雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚抗氧化能力、非特異性免疫力和抗病力的影響

劉晉菘 周奇坤 王 洋 楊 廣 張寶龍 朱國(guó)霞 方珍珍 白東清*

(1.天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院，天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384；2.天津現(xiàn)代晨輝科技集團(tuán)有限公司，天津 301800)

雞血藤是一味富含黃酮類化合物的中草藥，其主要分布于廣東、廣西及云南地區(qū)。通過(guò)現(xiàn)代藥理學(xué)研究得出，雞血藤具有抗氧化、抗病毒、抗腫瘤、調(diào)節(jié)脂代謝的作用[1-5]。雞血藤醇提物成分復(fù)雜，主要包括黃酮類、木脂素類、蒽醌類等，其中黃酮類是雞血藤醇提物中指標(biāo)性成分[1]。黃酮類化合物主要分為黃酮類、異黃烷酮類等，成分包括刺芒柄花素、芒柄花甙、櫻黃素等[1]。黃酮類化合物在消除自由基和抑菌抗癌等方面效果顯著，且無(wú)副作用，研究前景廣闊。同時(shí)，黃酮類化合物對(duì)油脂的抗氧化作用有2種途徑：一是消除鐵、銅等金屬離子的催化作用[6]；二是將氫供給脂肪的自由基，自身則轉(zhuǎn)變?yōu)榉踊杂苫?，酚基自由基的穩(wěn)定性會(huì)降低自動(dòng)氧化的連鎖反應(yīng)的傳遞速度，能夠抑制油脂的進(jìn)一步氧化[7]。

黃顙魚(Pelteobagrusfulvidrac)屬鯰形目，黃顙魚屬，廣泛分布于各個(gè)水系之中，是一種經(jīng)濟(jì)魚類。黃顙魚的肉質(zhì)細(xì)嫩、鮮美，無(wú)肌間刺，同時(shí)具有較高的含肉率和中等含量的脂肪，礦物質(zhì)含量較豐富，肌肉系水力較好，肉質(zhì)具有硬度大、彈性好等特點(diǎn)，廣受消費(fèi)者們的喜愛，已成了我國(guó)新興的養(yǎng)殖魚類之一，也是市場(chǎng)上的名優(yōu)品種。在天津地區(qū)，黃顙魚的銷量可觀，養(yǎng)殖資源豐富，大池塘混養(yǎng)經(jīng)濟(jì)效益高[8]。但同時(shí)，由于近年來(lái)的高密度養(yǎng)殖，導(dǎo)致黃顙魚疾病頻發(fā)，發(fā)病池塘死亡率高，經(jīng)濟(jì)損失慘重，制約了黃顙魚的健康可持續(xù)發(fā)展?；诖耍驹囼?yàn)以黃顙魚為研究對(duì)象，探討雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚抗氧化能力、非特異性免疫力和抗病力的影響，旨在尋求提高黃顙魚抗氧化能力和非特異性免疫力，減少疾病發(fā)生的新型添加劑，為黃顙魚用免疫增強(qiáng)劑的開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)魚

本試驗(yàn)所用黃顙魚及室內(nèi)養(yǎng)殖場(chǎng)均由天津市藍(lán)科水產(chǎn)有限公司提高。選取同一批次的全雄黃顙魚，初始體重為(35.25±1.63) g，初始體長(zhǎng)為(14.07±0.24) cm。前期暫養(yǎng)30 d，投喂基礎(chǔ)飼料，以馴化黃顙魚適應(yīng)飼料和養(yǎng)殖環(huán)境，每日換水1次，每次換1/3的水量。最終選取720條健康的黃顙魚進(jìn)行養(yǎng)殖試驗(yàn)。

1.1.2 試驗(yàn)飼料

本試驗(yàn)所用飼料原料均購(gòu)自天津市天祥水產(chǎn)有限責(zé)任公司，將所有飼料原料進(jìn)行粉碎，通過(guò)80目篩后，進(jìn)行混合，使用蒸餾水混勻，達(dá)到能成團(tuán)、不掉粉即可。混勻后的飼料原料，使用平模飼料顆粒機(jī)制成直徑為2.5 mm的顆粒飼料，轉(zhuǎn)移至烘箱中，烘30 min后，取出放置于陰涼處，風(fēng)干，轉(zhuǎn)至干燥處避光保存，防止飼料變質(zhì)。飼料制作的過(guò)程中，分別按照0(對(duì)照)、0.04%、0.08%、0.16%、0.32%和0.64%的添加量加入雞血藤醇提物(購(gòu)自西安瑞林生物科技有限公司)，并分別標(biāo)記為T1～T6組。試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) %

續(xù)表1項(xiàng)目 Items組別 GroupsT1T2T3T4T5T6粗灰分 Ash10.1310.1110.1210.0610.1910.12水分 Moisture6.356.326.296.656.636.61鈣 Ca1.261.251.281.251.281.26總磷 TP1.901.881.871.891.871.85總能 GE/(MJ/kg)11.9111.9011.8911.8811.8511.79

1)預(yù)混料為每千克飼料提供Premix provided the following per kg of diets：Fe 150 mg，Zn 30 mg，Mn 13 mg，Cu 3 mg，Co 0.1 mg，I 0.6 mg，Se 0.15 mg，VC 100 mg，VB13 mg，VB210 mg，VB612 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 30 mg，煙酸 nicotinic acid 30 mg，生物素 biotin 0.1 mg，葉酸 folic acid 2 mg，VB120.01 mg，肌醇 inositol 400 mg，膽堿choline 1 000 mg，VA 2 000 IU，VD31 000 IU，VE 60 mg，VK 6 mg。
2)總能為計(jì)算值，其余為實(shí)測(cè)值。GE was a calculated value, while the others were measured values.

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 飼養(yǎng)試驗(yàn)

將前期選取出的720尾黃顙魚進(jìn)行分箱養(yǎng)殖，共分成6組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)40尾魚，以重復(fù)為單位養(yǎng)殖在天津市藍(lán)科水產(chǎn)有限公司孵化車間內(nèi)的直徑為1.5 m、深度為0.75 m的圓形孵化桶中，孵化桶分別記作T1-1、T1-2、T1-3、T2-1……T6-2、T6-3，投喂對(duì)應(yīng)飼料。試驗(yàn)期間，增氧機(jī)24 h運(yùn)行，每日投喂2次，分別于09：00、17:00。換水則每日下午進(jìn)行，先更換1/3的水量，隔天更換2/3的水量，以保證試驗(yàn)期間水環(huán)境的穩(wěn)定，避免因水質(zhì)變化而引起病害。飼養(yǎng)試驗(yàn)為期2個(gè)月，飼養(yǎng)前后分別記錄下黃顙魚的體長(zhǎng)、體高、體重，用于生長(zhǎng)指標(biāo)的測(cè)定。

1.2.2 樣品采集

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，每個(gè)重復(fù)選取15尾魚，使用2 mL一次性無(wú)菌注射器進(jìn)行尾靜脈取血，并以4 500 r/min的轉(zhuǎn)速離心15 min，制得血清樣品，于-80 ℃凍存待測(cè)。取血后的黃顙魚在冰浴條件下解剖，分別取出鰓、腦、頭腎、中腎、肝胰臟、脾臟，用生理鹽水洗去附著于器官表面的血塊及脂肪組織，鰓、腦、頭腎、中腎、肝胰臟、脾臟按照1∶9的質(zhì)量體積比加入生理鹽水制成10%的勻漿液，腸道則按照1∶4的質(zhì)量體積比加入生理鹽水制成20%的勻漿液，經(jīng)過(guò)4 000 r/min、20 min的離心，靜止充分沉淀后，取上清液置于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 指標(biāo)測(cè)定

1.2.3.1 飼料營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定

水分含量采用105 ℃常壓恒溫烘干法(GB/T 5009.3—2010)測(cè)定，粗蛋白質(zhì)(CP)含量采用杜馬斯灼燒法(GB/T 24318—2009)測(cè)定，粗脂肪(EE)含量采用索氏抽提法(GB/T 5009.6—2010)測(cè)定，粗灰分(Ash)含量采用550 ℃高溫灼燒法(GB/T 5009.4—2010)測(cè)定，鈣(Ca)含量采用高錳酸鉀滴定法(GB/T 6436—2002)測(cè)定，總磷(TP)含量采用鉬釩酸比色法(GB/T 6437—2002)測(cè)定，總糖(TS)含量采用鐵氰化鉀法(GB/T 9695.31—1991)測(cè)定?？偰?GE)利用公式計(jì)算得出，計(jì)算公式為：

GE=[CP×5.64+EE×9.44+TS×4.11)/100]×4.184。

1.2.3.2 抗氧化指標(biāo)和非特異性免疫指標(biāo)測(cè)定

丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮(NO)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GTP)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOP)、補(bǔ)體3(C3)、球蛋白M(IgM)、白蛋白(ALB)測(cè)定試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所，具體測(cè)定方法參照所附說(shuō)明書。

1.2.3.3 抗病力測(cè)定

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，使用天津水產(chǎn)研究所保存的嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)進(jìn)行攻毒試驗(yàn)。將嗜水氣單胞菌活化后，使用無(wú)菌磷酸鹽緩沖液(PBS)將濃度調(diào)至2×108CFU/mL，每箱取10尾體長(zhǎng)、體重基本一致的黃顙魚，按每100 g體重腹腔注射菌液2 mL的劑量進(jìn)行攻毒注射，保持養(yǎng)殖條件不變，每天定時(shí)觀察并記錄魚體死亡情況，試驗(yàn)周期為1周，統(tǒng)計(jì)各組魚的累積死亡率(cumulative mortality)和免疫保護(hù)率(immune protective rate)。

累積死亡率(%)=100×N2/N1；免疫保護(hù)率(%)=(1-F2/F1)×100。

式中：N1為初受感染魚尾數(shù)；N2為終死亡魚尾數(shù)；F1為對(duì)照組死亡率；F2為試驗(yàn)組死亡率。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，采用SPSS 16.0軟件包中的單因素方差分析(one-way ANOVA)和LSD法多重比較進(jìn)行分析，以P<0.05作為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚體內(nèi)抗氧化指標(biāo)的影響

2.1.1 雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚體內(nèi)SOD活性的影響

由表2可知，對(duì)照組黃顙魚體內(nèi)SOD活性順序?yàn)楦我扰K>中腎>脾臟>鰓>頭腎>血清>腦；添加雞血藤后，黃顙魚體內(nèi)SOD活性排序基本不變，僅T3、T5、T6組鰓和頭腎交換了位置。與對(duì)照組相比，T2組肝胰臟、中腎、脾臟、鰓、頭腎、血清、腦中SOD活性雖均有升高，但差異均未達(dá)顯著水平(P>0.05)；T3組中腎、脾臟和血清中SOD活性顯著提高(P<0.05)，分別為對(duì)照組的1.68、1.58和1.33倍；T4組肝胰臟、中腎、脾臟、鰓、頭腎、血清、腦中SOD活性均顯著提高(P<0.05)，分別為對(duì)照組的1.51、2.37、1.92、1.81、1.73、1.48、1.70倍；T5組肝胰臟、中腎、脾臟、鰓和頭腎中SOD活性顯著提高(P<0.05)，分別為對(duì)照組1.30、2.03、1.83、1.34和1.43倍。

2.1.2 雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚體內(nèi)MDA含量的影響

由表3可知，對(duì)照組黃顙魚體內(nèi)MDA含量順序?yàn)槠⑴K<中腎<鰓<頭腎<肝胰臟<血清<腦，T2、T5、T6黃顙魚體內(nèi)MDA含量排序與對(duì)照組一致，T3和T4組稍有變化，為中腎<脾臟<鰓<頭腎<肝胰臟<血清<腦。與對(duì)照組相比，T2組頭腎和脾臟中MDA含量顯著降低(P<0.05)，分別比對(duì)照組降低了23.9%和17.8%；T3組頭腎、血清、脾臟和中腎中MDA含量顯著降低(P<0.05)，分別比對(duì)照組降低了29.9%、47.9%、27.8%和38.9%；T4組頭腎、血清、腦、脾臟和中腎中MDA含量顯著降低(P<0.05)，分別比對(duì)照組降低了60.5%、56.0%、48.8%、45.0%和59.1%；T5組肝胰臟、頭腎、血清、鰓、腦、脾臟和中腎中MDA含量均顯著降低(P<0.05)，分別比對(duì)照組降低了60.6%、38.9%、42.1%、59.7%、54.7%、54.4%和45.3%；T6組頭腎、鰓、腦、脾臟和中腎中MDA含量顯著降低(P<0.05)，分別比對(duì)照組降低了37.4%、54.6%、46.1%、33.9%和38.9%。

表2 雞血藤提取物對(duì)黃顙魚體內(nèi)SOD活性的影響Table 2 Effects of Caulis spatholobi ethanol extract on SOD activity of Pelteobagrus fulvidraco U/mg prot

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)無(wú)字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。下表同。
In the same row, values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), and with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01). The same as below.

表3 雞血藤提取物對(duì)黃顙魚體內(nèi)MDA含量的影響Table 3 Effects of Caulis spatholobi ethanol extract on MDA content of Pelteobagrus fulvidraco nmol/mg prot

2.1.3 雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚體內(nèi)CAT活性的影響

由表4可知，對(duì)照組以及T2、T3組黃顙魚體內(nèi)CAT活性順序一致，均為肝胰臟>腦>鰓>血清>中腎>脾臟>頭腎；T4、T5組黃顙魚體內(nèi)CAT活性順序一致，均為腦>肝胰臟>鰓>血清>中腎>脾臟>頭腎；T6組黃顙魚體內(nèi)CAT活性順序?yàn)槟X>肝胰臟>血清>鰓>中腎>脾臟>頭腎。T4組肝胰臟、頭腎、鰓、腦、脾臟中CAT活性分別是對(duì)照組的1.45、1.77、1.81、2.17、1.43倍，差異顯著(P<0.05)；T5組頭腎、腦中CAT活性分別是對(duì)照組的1.67、1.94倍，差異顯著(P<0.05)。

表4 雞血藤提取物對(duì)黃顙魚體內(nèi)CAT活性的影響Table 4 Effects of Caulis spatholobi ethanol extract on CAT activity of Pelteobagrus fulvidraco U/mg prot

2.1.4 雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚體內(nèi)GSH含量的影響

由表5可知，對(duì)照組和T2組黃顙魚體內(nèi)GSH含量順序一致，均為血清>肝胰臟>中腎>腦>脾臟>頭腎>鰓；T3、T4、T5和T6組黃顙魚體內(nèi)GSH含量順序一致，均為血清>肝胰臟>腦>中腎>脾臟>頭腎>鰓。與對(duì)照組相比，添加雞血藤醇提物的各試驗(yàn)組肝胰臟、血清中GSH含量均有顯著提升，并隨雞血藤醇提物添加量的增加呈先上升后下降的趨勢(shì)，其中T4組肝胰臟、脾臟和中腎中GSH含量分別是對(duì)照組的2.09、2.25和1.99倍，T5組肝胰臟、血清和腦中GSH含量分別是對(duì)照組的1.95、2.51、3.18倍。雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚頭腎和鰓中GSH含量無(wú)顯著影響(P>0.05)。

2.1.5 雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚體內(nèi)GSH-Px活性的影響

由表6可知，對(duì)照組黃顙魚體內(nèi)GSH-Px活性順序?yàn)轭^腎>肝胰臟>脾臟>中腎>腦>血清>鰓；T2組黃顙魚體內(nèi)GSH-Px活性順序?yàn)轭^腎>肝胰臟>腦>脾臟>血清>中腎>鰓；T3、T5和T6組黃顙魚體內(nèi)GSH-Px活性順序一致，均為頭腎>肝胰臟>腦>血清>中腎>脾臟>鰓；T4組黃顙魚體內(nèi)GSH-Px活性順序?yàn)轭^腎>肝胰臟>血清>腦>中腎>脾臟>鰓。T4組血清和中腎中GSH-Px活性分別是對(duì)照組的2.53和1.72倍，差異顯著(P<0.05)；T5組肝胰臟、血清和腦中GSH-Px活性分別是對(duì)照組的1.79、2.47和2.83倍，差異顯著(P<0.05)。雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚頭腎、鰓和脾臟中GSH-Px活性并無(wú)顯著影響(P>0.05)。

表5 雞血藤提取物對(duì)黃顙魚體內(nèi)GSH含量的影響Table 5 Effects of Caulis spatholobi ethanol extract on GSH content of Pelteobagrus fulvidraco μmol/g prot

2.1.6 雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚體內(nèi)NO含量的影響

由表7可知，對(duì)照組黃顙魚體內(nèi)NO含量順序?yàn)轹w>血清>脾臟>腦>肝胰臟>中腎>頭腎，T2和T3組黃顙魚體內(nèi)NO含量順序一致，均為血清>鰓>脾臟>肝胰臟>腦>頭腎>中腎；T4組黃顙魚體內(nèi)NO含量順序?yàn)檠?鰓>脾臟>肝胰臟>頭腎>腦>中腎；T5組黃顙魚體內(nèi)NO含量順序?yàn)檠?脾臟>肝胰臟>鰓>腦>頭腎>中腎；T6組黃顙魚體內(nèi)NO含量順序?yàn)檠?脾臟>鰓>腦>肝胰臟>頭腎>中腎。肝胰臟、頭腎、血清中NO含量隨雞血藤醇提物添加量的增加呈先上升后下降趨勢(shì)，但添加雞血藤醇提物的各試驗(yàn)組與對(duì)照組相比均有上升，其中T4組肝胰臟和血清中NO含量分別是對(duì)照組的2.55和3.29倍(P<0.05)，T5組肝胰臟和頭腎中NO含量分別是對(duì)照組的2.68和4.00倍(P<0.05)。鰓、腦中NO含量隨雞血藤醇提物添加量的增加呈先下降后上升的趨勢(shì)，添加雞血藤醇提物的各試驗(yàn)組鰓、腦中NO含量均低于對(duì)照組，其中T5組鰓、T4組腦中NO含量下降最為明顯，分別較對(duì)照組下降了80.1%、71.1%(P<0.05)。雞血藤醇提物對(duì)脾臟、中腎中NO含量無(wú)顯著影響(P>0.05)。

表7 雞血藤提取物對(duì)黃顙魚體內(nèi)NO含量的影響Table 7 Effects of Caulis spatholobi ethanol extract on NO content of Pelteobagrus fulvidraco μmol/g prot

2.2 雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚肝胰臟和血清中非特異性免疫指標(biāo)的影響

2.2.1 雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚肝胰臟和血清中轉(zhuǎn)氨酶活性的影響

由表8可知，黃顙魚體內(nèi)2種轉(zhuǎn)氨酶活性均為肝胰臟>血清。在肝胰臟中，GOT與GPT活性隨雞血藤醇提物添加量的增加均呈先上升后下降的趨勢(shì)，均在T5組達(dá)到最大值，分別為對(duì)照組的1.31和1.21倍(P<0.05)。在血清中，GOT與GPT活性隨雞血藤醇提物添加量的增加均呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)，分別在T4組和T5組達(dá)到最小值，比對(duì)照組分別下降了41.5%和56.3%(P<0.05)。

表8 雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚肝胰臟和血清中轉(zhuǎn)氨酶活性的影響Table 8 Effects of Caulis spatholobi ethanol extract on aminotransferase activities in hepatopancreas and serum of Pelteobagrus fulvidraco

2.2.2 雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚血清中C3、ALB和IgM含量的影響

由表9可知，血清中C3和ALB含量隨雞血藤醇提物添加量的增加均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，且均在T5組達(dá)到最大值，分別是對(duì)照組的3.51和1.42倍(P<0.05)。各組血清IgM含量并無(wú)顯著差異(P>0.05)。

2.3 雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚抗病力的影響

由表10可知，飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，腹腔注射嗜水氣單胞菌，7 d內(nèi)黃顙魚累積死亡率隨著雞血藤醇提物添加量的增加呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢(shì)，并在T4、T5組有較低值，分別比對(duì)照組下降了37.9%、34.5%(P<0.05)。通過(guò)計(jì)算免疫保護(hù)率可知，在T4組時(shí)免疫保護(hù)率達(dá)到最大值，顯著高于T2和T3組(P<0.05)，與T5和T6組差異不顯著(P>0.05)。

3 討 論

3.1 雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚抗氧化能力的影響

表9 雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚血清中C3、ALB和IgM含量的影響Table 9 Effects of Caulis spatholobi ethanol extract on C3, ALB and IgM contents in serum of Pelteobagrus fulvidraco

表10 雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚抗病力的影響Table 10 Effects of Caulis spatholobi ethanol extract on disease resistance of Pelteobagrus fulvidraco %

本試驗(yàn)中，雞血藤醇提物可以提高黃顙魚血清及各組織中SOD、CAT及GSH-Px活性，提高GSH含量，并顯著降低MDA含量，說(shuō)明雞血藤醇提物提升了黃顙魚血清及各組織的抗氧化能力，并且降低了血清及各組織的氧化程度。SOD是體內(nèi)非常重要的抗氧化酶和氧自由基清除劑，SOD活性越高，代表機(jī)體清除自由基能力越強(qiáng)[15]。CAT是以H2O2為底物，通過(guò)催化一對(duì)電子的轉(zhuǎn)移而最終將其分解為水和氧氣(O2)，該酶是在生物演化過(guò)程中建立起來(lái)的生物防御系統(tǒng)的關(guān)鍵酶之一[16-17]。GSH-Px能催化GSH變?yōu)檠趸凸入赘孰?GSSG)，使有毒的過(guò)氧化物還原成無(wú)毒的羥基化合物，從而保護(hù)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能，GSH含量和GSH-Px活性越高，代表機(jī)體抗氧化損傷能力越強(qiáng)。MDA含量反映了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度，因此其數(shù)值越低表明細(xì)胞氧化損傷程度越低。劉俊林等[11]研究發(fā)現(xiàn)13.6～217.0 μg/L雞血藤醇提物中總黃酮可濃度依賴性抑制[二價(jià)鐵離子(Fe2+)+抗壞血酸]誘導(dǎo)的大鼠心臟、肝臟、腎臟MDA的生成。此結(jié)果與本試驗(yàn)結(jié)果相似，因此可作為理論支持。王璐等[18]研究發(fā)現(xiàn)荔枝核總黃酮可降低大鼠腸組織中NO、MDA含量和一氧化氮合酶(NOS)活性，促進(jìn)SOD和GSH-Px活性升高。此結(jié)果與本試驗(yàn)結(jié)果相類似，可作為本試驗(yàn)理論基礎(chǔ)。

誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)是介導(dǎo)炎癥反應(yīng)重要的酶，iNOS催化L-精氨酸氧化成NO[19]。細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、凝集血小板、提升免疫防御力和舒張血管是NO在生理上的功能。強(qiáng)氧化性物質(zhì)及過(guò)氧化亞硝酸鹽在NO和O2反應(yīng)時(shí)會(huì)大量生成[20]。付遠(yuǎn)妨等[21]研究發(fā)現(xiàn)雞血藤黃酮乙酸乙酯部位(EFSF)能顯著降低H2O2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激細(xì)胞的NO分泌水平及細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)含量，說(shuō)明EFSF對(duì)氧化應(yīng)激損傷具有一定的保護(hù)作用。在本試驗(yàn)中，雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚肝胰臟、頭腎、血清中NO含量有促進(jìn)作用，對(duì)鰓、腦這類氧交換密切的組織中NO含量有抑制作用。本試驗(yàn)結(jié)果與以上結(jié)論相類似，肝胰臟、頭腎、血清中NO含量上升可起到增強(qiáng)抗氧化能力的作用，鰓、腦中NO含量下降可降低強(qiáng)氧化性物質(zhì)及過(guò)氧化亞硝酸鹽對(duì)機(jī)體的損傷。

目前對(duì)黃酮類物質(zhì)的研究相對(duì)較豐富，但從雞血藤提取的黃酮類物質(zhì)對(duì)機(jī)體的抗氧化能力的研究較少，尤其是對(duì)于黃顙魚的應(yīng)用研究更為稀少，從本試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚抗氧化能力有提高作用，有待于從分子水平研究其作用機(jī)理。

3.2 雞血藤醇提物對(duì)黃顙魚非特異性免疫力及抗病力的影響

魚類是特異性免疫和非特異性免疫并存的低等脊椎動(dòng)物，但與哺乳動(dòng)物相比，魚類特異性免疫機(jī)制并不完善，其主要依賴非特異性免疫發(fā)揮作用[22]。轉(zhuǎn)氨酶有很多種類，其中GOT和GPT是氨基酸代謝過(guò)程中2個(gè)重要的氨基轉(zhuǎn)移酶，在正常的魚體內(nèi)這2種轉(zhuǎn)氨酶主要存在于細(xì)胞內(nèi)，以肝細(xì)胞內(nèi)活性最大，血清中活性極小，但當(dāng)肝胰臟組織受到損害時(shí)，可能有大量的GOT和GPT從細(xì)胞內(nèi)逸出進(jìn)入血液，使血清中的這2種轉(zhuǎn)氨酶的活性升高[23]。本試驗(yàn)中，肝胰臟中GOT和GPT活性隨雞血藤醇提物添加量的增加呈先上升后下降的趨勢(shì)，而在血清中則呈先下降后上升的趨勢(shì)，說(shuō)明雞血藤醇提物中黃酮類化合物可以降低血清中上述種轉(zhuǎn)氨酶的活性，起到保護(hù)肝臟的作用。陳從顯等[24]研究發(fā)現(xiàn)雞血藤醇提物能抑制四氯化碳(CCl4)導(dǎo)致的血清GOT、GPT活性升高?？簼纱旱萚25]研究發(fā)現(xiàn)雞血藤總黃酮能改善小鼠由乙醇所致的酒精肝，使血清中GOT、GPT活性降低。以上2個(gè)研究結(jié)果均與本試驗(yàn)結(jié)果相似，可作為相關(guān)依據(jù)。

C3、ALB、IgM是魚體重要的3個(gè)非特異性免疫指標(biāo)。C3是生物血清內(nèi)含量最高的補(bǔ)體蛋白，參與多種免疫調(diào)節(jié)，如免疫防御、免疫調(diào)控、免疫病理等，只有C3被活化之后，才能帶動(dòng)后續(xù)補(bǔ)體成分的連鎖反應(yīng)[26]。本試驗(yàn)中，飼料中添加0.32%(T5組)雞血藤醇提物能有效提高血清中C3含量，與對(duì)照組(T1組)差異最為顯著。彭耀宗等[27]研究表明，草魚血清中C3含量的增加可能是由于上調(diào)C3 mRNA的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的，其具體作用機(jī)理有待通過(guò)分子手段進(jìn)行進(jìn)一步研究。血清中的ALB具有結(jié)合和運(yùn)輸內(nèi)源性與外源性物質(zhì)、維持血液膠體滲透壓、清除自由基、抑制血小板聚集和抗凝血等生理功能。本試驗(yàn)中，飼料中添加0.32%(T5組)雞血藤醇提物時(shí)，血清中ALB含量達(dá)到最高，由此可以說(shuō)明雞血藤醇提物可以提高黃顙魚血清中ALB含量，維持血液滲透壓平衡，促進(jìn)血液與各組織之間的物質(zhì)交換，進(jìn)而提高非特異性免疫能力，具體作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。在魚類的免疫球蛋白中，IgM含量最豐富，在魚類非特異性免疫中起主要作用[28]。本試驗(yàn)中，雞血藤醇提物未對(duì)血清中IgM含量產(chǎn)生顯著影響，推測(cè)原因可能是病原體在未進(jìn)入血液時(shí)已經(jīng)被消除，因而IgM含量并未有顯著變化，具體作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

本試驗(yàn)中，攻毒7 d后黃顙魚的累積死亡率隨著雞血藤醇提物添加量的增加呈先下降后上升的趨勢(shì)，而免疫保護(hù)率則呈先上升后下降的趨勢(shì)，證明長(zhǎng)期投喂含雞血藤醇提物飼料可以提高黃顙魚的非特異性免疫能力，進(jìn)而提高其成活率，預(yù)防疾病。

4 結(jié) 論

① 雞血藤醇提物能有效提高黃顙魚體內(nèi)SOD、CAT、GSH-Px活性及GSH含量，減少M(fèi)DA含量，對(duì)NO含量具有一定的調(diào)節(jié)作用，并能有效降低血清中GOT、GPT活性，提高C3、ALB含量。其中，雞血藤醇提物添加量為0.16%、0.32%時(shí)對(duì)抗氧化能力和非特異性免疫力的提高效果較好。

② 飼料中添加0.16%、0.32%雞血藤醇提物可有效降低攻毒后黃顙魚的累積死亡率，并提高免疫保護(hù)率。

③ 綜合抗氧化能力、非特異性免疫力和抗病力，黃顙魚飼料中雞血藤醇提物的適宜添加量為0.16%～0.32%。