鹽酸萬(wàn)古霉素產(chǎn)品質(zhì)量與貯存環(huán)境的相關(guān)性研究

劉春艷

摘 要：本文采用高效液相法研究貯存環(huán)境對(duì)鹽酸萬(wàn)古霉素原料的質(zhì)量影響。方法：采用奧泰公司C18色譜柱（284mm×4.6mm，5μm），三乙胺緩沖液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值為3.2）-乙腈-四氫呋喃（92∶7∶1）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。鹽酸萬(wàn)古霉素在0.017～1.7mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.99995）。鹽酸萬(wàn)古霉素平均回收率分別為98.9%。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于鹽酸萬(wàn)古霉素原料的產(chǎn)品質(zhì)量研究。

關(guān)鍵詞：鹽酸萬(wàn)古霉素原料；質(zhì)量；研究

萬(wàn)古霉素是一種糖肽類抗生素。鹽酸萬(wàn)古霉素為萬(wàn)古霉素鹽酸鹽。鹽酸萬(wàn)古霉素用于耐甲氧西林金黃色葡萄球菌及其它細(xì)菌所致的感染：敗血癥、感染性心內(nèi)膜炎、骨髓炎、關(guān)節(jié)炎、灼傷、手術(shù)創(chuàng)傷等[1-2]。高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography＼HPLC）以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。本文采用高效液相法研究貯存環(huán)境對(duì)鹽酸萬(wàn)古霉素原料的質(zhì)量影響。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：GW-UN超純水器（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；DOA-P504-BN無(wú)油隔膜真空泵（上海洽姆儀器科技有限公司）；LAB-UPF-10T分析型實(shí)驗(yàn)室專用純水機(jī)（臺(tái)上式）（四川蘭博環(huán)保設(shè)備有限公司）；KQ-100KDB高功率數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；GX-2050高溫循環(huán)器（上海市百典儀器廠）；電子分析天平（上海魅宇儀器設(shè)備有限公司）；GI-3000-12二元高壓梯度液相色譜儀（通用（深圳）儀器有限公司）；GENESYS 180紫外可見分光光度計(jì)（上海力晶科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 色譜柱：奧泰公司C18色譜柱（284mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對(duì)照品：鹽酸萬(wàn)古霉素購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

1.4 試劑：甲醇（廣州艾欣科學(xué)儀器有限公司）、三乙胺（廣州艾欣科學(xué)儀器有限公司）、磷酸（廣州艾欣科學(xué)儀器有限公司）、乙腈（瀅寶科學(xué)儀器（上海）有限公司）、四氫呋喃（瀅寶科學(xué)儀器（上海）有限公司）、磷酸氫二鈉（廣州艾欣科學(xué)儀器有限公司）、三乙胺（廣州艾欣科學(xué)儀器有限公司）。

1.5 試藥：鹽酸萬(wàn)古霉素原料

2 測(cè)定方法確定

2.1 色譜條件

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[3-6]。流動(dòng)相：三乙胺緩沖液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值為3.2）-乙腈-四氫呋喃（92∶7∶1）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按鹽酸萬(wàn)古霉素峰計(jì)算應(yīng)不得低于3000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取鹽酸萬(wàn)古霉素對(duì)照品適量，置容量瓶中，加流動(dòng)相制成每1mL含0.5mg的溶液，即得。

2.3 樣品的制備

取本品，置容量瓶中，精密加入流動(dòng)相20mL，超聲處理5分鐘，放冷并加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，按2.1項(xiàng)下的色譜條件，取續(xù)濾液10μl，注入液相色譜儀。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密稱取鹽酸萬(wàn)古霉素對(duì)照品適量，加流動(dòng)相使溶解，制成濃度為0.5mg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.66%，表明本方法精密度良好。

2.5 對(duì)照品的線性考察

精密稱取鹽酸萬(wàn)古霉素對(duì)照品85mg，置50ml容量瓶中，加入流動(dòng)相使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取0.5、1、2、3、4mL，置于5mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。結(jié)果表明，鹽酸萬(wàn)古霉素在0.017～1.7mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的鹽酸萬(wàn)古霉素原料樣品6份，按測(cè)定方法項(xiàng)下的方法測(cè)定并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.88%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

取對(duì)照品適量，精密稱取已知純度的原料9份，置量瓶中，分別精密加入鹽酸萬(wàn)古霉素對(duì)照品，按項(xiàng)下方法制備成80%、100%、60%。取模擬樣品照“含量測(cè)定”項(xiàng)下方法試驗(yàn)，計(jì)算回收率為99.2%，RSD為0.86%。

2.8 樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批鹽酸萬(wàn)古霉素原料樣品，按2.3項(xiàng)下的方法制備供試品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、0.5、1.5、2小時(shí)，精密吸取供試品溶液10？滋l注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測(cè)定鹽酸萬(wàn)古霉素原料中鹽酸萬(wàn)古霉素的RSD=0.82%。結(jié)果表明供試品2小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 貯存環(huán)境

本文通過(guò)將鹽酸萬(wàn)古霉素原料藥分別進(jìn)行常規(guī)包裝、充高純氮包裝、充高純氧包裝，分別存放于2-8℃和40℃兩種溫度條件下，考察儲(chǔ)存條件對(duì)質(zhì)量的影響。

3 討論

分別考察甲醇-水-三乙胺（18∶85：0.1）；三乙胺緩沖液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值為3.2）-乙腈-四氫呋喃（90∶9∶1）；0.01mol/L磷酸氫二鈉-磷酸緩沖液（p H=2.2）-水（80：20）；三乙胺緩沖液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值為3.2）-乙腈-四氫呋喃（92∶7∶1）為流動(dòng)相，不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以三乙胺緩沖液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值為3.2）-乙腈-四氫呋喃（92∶7∶1）為流動(dòng)相為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用三乙胺緩沖液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值為3.2）-乙腈-四氫呋喃（92∶7∶1）為流動(dòng)相為流動(dòng)相。本實(shí)驗(yàn)表明此方法可用于鹽酸萬(wàn)古霉素原料中鹽酸萬(wàn)古霉素的含量測(cè)定。本法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于本品中鹽酸萬(wàn)古霉素的質(zhì)量控制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明鹽酸萬(wàn)古霉素充氮包裝后貯存在2-8℃可以大大抑制產(chǎn)品的降解。

參考文獻(xiàn)

[1]汪波，蔣紅，李秀清，熊輝，陳旭巖，譚偉.去甲萬(wàn)古霉素治療耐甲氧西林葡萄球菌屬感染的臨床及細(xì)菌學(xué)評(píng)價(jià)[J].中國(guó)抗生素雜志，2001（03）.

[2]范洪偉，李華茵，焦力，許瑩，曹彬，黃紹光，何禮賢，張杰，田丁，陳惠德，王愛霞.國(guó)產(chǎn)鹽酸萬(wàn)古霉素治療耐藥G～+球菌感染的有效性和安全性臨床研究[J].中國(guó)新藥雜志，2010（05）.

[3]趙瑞柯，曹俊華.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定萬(wàn)古霉素和去甲萬(wàn)古霉素的血藥濃度[J].海峽藥學(xué)，2017（11）.

[4]陳唯，夏宗玲，陳榮，郁蕾蕾，鄒素蘭.高效液相色譜法測(cè)定人血清中鹽酸去甲萬(wàn)古霉素含量[J].海峽藥學(xué)，2009（12）.

[5]張敏，張遠(yuǎn)，楊勇，李剛，龍恩武，閆峻峰.國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口注射用萬(wàn)古霉素與兩種溶媒的配伍研究[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2016（16）.

[6]戴智勇，李新中，尹桃，羅健.反相高效液相色譜法測(cè)定人血漿中萬(wàn)古霉素濃度[J].中國(guó)抗生素雜志，2002（10）.