北芪五加顆粒對仔豬豬瘟疫苗免疫應答及生長發(fā)育影響

趙留濤 ，袁之潤 ，吳洪銀 ，吳冠連 ，吳春麗

（1.商丘愛己愛牧生物科技股份有限公司，河南虞城476300；2.鄭州愛己愛牧生物技術(shù)有限公司，河南鄭州450001；3.鄭州大學藥學院，河南鄭州450001）

北芪五加顆粒為黃芪和刺五加混合提取物配制而成中藥復方制劑，文獻報道黃芪和刺五加均具有增強免疫的功效[1,2]。同時，試驗研究證明黃芪刺五加合劑能提高免疫抑制小鼠的TNF、NK細胞殺傷活性及IL-2水平[3]。本試驗以健康仔豬為試驗動物，通過檢測豬瘟抗體效價和血清中IL-2、IFN-γ含量，觀察北芪五加顆粒對仔豬豬瘟疫苗免疫應答的影響，評價其免疫增強作用。通過臨床試驗，進一步考察該藥的療效和毒副反應，為該藥的大規(guī)模生產(chǎn)及應用提供合理、科學的臨床試驗數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 試驗豬選用100仔豬，由河北省晉州市利杰原種豬場提供，豬只健康狀況良好。

1.1.2 試驗藥品和試劑 北芪五加顆粒(每1g含生藥1g)，商丘愛己愛牧生物科技股份有限公司提供，試制批號：20110203；黃芪多糖粉，北京生泰爾生物科技有限公司，生產(chǎn)批號：20111123；豬瘟疫苗，廣東永順生物制藥有限公司，生產(chǎn)批號：2011046：豬瘟正向血凝診斷抗原、陽性血清、陰性血清及稀釋液由中國農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所提供， 批號分別為 20121009、20121003和20121003；豬血清IL-2 ELISA檢測試劑盒，天津索羅門生物科技有限公司；豬瘟血清IFN-γ ELISA檢測試劑盒，天津索羅門生物科技有限公司。

1.1.3 主要儀器設備 酶標儀（RT 2100C），美國雷杜公司；電子天平（MR200A），上海第二天平儀器廠。

1.2 方法

1.2.1 試驗分組及處理 將體重相近、健康仔豬100頭，隨機分為5組：試驗組北芪五加顆粒（高、中、低）三個劑量組、黃芪多糖對照組和空白對照組，每組20頭。試驗分組及處理詳見表1。試驗組于平均31日齡（免疫前3天）開始，北芪五加顆粒按高、中、低三個劑量（8g/kg、4g/kg、2g/kg?飼料）拌料添加1周；黃芪多糖對照組同時段拌料添加黃芪多糖200mg/kg；空白對照組不添加任何藥物。平均日齡34天用1頭份劑量進行豬瘟疫苗首免，于平均日齡65天用1頭份劑量進行豬瘟疫苗二免。并分別于平均日齡34天 、48天和60天稱量各豬只體重，計算料重比；靜脈采血5 mL，分離血清，備用。

1.2.2 測定指標及方法 豬瘟抗體效價檢測：分別于平均34日齡 、48日齡和60日齡試驗豬靜脈采血5 mL，析出血清，采用正向間接血凝試驗檢測豬瘟抗體水平。血清中IL-2和IFN-γ含量的檢測：對34日齡 、48日齡和60日齡試驗豬靜脈采血制備的血清，用ELISA試劑盒檢測IL-2和IFN-γ的含量。生長性能測定：34日齡和60日齡時分別稱重，計算出初始平均體重、結(jié)束時的平均體重和平均增重；逐日逐欄稱量記錄飼料消耗量，計算飼料報酬（料重比）。料重比=飼養(yǎng)期內(nèi)所耗標準飼料量（kg）/同期增重（kg）。

1.2.3 數(shù)據(jù)分析 采用獨立性檢驗法對試驗豬在免疫前及首免后豬瘟抗體效價、血清中IL-2和IFN-γ含量進行差異顯著性檢驗。采用方差分析法對試驗豬的增重、飼料報酬進行統(tǒng)計分析。

表1 試驗分組

2 結(jié)果

2.1 北芪五加顆粒對仔豬豬瘟疫苗免疫應答的影響

34日齡，各組豬瘟抗體水平相近，差異不顯著（p＞0.05）。48日齡，豬瘟抗體水平，北芪五加顆粒高劑量組和中劑量組顯著高于北芪五加顆粒低劑量組組和空白對照組，差異顯著（p＜0.05）。60日齡，豬瘟抗體水平，北芪五加顆粒高劑量組和中劑量組顯著高于北芪五加顆粒低劑量組組和空白對照組，差異顯著（p＜0.05 或 p＜0.01）；黃芪多糖組組高于空白對照組，差異顯著（p＜0.05）。結(jié)果詳見表2。

表2 各組免疫抗體檢測結(jié)果

2.2 北芪五加顆粒對仔豬血清IL-2和IFN-γ含量的影響

34日齡，各組仔豬血清IL-2和IFN-γ含量水平相近，差異不顯著（p＞0.05）。 48日齡，血清IL-2含量，北芪五加顆粒高劑量組和中劑量組顯著高于空白對照組，差異顯著(p＜0.05)；其他各組，差異不顯著（p＞0.05）。血清IFN-γ含量，北芪五加顆粒高劑量組和中劑量組顯著高于空白對照組，差異顯著（p＜0.05）；黃芪多糖組和其它各組相比較，差異均不顯著（p＞0.05）。60日齡，血清 IL-2 含量，A組和B組顯著高于C組和E組，差異極顯著（p＜0.01）。血清 IFN-γ含量，北芪五加顆粒高劑量組和中劑量組顯著高于北芪五加顆粒低劑量組組和空白對照組且差異極顯著（p＜0.01），黃芪多糖組和其它各組相比較差異均不顯著 （p＞0.05）。結(jié)果詳見表3和表4。

表3 北芪五加顆粒對IL-2含量的影響（單位：pg/ml）

表4 北芪五加顆粒對IFN-γ含量的影響（單位：pg/ml）

2.3 北芪五加顆粒對仔豬生長性能及飼料利用的影響

34日齡各組仔豬平均體重相近，差異不顯著（p＞0.05）。60日齡平均體重和試驗期平均增重，北芪五加顆粒高劑量組和中劑量組顯著高于北芪五加顆粒低劑量組組和空白對照組，差異顯著（p＜0.05）；黃芪多糖組與其它各組相比，無顯著差異（p＞0.05）。北芪五加顆粒高劑量組和中劑量組的料重比低于黃芪多糖組，差異顯著 （p＜0.05）；黃芪多糖組低于北芪五加顆粒低劑量組和空白對照組，差異顯著（p＜0.05）。料重比北芪五加顆粒高劑量組和中劑量組低于黃芪多糖組，差異顯著（p＜0.05）；黃芪多糖組低于北芪五加顆粒低劑量組和空白對照組，差異顯著（p＜0.05）。試驗表明，添加北芪五加顆粒高、中劑量組能促進仔豬的生長發(fā)育，降低料重比。結(jié)果詳見表5。

表5 對仔豬生長性能的影響

3 討論

現(xiàn)代藥理學研究表明，黃芪含有皂苷類、多糖、氨基酸及微量元素等多種有效成分，其中黃酮類、皂苷類和氨基酸類對抗疲勞有增強作用；黃酮類和皂苷類對抗炎有增強作用；多糖類、皂苷類和氨基酸類對補氣有增強作用[4-6]。近年來，黃芪作為免疫增強劑的作用日益受到人們的重視[7-8]。刺五加含有多種苷類、多糖、黃酮等藥理成分，此外還含多種微量元素及氨基酸等[9-10]。刺五加可增強機體非特異性防御能力，除具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗衰老、抗疲勞、抗輻射損傷作用[11-12]。關于刺五加的藥理作用和應用研究，從目前文獻報道來看主要圍繞人類疾病的預防和治療等方面，在畜牧生產(chǎn)領域，刺五加用于豬、雛雞、魚及綿羊等動物的生長性能研究，試驗證明刺五加也具有提高機體抗應激能力的作用。試驗表明，黃芪刺五加合用使上述兩藥的功能加強，提高了機體的免疫功能，促使仔豬豬瘟疫苗抗體的產(chǎn)生，這與劉東風[13]研究結(jié)果一致。此次試驗表明，北芪五加顆粒高、中劑量能促進仔豬的生長發(fā)育、提高血清中IL-2、IFN-γ含量和豬瘟抗體水平，且高、中劑量組之間差異不顯著。

4 結(jié)論

北芪五加顆粒對仔豬具有增強機體免疫功能和促進仔豬生長發(fā)育作用，拌料，推薦劑量為：每公斤飼料加入4g北芪五加顆粒，連續(xù)用藥7天。