常見水果中8種氨基甲酸酯農(nóng)藥的測定

田甜 邵康群

摘要 試驗采用高效液相色譜法測定蘋果、香梨、檸檬、橙子中滅多威、三羥基克百威、涕滅威、速滅威、克百威、甲萘威、異丙威、仲丁威8種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留量。通過對農(nóng)藥提取劑、流動相進(jìn)行比較選擇，采用乙腈提取，SPE小柱凈化，以甲醇與水作為流動相進(jìn)行梯度洗脫，柱溫50 ℃，檢測波長220 nm。按照3個不同濃度（0.05、0.10、0.20 mg/kg）向水果中加入8種氨基甲酸酯農(nóng)藥開展回收率試驗。結(jié)果表明，8種農(nóng)藥的回收率處于71.4%～95.3%之間，RSD≤10%。

關(guān)鍵詞 高效液相色譜法；氨基甲酸酯；農(nóng)藥殘留；水果

中圖分類號 S481+.8 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-5739（2018）11-0117-03

Abstract The residues of 8 kinds of carbamate pesticides in apple，fragrant pear，lemon and orange were determined by HPLC method that included methomyl，three hydroxyl carbofuran，aldicarb，metolcarb，carbofuran，carbaryl，isoprocarb，fenobucarb.Through comparative selection of pesticide extraction agents and mobile phase，by acetonitrile extraction and SPE column purification，methanol and water were used as mobile phase for gradient elution，the column temperature was 50 ℃，the detection wavelength was 220 nm.According to 3 different concentrations（0.05 mg/kg， 0.10 mg/kg，0.20 mg/kg），8 kinds of carbamate pesticides were added to fruits，and the recovery experiments were carried out.The results showed that the recovery rate of 8 kinds of pesticides was between 71.4%～95.3% and RSD≤10%.

Key words HPLC method；carbamate；pesticide residue；fruit

氨基甲酸酯農(nóng)藥是一類高效、低毒、易分解的合成型農(nóng)藥，被廣泛應(yīng)用于果蔬病蟲害防治。在我國，經(jīng)濟(jì)類果樹受病蟲害影響嚴(yán)重，噴灑氨基甲酸酯農(nóng)藥是一種極為有效的防治措施，但極易出現(xiàn)果實農(nóng)藥殘留超標(biāo)。大量研究表明，人體攝入過量的氨基甲酸酯農(nóng)藥會對人體造成危害，輕者出現(xiàn)頭痛、頭昏、乏力癥狀，重者出現(xiàn)腦水腫、肝腎功能損傷，或因呼吸衰竭而死亡[1-2]。此外，氨基甲酸酯農(nóng)藥還具有潛在的致癌性[3]。因此，建立有效的農(nóng)藥殘留檢測體系，對防止農(nóng)藥殘留超標(biāo)的水果上市銷售、保障人民身體健康具有重要意義。

目前，檢測水果中氨基甲酸酯農(nóng)藥的方法可分為高效液相色譜法[4-5]、液質(zhì)檢測法[6-7]、激光檢測法[8-9]等。液質(zhì)檢測法靈敏度高、檢出限低，但價格昂貴，不能在我國基層檢測實驗室普及。激光檢測法具有無需樣品預(yù)處理、非破壞性、快速等優(yōu)點，被越來越多的實驗室采用。不足的是，激光檢測法目前技術(shù)還不成熟，還不能得到大規(guī)模應(yīng)用，試驗結(jié)果受外界干擾也較大。高效液相色譜法分離效率高、選擇性好、價格適中、應(yīng)用范圍廣，被廣泛應(yīng)用于我國基層試驗工作站。

本次研究通過高效液相色譜-熒光檢測法測定蘋果、香梨、橙子、檸檬中8種氨基甲酸酯農(nóng)藥（滅多威、三羥基克百威、涕滅威、速滅威、克百威、甲萘威、異丙威、仲丁威）的回收率，并對這8種農(nóng)藥的提取、分離、回收率進(jìn)行研究、驗證。

1 材料與方法

1.1 試驗儀器

高效液相色譜儀（日本島津），離心機(jī)（蘇州九聯(lián)，TDL-40B/400），超聲波（張家港市東勝洗凈科技，SQ150A），超純水儀（杭州珀瑞科學(xué)儀器有限公司），循環(huán)水式多用真空泵（杭州大衛(wèi)科教儀器），氮吹儀（華瑞博遠(yuǎn)科技MTN-2800W），打樣機(jī)（蘇泊爾，SG250I1）。

1.2 主要試驗試劑

滅多威、三羥基克百威、涕滅威、速滅威、克百威、甲萘威、異丙威、仲丁威，此8種氨基甲酯類農(nóng)藥均由農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所提供，NaCl（分析純，140 ℃烘烤4 h），乙腈（色譜純），甲醇（色譜純），二氯甲烷（色譜純），丙酮（色譜純），CB910（美國pickering），CB130（美國pickering）。

1.3 液相色譜條件

1.3.1 色譜柱。C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇與水，采用梯度洗脫，柱后衍生溶液為OPA溶液，水解試劑為NaOH水溶液，熒光檢測器激發(fā)波長330 nm，發(fā)射波長465 nm。

1.3.2 溶劑梯度分離程序。采用甲醇與水作為流動相，試驗反復(fù)測試洗脫效果，確定了梯度洗脫分離程序（表1）。

1.4 試驗方法

1.4.1 前處理。將水果洗凈，稱取可食用部分約500 g，用打樣機(jī)均勻破碎，移入樣品袋中待用。分別準(zhǔn)確吸取質(zhì)量濃度為100 mg/L的滅多威、三羥基克百威、涕滅威、速滅威、克百威、甲萘威、異丙威、仲丁威0.10 mL于10 mL容量瓶中，定容混勻待用。

1.4.2 農(nóng)藥提取。準(zhǔn)確稱取7.00 g氯化鈉和10.00 g破碎樣品于50 mL離心管中，加入25.00 mL乙腈，置于4 500 r/min離心機(jī)中高速離心3 min，待水相與乙腈相完全分層，取出后靜置5 min。

1.4.3 氮吹與凈化。準(zhǔn)確吸取5.00 mL乙腈上清液于10 mL試管，置于70 ℃水浴氮吹儀中吹至盡干。用4.00 mL甲醇-二氯甲烷（1∶99）溶液活化處理氨基柱，將吹至盡干的試管中加入3.00 mL甲醇-二氯甲烷（1∶99）溶液在漩渦儀上震蕩后過柱洗脫，洗脫2次，收集洗脫液6.00 mL。將裝有洗脫液試管置于水浴溫度在35 ℃左右的氮吹儀上，氮吹蒸發(fā)至近干，用甲醇∶水（1∶9）準(zhǔn)確定容至2.00 mL。在漩渦混合器上混勻后用無菌注射器吸取溶液，經(jīng)0.45 μm有機(jī)濾膜過濾，移入樣品瓶中，待高效液相色譜儀分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 混合標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

由混合標(biāo)準(zhǔn)色譜圖（圖1）可知，8種氨基甲酸酯農(nóng)藥出峰順序依次為滅多威、三羥基克百威、涕滅威、速滅威、克百威、甲萘威、異丙威、仲丁威，無互相疊加、干擾，均得到較好的分離。

2.2 儀器檢測準(zhǔn)確度與精密度

用甲醇依次配制成質(zhì)量濃度為0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，以濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，分別進(jìn)行線性回歸處理。8種農(nóng)藥濃度與峰面積均有良好的線性關(guān)系，相關(guān)性系數(shù)均在0.999以上，結(jié)果見表2。

2.3 提取劑比較

試驗選取乙腈、丙酮、乙酸乙酯3種農(nóng)藥提取試劑，分別添加質(zhì)量濃度為0.1 mg/kg的混合標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥進(jìn)行農(nóng)藥提取回收率比較，每種提取劑試驗重復(fù)3次，結(jié)果取均值。由圖2可知，3種提取劑中乙腈提取劑回收率最高，丙酮次之，乙酸乙酯最低。乙腈作為農(nóng)藥提取試劑，提取物中油脂和色素含量較少，有利于后續(xù)試驗處理。

2.4 流動相比較

試驗考察了乙腈-水、甲醇-水體系作為流動相對氨基甲酸酯類農(nóng)藥的分離效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乙腈-水、甲醇-水均能對這8種氨基甲酸酯類農(nóng)藥實現(xiàn)分離，但是乙腈毒性較甲醇大，不宜長期使用；使用甲醇-水體系作為流動相較乙腈-水更穩(wěn)定。因為甲醇與水混合時發(fā)熱，流動相中殘存的氣泡較易脫出，而乙腈由于吸熱冷卻，隨著溫度的升高，分離過程中易產(chǎn)生氣泡，對儀器穩(wěn)定性造成影響。同時，甲醇比乙腈更經(jīng)濟(jì)、安全。因此，選取甲醇-水作為流動相。

2.5 回收率試驗及精密度

在蘋果、香梨、檸檬、橙子4種水果中分別加入0.05、0.10、0.20 mg/L混標(biāo)，每個濃度各做3個平行回收試驗，結(jié)果取均值，測定結(jié)果見表3。

通過驗證試驗回收率，結(jié)果表明，8種氨基甲酸酯農(nóng)藥在4種水果中回收率均處于71.4%～95.3%之間，RSD為1.8%～8.3%，符合試驗方法驗收標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的范圍（≤10%）。回收率試驗表明，對常見水果中8種氨基甲酸酯的測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

3 結(jié)論

試驗通過優(yōu)化樣品前處理，并對農(nóng)藥提取劑、流動相進(jìn)行比較，建立了高效液相色譜-熒光法測定常見水果中滅多威、三羥基克百威、涕滅威、速滅威、克百威、甲奈威、異丙威、仲丁威8種農(nóng)藥的分析方法。該方法具有檢測時間短、分離效果好、檢測結(jié)果準(zhǔn)確度高，完全可以滿足基層實驗室對常見水果中8種氨基甲酸酯農(nóng)藥的測定。

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