據(jù)整個肝葉(圖1 E、F 箭頭所示)，部分肝葉與附近組織(膈肌、腸管及腸系膜)黏連，腹腔內(nèi)含淡黃色，渾濁的腹水(圖1 C 箭頭所示)。膈肌漿膜面布滿煎雞蛋樣大小不等的白色結(jié)節(jié)，質(zhì)地較硬(圖1 B 箭頭所示)；脾臟腫大，瘀血呈深褐色，表面及實(shí)質(zhì)有大小不等的白色結(jié)節(jié)(圖1 G 箭頭所示)，脾臟前端壞死，白色結(jié)節(jié)已于實(shí)質(zhì)融合(圖1 H 三角形所示)；胃體底部靠近幽門漿膜肌層有數(shù)個大小不一腫瘤(圖1 D 箭頭所示)，胃內(nèi)空虛，黏膜大部分變黑，壞死，幽門及十二指腸內(nèi)有少許散在毛團(tuán)；胰臟與十二指腸被腫瘤包裹融合為一體(圖1 D)；腸系膜及結(jié)腸、直腸腸管漿膜肌層布滿大小不一腫瘤結(jié)節(jié)(圖1 I 箭頭所示)，結(jié)腸、直腸內(nèi)有少許宿便。

泌尿系統(tǒng)：腎臟被膜不易剝離，右腎切開后有積水約20 mL，左腎皮髓質(zhì)界限模糊不清。

呼吸系統(tǒng)：氣管內(nèi)有泡沫狀液體，肺臟質(zhì)地柔軟，有黑褐色色素沉著，切面流出白色泡沫狀液體。

心血管系統(tǒng)：心肌柔軟，內(nèi)外膜光滑，心耳充血。

3.2 組織病理學(xué)

圖2 A：肝臟：肉眼為白色結(jié)節(jié)的鏡下表現(xiàn)，呈圓灶性分布(箭頭所示)。(HE，標(biāo)尺=100 μm，20×)。

圖2 B：肝臟：結(jié)節(jié)內(nèi)腺體樣結(jié)構(gòu)呈乳頭狀(箭頭所示)。(HE，標(biāo)尺=100 μm，100×)。

圖2 C：肝臟：腺體樣結(jié)構(gòu)放大，腺體樣結(jié)構(gòu)上皮細(xì)胞大小不一，核異型性且具有病理性核分裂相(箭頭所示)并擠壓周圍的肝組織(三角形所示)。(HE，標(biāo)尺=100 μm，200×)。

圖2 D：肝臟：肉眼為白色結(jié)節(jié)的另一鏡下表現(xiàn)，呈圓灶性分布(箭頭所示)。(HE，標(biāo)尺=100 μm，20×)。

圖2 E：肝臟：腺體樣結(jié)構(gòu)內(nèi)黃色似膽汁樣物質(zhì)(箭頭所示)。(HE，標(biāo)尺=100 μm，100×)。

圖2 F：肝臟：腺體樣結(jié)構(gòu)內(nèi)脫落的上皮細(xì)胞(圈線所示)。(HE，標(biāo)尺=100 μm，200×)。

圖2 G：脾臟：瘀血(五角星所示)，轉(zhuǎn)移的腺體樣結(jié)構(gòu)(箭頭所示)，還可見組織壞死(三角形所示)。(HE，標(biāo)尺=100 μm，20×)。

圖2 H：脾臟：轉(zhuǎn)移的腺體樣結(jié)構(gòu)(三角形所示)，組織壞死(箭頭所示)。圖2G的放大。(HE，標(biāo)尺=100 μm，100×)。

圖2 I：脾臟：轉(zhuǎn)移的腺體樣結(jié)構(gòu)，腺體樣結(jié)構(gòu)上皮細(xì)胞大小不一，核異型性(箭頭所示)。(HE，標(biāo)尺=100 μm，200×)。

圖2 J：脾臟：腺體樣結(jié)構(gòu)上皮細(xì)胞大小不一，核異型性且具有病理性核分裂相(箭頭所示)。(HE，標(biāo)尺=100 μm，400×)。圖2 I的放大。

圖2 K：脾臟：轉(zhuǎn)移的肉眼為白色結(jié)節(jié)的鏡下表現(xiàn)，呈圓灶性分布(三角形所示)。(HE，標(biāo)尺=100 μm，40×)。

圖2 L：脾臟：白色結(jié)節(jié)的放大倍數(shù)可見腺體樣結(jié)構(gòu)(箭頭所示)。(HE，標(biāo)尺=100μm，100×)。

圖2 M：脾臟：腺體樣結(jié)構(gòu)上皮細(xì)胞大小不一，核異型性且具有病理性核分裂相(箭頭所示)。(HE，標(biāo)尺=100 μm，400×)。圖2 L的放大。

圖2 非洲獅組織病理學(xué)觀察Fig.2 The histopathological observation of African lion

圖2 N：膈?。恨D(zhuǎn)移的肉眼為煎雞蛋樣白色結(jié)節(jié)內(nèi)的腺體樣結(jié)構(gòu)(箭頭所示)。(HE，標(biāo)尺=100 μm，40×)。

圖2 O：膈?。合袤w樣結(jié)構(gòu)上皮細(xì)胞大小不一，核異型性(箭頭所示)。(HE，標(biāo)尺=100 μm，400×)。圖2 N的放大。

圖2 P：胃漿膜肌層：漿膜肌層內(nèi)的腺體樣結(jié)構(gòu)(箭頭所示)。(HE，標(biāo)尺=100 μm，40×)。

圖2 Q：胃漿膜肌層：腺體樣結(jié)構(gòu)上皮細(xì)胞大小不一，核異型性(箭頭所示)。(HE，標(biāo)尺=100 μm，400×)。圖2 P的放大。

圖2 R：肺臟：間質(zhì)內(nèi)可見含有色素沉著的異物組織(箭頭所示)。(HE，標(biāo)尺=100 μm，200×)

4 討論

肝內(nèi)膽管癌是指起源于肝內(nèi)膽管上皮的惡性腫瘤。與肝外膽管癌不同，ICC早期缺乏黃疸等特異性癥狀，且生長速度相對較快，故ICC早期診斷困難[10]。雖然，目前肝內(nèi)膽管癌模型主要集中于誘發(fā)模型和異位移植模型的建立，但是這種由多類化學(xué)藥物誘發(fā)的模型不能完全模擬人膽管癌的自然發(fā)病過程，誘發(fā)時間周期較長，而且同時誘發(fā)了肝臟、胃、胰腺、胸腺、甲狀旁腺和血液系統(tǒng)等其他類型的腫瘤。異位移植模型中膽管癌的生長環(huán)境又與人肝內(nèi)膽管癌的生長環(huán)境迥然不同，必然會對模型中膽管癌的生物學(xué)特性產(chǎn)生影響。因此，到目前為止，仍缺乏一個理想的肝內(nèi)膽管癌動物模型，給研究肝內(nèi)膽管癌帶來了一定的困難。而本研究中非洲獅的自發(fā)性病例更好地模擬人肝內(nèi)膽管癌的自然發(fā)病過程及生長環(huán)境，為研究人類肝內(nèi)膽管癌帶來一定的背景資料。

實(shí)驗(yàn)動物的膽管腫瘤往往通過大體形態(tài)學(xué)觀察就可發(fā)現(xiàn)。它們一般表現(xiàn)為多個硬度不一的白色結(jié)節(jié)。膽管腫瘤獨(dú)特的光澤和通常情況下的堅(jiān)硬程度使其在大體觀察時很容易與其他原發(fā)性肝臟腫瘤區(qū)分[11]。結(jié)合本病例的肉眼形態(tài)學(xué)觀察，該患病動物肝臟表面及實(shí)質(zhì)布滿大小不一的白色結(jié)節(jié)，小者如黃豆大小，大者呈菜花狀，質(zhì)地較硬；因此可初步與其他原發(fā)性肝臟腫瘤相區(qū)分。另外，經(jīng)組織病理學(xué)觀察，肝組織結(jié)節(jié)內(nèi)可見適量的膠原結(jié)締組織基質(zhì)包繞著腺體樣結(jié)構(gòu)的腫瘤細(xì)胞，該腫瘤細(xì)胞大小不一，核異型性且具有病理性核分裂相，其形狀和大小都不規(guī)則，呈砥柱狀外觀。腺體樣結(jié)構(gòu)內(nèi)可見脫落的腫瘤細(xì)胞及染為黃染的物質(zhì)，只有極少的甚至沒有黏液。綜合分析，可初步診斷該病例為膽管腫瘤中的肝內(nèi)膽管癌，腫瘤細(xì)胞來源于肝內(nèi)膽管上皮。又因肉眼觀察該患病動物膽囊充盈，口腔黏膜及皮下脂肪及結(jié)締組織黃染，推測可能因膽管上皮腫瘤細(xì)胞增生引起膽汁淤積所致。但是，欲將一個原發(fā)性膽管腫瘤與從其他部位轉(zhuǎn)移來的上皮性腫瘤區(qū)分開是比較困難的。為了更好地區(qū)分從其他部位轉(zhuǎn)移來的上皮性腫瘤，我們對其他臟器進(jìn)行了組織病理學(xué)觀察。結(jié)果顯示膈肌、脾臟、胃、腸系膜組織內(nèi)呈彌漫性分布的呈腺體樣的結(jié)構(gòu)的腫瘤組織，該腺體樣結(jié)構(gòu)與肝組織的腺體樣結(jié)構(gòu)一樣，進(jìn)一步證實(shí)了該腫瘤細(xì)胞來源于肝內(nèi)的膽管上皮。因此，可初步確診該病例為原發(fā)性的肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌。