苦豆子多糖對肝癌腹水荷瘤小鼠化療的減毒增效作用

鄭 奪 張桂賢 陳 冠 王文彤 陶遵威

(天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所，天津 300020)

惡性腫瘤發(fā)病率和病死率逐年增高〔1〕，化療仍是臨床治療的常規(guī)手段之一，但大多數(shù)化療藥物缺乏特異性，如環(huán)磷酰胺(CTX)帶來的毒副作用如骨髓抑制、免疫功能低下及肝功能損害等極大限制了其在臨床上的應(yīng)用〔2,3〕?？喽棺佑置喽共?、苦豆根、歐苦參等〔4〕，具有較強的耐旱性能〔5〕，主要化學(xué)成分為生物堿、黃酮、多糖和蛋白質(zhì)等，目前對于苦豆子多糖成分研究較少，且現(xiàn)有研究多集中于提取工藝的優(yōu)化〔6～8〕。植物蛋白多糖的糖鏈可影響細(xì)胞的增殖與分化，在抗腫瘤及免疫促進方面發(fā)揮重要作用〔9〕，因此苦豆子多糖可能對機體免疫有重要影響。本研究以肝癌腹水(HepA)荷瘤小鼠為實驗?zāi)Ｐ?，分析苦豆子多糖減毒增效作用。

1 材料與方法

1.1一般材料 儀器：B071型顯微攝影器材，日本奧林巴斯；電子分析天平AE240，梅特勒-托利多儀器有限公司。測試樣品：苦豆子多糖，樣品為淡褐色粉末，使用時用蒸餾水配制成所需濃度的混懸液供動物灌胃，配制后4℃冰箱保存，使用期限1 w(250 mg/kg)。試驗動物、昆明種(KM)小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，SPF級，購自中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所，實驗動物合格證號：0001863，許可證號：SCXK-(軍)2009-003。動物瘤源HepA，由天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所腫瘤藥物研發(fā)中心保存。藥品與試劑：氯化鈉注射液(生理鹽水)批號：2J73G5、3G71B1；地榆升白片，成都地奧集團天府藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品，批號：140310。CTX(陽性對照藥)安瓿瓶裝粉針 200 mg/支，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，產(chǎn)品批號：12041025，使用時以生理鹽水(N.S)配制成所需濃度。用前新鮮配制，0.5 h 內(nèi)完成注射(80、40、20 mg/kg)。順鉑(陽性對照藥)批號：140203，江蘇京森藥業(yè)股份有限公司，使用時以生理鹽水(N.S)配制成所需濃度，用前新鮮配制，0.5 h 內(nèi)完成注射(1、2、4 mg/kg)。氟尿嘧啶(陽性對照藥)批號：1311271，使用時以生理鹽水(N.S)配制成所需濃度，用前新鮮配制，0.5 h 內(nèi)完成注射(40、20、15 mg/kg)。

1.2方法 減毒實驗〔10〕：①腫瘤接種。取接種腫瘤7～10 d狀態(tài)良好的荷瘤動物，常規(guī)消毒后抽取少量腹水，推片瑞化染色細(xì)胞分類證實腫瘤細(xì)胞不少于75%后，將腹水抽出，以腹水與生理鹽水1∶4比例稀釋，制備成接種用的腫瘤細(xì)胞混懸液，在無菌條件下(超凈工作臺中)完成。吸取混懸液0.2 ml，接種于小鼠右側(cè)腋窩皮下，從取出腫瘤腹水至腫瘤接種完畢，在60 min內(nèi)完成。②分組與給藥：試驗分為6組各12只，正常對照組：注射生理鹽水(N.S)；模型對照組：腹腔注射CTX 80 mg/kg，3 d；陽性藥物對照組：灌胃地榆升白片10 mg/kg；苦豆子多糖高、中、低劑量組：灌胃苦豆子多糖500、250、125 mg。除正常對照組外，其他各組在給藥第9、10、11天，均腹腔注射CTX，苦豆子多糖及地榆升白片1次/d，共給藥14 d。③樣品采集與處理：所有實驗動物給藥及造模結(jié)束后，以眼眶取血法采血20 μl，立即放入加有稀釋液(1%冰醋酸)的試管中，采用顯微鏡檢測法，計錄外周血白細(xì)胞(WBC)數(shù)量。采血后，將動物處死，稱重，解剖，取出一側(cè)股骨，剝凈軟組織，以3%冰醋酸10 ml沖出一側(cè)骨髓腔中的細(xì)胞成分，做骨髓有核細(xì)胞計數(shù)(顯微鏡法)。④以WBC、骨髓有核細(xì)胞計數(shù)、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)評價藥物的減毒效果。增效實驗：①腫瘤接種方法同減毒實驗。②分組與給藥：腫瘤細(xì)胞接種后24 h分組并給藥。隨機分為6組各12只?？瞻讓φ战M：生理鹽水(N.S)；陽性對照組1：CTX 20 mg/kg，順鉑1 mg/kg，氟尿嘧啶15 mg/kg；陽性對照組2：CTX 40 mg/kg，順鉑2 mg/kg，氟尿嘧啶25 mg/kg；陽性對照組3：CTX 80 mg/kg，順鉑4 mg/kg，氟尿嘧啶40 mg/kg；給藥組1：CTX 20 mg/kg合用苦豆子多糖250 mg/kg，順鉑1 mg/kg合用苦豆子多糖250 mg/kg，氟尿嘧啶15 mg/kg合用苦豆子多糖250 mg/kg；給藥組2：CTX 40 mg/kg合用苦豆子多糖250 mg/kg，順鉑2 mg/kg合用苦豆子多糖250 mg/kg，氟尿嘧啶25 mg/kg合用苦豆子多糖250 mg/kg。給藥方式：CTX、順鉑、氟尿嘧啶為腹腔注射，苦豆子多糖為灌胃。CTX、順鉑給藥1次；氟尿嘧啶給藥1次/d，連續(xù)4 d；苦豆子多糖給藥1次/d，連續(xù)7 d。在腫瘤接種后24 h開始給藥。③療效評價：末次給藥后24 h處死動物，稱體重，解剖并取出腫瘤組織，稱取腫瘤重量，以腫瘤生長抑制率來評價藥物的體內(nèi)抗癌效果。腫瘤生長抑制率=(1-T/C)×100%，T為給藥組平均瘤重，C為對照組平均瘤重。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS12.0軟件進行t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1減毒試驗結(jié)果 與正常對照組相比，模型對照組WBC值、骨髓有核細(xì)胞計數(shù)和脾指數(shù)均顯著降低(P<0.05)；陽性藥物對照組與模型對照組相比，骨髓有核細(xì)胞計數(shù)、脾指數(shù)和胸腺指數(shù)明顯增加(P<0.05)。與模型組對照比較，苦豆子多糖低劑量組脾指數(shù)顯著增高，苦豆子多糖中劑量組骨髓有核細(xì)胞數(shù)、胸腺指數(shù)和脾指數(shù)顯著增加，苦豆子多糖高劑量組外周WBC值、骨髓有核細(xì)胞數(shù)、胸腺指數(shù)和脾指數(shù)均顯著增高(均P<0.05)，且苦豆子多糖高劑量組胸腺指數(shù)和脾指數(shù)高于正常對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

2.2增效實驗結(jié)果 聯(lián)合苦豆子多糖給藥后，三種化療藥的抑瘤率均有所增加，其中苦豆子多糖能夠顯著提高CTX和順鉑的抑瘤作用(P<0.05)，抑瘤率可提高20%～30%，見表2。

表1 苦豆子多糖對環(huán)磷酰胺化療HepA的減毒作用

與正常對照組比較：1)P<0.05；與模型對照組比較：2)P<0.05；與陽性對照組比較:3)P<0.05

表2 苦豆子多糖對CTX、順鉑、氟尿嘧啶抑制HepA作用的影響

續(xù)表2 苦豆子多糖對CTX、順鉑、氟尿嘧啶抑制HepA作用的影響

與空白對照組比較：1)P<0.05；2)P<0.01；3)P<0.001；與同劑量陽性對照組比較：4)P<0.05；5)P<0.01；6)P<0.001

3 討 論

本研究結(jié)果說明苦豆子多糖對CTX所致的外周血WBC和骨髓有核細(xì)胞計數(shù)減少、免疫器官萎縮等毒性反應(yīng)，雖然不能使其完全恢復(fù)到正常水平，但均有明顯保護作用；另外苦豆子多糖對化療藥物CTX、順鉑、氟尿嘧啶具有較好的增效作用；總之，苦豆子多糖是一種有效的化療藥物的減毒劑，有良好的應(yīng)用前景和研究價值。