LC-MS/MS測定蜜餞中4種人工合成染料的方法研究

◎ 王圣開，熊有明，姜登軍，閻 睿，譚美齡，付 鵬，吳秋杰，何 俊

（重慶市萬州食品藥品檢驗(yàn)所，重慶 404000）

蜜餞作為一種果蔬制品而深受人們的喜愛，其主要消費(fèi)人群為青少年和兒童。近年來，蜜餞行業(yè)在呈現(xiàn)高速發(fā)展態(tài)勢的同時(shí)，安全隱患也隨之與日俱增。其中，羅丹明B、酸性嫩黃G、堿性嫩黃O、堿性橙2為衛(wèi)生部公布的可能添加到食品中的人工合成染料，主要用于家具、紙張、紡織品等工業(yè)品染色，有致癌、致畸、致突變性，食用后會對人體健康產(chǎn)生嚴(yán)重危害。因其染色后有色澤穩(wěn)定、鮮艷的特點(diǎn)，雖明令禁止，仍會被部分不法商人非法添加至蜜餞等食品中。而食品安全抽驗(yàn)細(xì)則對蜜餞主要集中于檸檬黃等8種人工合成色素檢測，沒有明確對羅丹明B等4種人工合成染料的檢測，也無相應(yīng)的檢測方法標(biāo)準(zhǔn)。QuEChERS萃取凈化在食品中化工染料的檢測應(yīng)用較少，本方法采用QuEChERS萃取凈化技術(shù)檢測蜜餞中堿性嫩黃O、堿性橙2、酸性嫩黃G和羅丹明B 4種人工合成染料，為蜜餞中4種人工合成染料檢測提供技術(shù)保障。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

市售蜜餞。

1.2 儀器與試劑

AB QTRAP 4500超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Sciex公司產(chǎn)品，配有Agilent 1260超高效液相色譜儀及電噴霧離子源）；Milli-Q超純水器；IKA T25均質(zhì)器；IKMS3漩渦混合器；KQ-800DE型數(shù)控超聲波清洗器；高速冷凍離心機(jī)。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：堿性嫩黃O（中國食品藥品檢定研究院）；堿性橙2（Stanford Chemicals公司產(chǎn)品，純度：99.60%）；酸性嫩黃G（Dr Ehrenstorfer GmbH公司產(chǎn)品，純度：95.7%）；羅丹明B（Stanford Chemicals公司產(chǎn)品，純度：99.03%）；乙腈、甲醇和冰乙酸為色譜純，丙酮、氯化鈉、PSA和硫酸鎂以及實(shí)驗(yàn)所用其他試劑為分析純。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理

稱取2 g樣品于50 mL離心管中，加入10 mL水，渦旋振蕩1 min，分散均勻，再加入10 mL乙腈丙酮（1∶1）溶液渦旋振蕩1 min，超聲20 min，超聲完畢后加入2 g氯化鈉，渦旋振蕩1 min，4000 r /min離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中，殘?jiān)屑尤?0 mL提取液再次提取。合并兩次提取液定容至20 mL。取合并后的溶液3 mL于PSA+MgSO4（100 mg+100 mg）凈化，上清液過0.22 μm濾膜至進(jìn)樣瓶，進(jìn)行超高效液相質(zhì)譜分析。

1.3.2 色譜條件

ZORBAX SB-C182.1×100 mm 1.8μm 色譜柱；流動相A為甲醇、B為超純水，流速：0.2 mL/min，柱溫：40 ℃，進(jìn)樣體積：5 μL，梯度洗脫見表1。

表1 色譜梯度洗脫條件表

1.3.3 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：正負(fù)離子同時(shí)切換掃描；檢測方式：MRM 模式；電噴霧電壓：5500 V、-4500 V；干燥氣：N2；霧化氣50 units；霧化器蒸發(fā)溫度：550 ℃；質(zhì)譜分析參數(shù)見表2。

表2 MRM監(jiān)測離子對及碰撞能量等參數(shù)設(shè)定表

2 結(jié)果與分析

2.1 不同樣品前處理

試驗(yàn)中比較了QuEChERS萃取凈化、WAX、HLB固相萃取柱萃取凈化方法。結(jié)果顯示，凈化柱萃取凈化在蜜餞樣品處理過程回收率較低，采用QuEChERS萃取凈化的方法，具有處理時(shí)間快，回收率高的特點(diǎn)，故本文QuEChERS萃取凈化的方法進(jìn)行樣品處理。

2.2 線性范圍和檢出限

分別配制4種人工合成染料濃度為0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 μg/L和10.0 μg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行上機(jī)檢測，混合標(biāo)準(zhǔn)溶液MRM色譜圖見圖1。以峰面積與標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度做線性回歸方程。堿性嫩黃O、堿性橙2、羅丹明B和酸性嫩黃G的線性方程分別為y=1035 721x-6736、y=598 327x- 37x-、y=582 743x- 73x-和y=257 021x- 21x，相關(guān)系數(shù)R2均為0.999。在空白蜜餞樣品中添加4種人工合成染料標(biāo)準(zhǔn)溶液，提取凈化后進(jìn)行測定，以信噪比（S/N）為3確定方法的檢出限，堿性嫩黃O、堿性橙2和酸性嫩黃G的檢出限為2.0 μg/kg，羅丹明B檢出限為1.0 μg/kg。

圖14 種人工合成染料混合標(biāo)準(zhǔn)溶液MRM色譜圖

2.3 回收率和精密度

在空白蜜餞基質(zhì)中添加4種人工合成染料的標(biāo)準(zhǔn)溶液，羅丹明B添加量為20 ng，堿性嫩黃O、堿性橙2和酸性嫩黃G的添加量均為40 ng。每一加標(biāo)量進(jìn)行3個(gè)平行試驗(yàn)，以平均值計(jì)算，結(jié)果見表3。由表3可以看出，方法的回收率在75.4%～106.1%，低濃度時(shí)回收率偏低，中高濃度點(diǎn)回收率較好；堿性嫩黃O、堿性橙2和羅丹明B的回收率較好，酸性嫩黃G的回收率較低。

表3 蜜餞中4種人工合成染料加標(biāo)回收率表

3 結(jié)論

本研究建立了QuEChERS萃取凈化方法進(jìn)行樣品處理，采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）定性定量分析食品中非法添加的堿性嫩黃O、堿性橙2和酸性嫩黃G、羅丹明B工業(yè)合成染料。較其他固相萃取柱凈化方法，本方法大大簡化了前處理，前處理方法簡單；通過正負(fù)離子切換同時(shí)掃描測定，速度快、準(zhǔn)確可靠、靈敏度高。該方法回收和穩(wěn)定性良好，實(shí)現(xiàn)了液質(zhì)對蜜餞中4種工業(yè)染料的快速測定。