花生DGAT基因家族的生物信息學(xué)分析

鄭玲 單雷 李新國 郭峰 孟靜靜 萬書波 彭振英

摘要：含油量是花生最重要的品質(zhì)性狀之一?；ㄉ偷闹饕煞质侨８视停═AG），二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶（DGAT）是催化合成TAG的關(guān)鍵酶類，其活性高低與含油量呈正相關(guān)。本研究利用生物信息學(xué)方法對(duì)花生DGAT（AhDGAT）基因家族的進(jìn)化、基因結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、表達(dá)模式以及可變剪接等進(jìn)行了分析。進(jìn)化分析結(jié)果顯示，AhDGAT1、AhDGAT2和AhDGAT3親緣關(guān)系較近，與AhWSD/DGAT的親緣關(guān)系稍遠(yuǎn)。AhDGAT1具有17～18個(gè)外顯子，AhDGAT2具有7～9個(gè)外顯子，AhDGAT3具有2～3個(gè)外顯子，而AhWSD/DGAT具有3～6個(gè)外顯子。AhDGAT1的跨膜區(qū)數(shù)目為7～11個(gè)，AhDGAT2和AhWSD/DGAT為0～2個(gè)，AhDGAT3沒有跨膜結(jié)構(gòu)。另外，4個(gè)亞家族均具有自己特有的保守結(jié)構(gòu)域和表達(dá)模式。AhDGAT1和AhDGAT2在種子中表達(dá)量較高，而AhDGAT3和AhWSD/DGAT在根和葉中的表達(dá)量較高。AhDGAT1的可變剪接形式最多，其次為AhWSD/DGAT?；ㄉ?個(gè)AhDGAT亞家族具有不同的特點(diǎn)，表明它們可能在進(jìn)化中具有不同的祖先。

關(guān)鍵詞：花生；二酰甘油酰基轉(zhuǎn)移酶（DGAT）；進(jìn)化；表達(dá)模式

中圖分類號(hào)：S565.2：Q7文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2018）06-0010-09

Abstract Oil content is one of the most important quality characters of peanut. The major component of peanut oil is triacylglycerol （TAG）， and diacylgycerol acyltransferase （DGAT） is the key enzyme for TAG synthesis. The activity of DGAT is positively correlated with the oil content. In this study， the evolution， gene structure characteristics， expression pattern and alternative splicing of peanut DGAT gene family were analyzed using bioinformatics method. The evolution results showed that the genetic relationships among AhDGAT1， AhDGAT2 and AhDGAT3 were closer than that of AhWSD/DGAT. There were 17～18 exons in AhDGAT1， 7～9 exons in AhDGAT2， 2～3 exons in AhDGAT3 and 3～6 exons in AhWSD/DGAT. The number of transmembrane domain in AhDGAT1 were 7～11， and those in AhDGAT2 and AhWSD/DGAT were both 0～2， whereas there was none in AhDGAT3. Each subfamily had its own unique conserved domain and expression pattern. AhDGAT1 and AhDGAT2 expressed higher in seeds， whereas AhDGAT3 and AhWSD/DGAT expressed relatively higher in roots and leaves. AhDGAT1 had the most alternative splicing isoforms， followed by AhWSD/DGAT. Significant differences among the four DGAT subfamilies showed they might had different ancestors.

Keywords Peanut； Diacylglycerol acyltransferase （DGAT）； Evolution； Expression pattern

三酰甘油（triacylglycerol，TAG）是生物體內(nèi)貯藏油脂的一種主要形式。二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶（diacylglycerol acyltransferase，DGAT）是催化二?；视停╠iacylglycerol，DAG）合成TAG的關(guān)鍵酶，在DAG的sn-3位添加脂?；苯記Q定?；?CoA進(jìn)入TAG的數(shù)量和質(zhì)量。迄今為止發(fā)現(xiàn)了四類DGAT基因：DGAT1、DGAT2、DGAT3和WSD/DGAT。WSD/DGAT除了具有TAG合成功能外，在蠟質(zhì)合成中也具有主要作用。4個(gè)亞家族的成員具有不同的亞細(xì)胞定位和底物特異性[1]。過表達(dá)DGAT基因可促進(jìn)種子中油脂的積累，擬南芥DGAT1在煙草中過表達(dá)可使轉(zhuǎn)基因煙草種子中TAG含量顯著上升[2]。擬南芥DGAT1突變體幼苗生長異常、種子皺縮、油脂減少、種子成熟延遲[3，4]。DGAT2在油料作物中過量表達(dá)，也能提高種子的含油量[5，6]，如蓖麻DGAT2過表達(dá)可促進(jìn)蓖麻油中蓖麻油酸含量的增加[7]。

雖然DGAT家族在油脂合成中的功能已經(jīng)在許多植物中被驗(yàn)證，但是關(guān)于該家族進(jìn)化的研究并不多見。玉米和大豆DGAT家族的生物信息學(xué)分析已經(jīng)報(bào)道[8，9]，玉米中7個(gè)DGAT基因可以分成ZmDGAT1、ZmDGAT2和ZmDGAT3亞家族，不同亞家族的基因結(jié)構(gòu)和跨膜區(qū)有明顯差別[8]。大豆中的10個(gè)DGAT基因，也分別屬于DGAT1、DGAT2、DGAT3亞家族，分布在6條染色體上[9]。

可變剪接（alternative splicing，AS）是真核生物的一種轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機(jī)制，其主要類型有可變轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)（alternative transcription start site，TSS）、可變轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)（alternative transcription termination site，TTS）、外顯子跳躍（exon skipping，ES）、內(nèi)含子滯留（intron retention，IR）、可變外顯子剪接位點(diǎn)選擇（alternative exon，AE）[10]。AS能夠影響植物的各項(xiàng)生命活動(dòng)，比如生長發(fā)育、開花結(jié)實(shí)等，在響應(yīng)生物和非生物脅迫中也發(fā)揮著重要調(diào)節(jié)作用[11-19]。我們前期研究表明，AS對(duì)油脂合成也有一定的調(diào)節(jié)作用。在花生DGAT1（AhDGAT1）中存在許多不同的可變剪接體，并且許多可變剪接體編碼提前終止，各個(gè)剪接體的表達(dá)模式也存在差異[20]。

花生是世界四大油料作物之一，在我國種植面積廣泛?；ㄉ土空挤N子干重的50%以上。3個(gè)DGAT亞家族基因在花生中都已經(jīng)被鑒定，AhDGAT1能恢復(fù)突變體酵母脂質(zhì)合成的能力[20，21]；而AhDGAT2a和AhDGAT2b能顯著提高大腸桿菌脂肪酸含量[22]，個(gè)別堿基突變后酶活性提高或者降低[23]；AhDGAT3是一種可溶性酶類，定位于細(xì)胞質(zhì)中[24]。為了系統(tǒng)分析AhDGAT家族基因的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、保守結(jié)構(gòu)域、表達(dá)模式及其可變剪接情況，我們對(duì)花生基因組中所有的AhDGAT基因進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，從而為深入研究花生油脂合成和培育高油花生新品種提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 基因檢索

根據(jù)NCBI中花生4個(gè)AhDGAT亞家族基因的序列，即AhDGAT1（GI：XP_016202335.1）、AhDGAT2（GI：015950782.1）、AhDGAT3（GI：AAX62735.1）、AhWSD/DGAT（GI：XP_015964946.1），在花生基因組數(shù)據(jù)庫Peanutbase（https：//www.peanutbase.org/）進(jìn)行檢索，得到的序列根據(jù)E-value<1.0e-30進(jìn)行篩選，下載目的基因的基因組和mRNA序列進(jìn)行分析。

1.2 生物信息學(xué)分析

將AhDGAT序列利用Mega7.0軟件進(jìn)行進(jìn)化樹構(gòu)建，構(gòu)建方法為鄰近法。利用TMHMM（www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/）在線軟件分析跨膜結(jié)構(gòu)域；用GSDS（http：//gsds.cbi.pku.edu.cn/）在線軟件分析基因結(jié)構(gòu)；利用MEME（http：//meme-suite.org/）在線軟件分析保守結(jié)構(gòu)域；利用TargetP（http：//www.cbs.dtu.dk/services/TargetP/）在線軟件分析亞細(xì)胞定位。

1.3 AhDGAT的表達(dá)模式和可變剪接分析

根據(jù)花生轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)（NCBI：PRJNA354652）中AhDGAT的FPKM值，用HemI軟件進(jìn)行表達(dá)模式分析。用ASTALAVISTA program（http：//genome.crg.es/astalavista/）分析其可變剪接情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 系統(tǒng)進(jìn)化分析

在花生數(shù)據(jù)庫進(jìn)行AhDGAT基因檢索，共得到46個(gè)基因（表1）。其中AhDGAT1有4個(gè)基因，為2對(duì)同源基因，分別位于A03、B03、B01、A01上。AhDGAT2有10個(gè)基因，在染色體上的分布較為復(fù)雜，分別位于7條染色體上，其中Aradu.A01、Araip.B10和Aradu.A05各有2個(gè)；這10個(gè)基因中有3對(duì)等位基因，但是有些等位基因卻沒有位于對(duì)應(yīng)的染色體上，如Aradu.UR9Q8位于Aradu.A01，而Araip.RJ1BI 則位于Araip.B10。AhDGAT3有8個(gè)基因，分別位于4條染色體上，Aradu.A02和Araip.B02上各有3個(gè)；其中有1對(duì)等位基因（Aradu.92MYK和Araip.G3EM2），位于1對(duì)染色體上（Aradu.A01和Araip.B01）。AhWSD/DGAT數(shù)目最多，有24個(gè)基因，分別位于13條染色體上，其中Araip.B04上最多，有4個(gè)；Aradu.A04有3個(gè)；其余染色體上分別有1～2個(gè)。這24個(gè)基因中，包含8對(duì)等位基因，分別位于10條染色體上，有6對(duì)等位基因位于相對(duì)應(yīng)的染色體上，Araip.Z6NL1 和Aradu.NT54G沒有位于相對(duì)應(yīng)的染色體上，而Aradu.RA7PE和Aradu.54FFT則位于同一條染色體上。

對(duì)這46條序列進(jìn)行進(jìn)化樹構(gòu)建（圖1），發(fā)現(xiàn)4個(gè)AhDGAT亞家族聚集成4個(gè)分支，AhDGAT1、AhDGAT2和AhDGAT3親緣關(guān)系較近，而與AhWSD/DGAT親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。AhDGAT3家族中Araip.A05V1和AhDGAT2聚在一個(gè)分支中，可能預(yù)示著兩個(gè)基因家族具有相同的起源。AhWSD/DGAT分支中，出現(xiàn)許多小分支，表明該亞家族的進(jìn)化速率較快，在進(jìn)化中產(chǎn)生許多新的變異，導(dǎo)致其序列相似性出現(xiàn)較大差異，但是這些序列是否都具有蠟質(zhì)合酶的功能還有待研究。

2.2 跨膜結(jié)構(gòu)和亞細(xì)胞定位分析

對(duì)46個(gè)蛋白的跨膜區(qū)進(jìn)行分析（表2）發(fā)現(xiàn)，AhDGAT1亞家族的跨膜區(qū)數(shù)目為7～11個(gè)，AhDGAT2亞家族的跨膜區(qū)數(shù)目為0～2個(gè)，AhDGAT3亞家族是可溶性蛋白，不含跨膜結(jié)構(gòu)，AhWSD/DGAT亞家族的跨膜區(qū)數(shù)目也是0～2個(gè)。4個(gè)亞家族的蛋白在跨膜區(qū)數(shù)目上具有明顯差異。

利用軟件預(yù)測(cè)AhDGAT家族亞細(xì)胞定位（表2），發(fā)現(xiàn)AhDGAT1沒有預(yù)測(cè)到具體的亞細(xì)胞定位；AhDGAT2中的Araip.TYL76、Aradu.Z4DIZ和Araip.2S31J是分泌蛋白，Araip.31MV0定位在線粒體中，其余AhDGAT2成員沒有預(yù)測(cè)到具體的細(xì)胞器定位；AhDGAT3的8條序列中有4條定位在線粒體，其余序列沒有預(yù)測(cè)到具體的細(xì)胞器定位；AhWSD/DGAT的絕大多數(shù)基因沒有預(yù)測(cè)到具體的細(xì)胞器定位，只有Aradu.JEL8U和Araip.T7VUE是分泌蛋白，Araip.M0N7G則定位在線粒體上。

2.3 基因結(jié)構(gòu)分析

分析AhDGAT的4個(gè)亞家族基因結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)他們具有明顯不同的特點(diǎn)（圖2）。AhDGAT1家族的外顯子數(shù)目為17～18個(gè)；AhDGAT2家族的外顯子數(shù)目為7～9個(gè)；AhDGAT3家族的外顯子數(shù)目較少，為2～3個(gè)；AhWSD/DGAT家族的外顯子數(shù)目大多為3～6個(gè)，但是其中Araip.Z6NL1和Aradu.NT54G的外顯子數(shù)目超過10個(gè)，二者的氨基酸個(gè)數(shù)較其他的長，都大于800，可能在進(jìn)化中該家族基因發(fā)生了外顯子數(shù)目增加和長度增長，導(dǎo)致基因長度也隨之增加。等位基因間具有類似的基因結(jié)構(gòu)，如Aradu.E7DEE和Araip.EXQ72，Aradu.6I2MF和Araip.KVP0Y。

2.4 保守結(jié)構(gòu)域分析

分析4個(gè)AhDGAT亞家族的保守結(jié)構(gòu)域發(fā)現(xiàn)，4個(gè)亞家族各有自己保守的結(jié)構(gòu)域（圖3）。AhDGAT1的Motif 2和Motif 3都含有亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)，Motif 5具有特有假定的佛波醇結(jié)合基元（HKW-X-X-RH-X-Y-XP）。AhDGAT2的Motif 4和Motif 5中具有亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)，Motif 4還具有該家族特有的EPHSV序列。AhDGAT3的Motif 1含有HHNAVELFSRNND保守基序，Motif 4含有基序HVQYYGD，該基序是二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶的結(jié)構(gòu)基序，Motif 5含有脂肪酸結(jié)合蛋白特征序列KSGSIALLQEFERVVGAEG，Motif 6含有硫酯酶特征序列TNPDCESSSSSSSSESESES。這3個(gè)基因家族的6個(gè)保守結(jié)構(gòu)域的序列都非常保守，在AhDGAT中變異不大。AhWSD/DGAT的保守結(jié)構(gòu)域序列變異較大，其Motif 1中存在活性位點(diǎn)HHXXXDG。

2.5 表達(dá)模式分析

利用花生品種‘豐花一號(hào)的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)對(duì)AhDGAT家族基因進(jìn)行表達(dá)模式分析。轉(zhuǎn)錄組所檢測(cè)樣品組織分別為根、葉、果針入土30 d（Seed1）和50 d（Seed2）。根據(jù)轉(zhuǎn)錄組中的FPKM值分析AhDGAT的表達(dá)模式。部分基因在轉(zhuǎn)錄組中沒有檢測(cè)到表達(dá)，因此不對(duì)其進(jìn)行分析。

4個(gè)亞家族基因的表達(dá)模式存在明顯差異（圖4）。AhDGAT1在種子中的表達(dá)量大于根和葉，其中Araip.DT1IR在Seed2階段表達(dá)量最高。而AhDGAT2的10條序列中，Aradu.6I2MF和Araip.KVP0Y在所有組織中均表達(dá)，但在Seed2和根中的表達(dá)量較高。AhDGAT3中Aradu.92MYK和Araip.27007的表達(dá)量較高，特別是在根和葉中。AhWSD/DGAT主要在根和葉中表達(dá)，在種子中的表達(dá)量極低。由此可見，每個(gè)AhDGAT基因都有各自的主要表達(dá)部位，彼此之間既有功能分工，又有密切合作。

2.6 可變剪接分析

我們對(duì)46個(gè)AhDGAT基因進(jìn)行可變剪接分析，結(jié)果（表3）發(fā)現(xiàn)AhDGAT1具有最多的可變剪接形式和數(shù)量，其次是AhWSD/DGAT和AhDGAT2，AhDGAT3沒有可變剪接。AhDGAT1的4個(gè)基因在4個(gè)花生組織中都有多種可變剪接形式，其中Araip.EXQ72的形式最多。AhDGAT2中Aradu.6I2MF可變剪接形式最多。AhWSD/DGAT中Araip.7A0S5可變剪接形式最多。

IR和TSS是AhDGAT家族基因可變剪接的主要形式，ES只發(fā)生在AhDGAT1中，AE只發(fā)生在AhDGAT1和AhWSD/DGAT中。AhDGAT1豐富的可變剪接形式可能預(yù)示著其表達(dá)受可變剪接影響。在seed2階段具有最多的可變剪接事件，表明可變剪接對(duì)該階段種子發(fā)育和脂肪酸積累具有重要調(diào)節(jié)作用。

3 討論與結(jié)論

DGAT是TAG合成的限速酶，其功能研究一直備受大家關(guān)注。相比而言，對(duì)DGAT遺傳進(jìn)化的研究相對(duì)較少。本研究利用花生基因組和轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，對(duì)AhDGAT家族基因的進(jìn)化和表達(dá)模式進(jìn)行了初步分析。在進(jìn)化樹分析中，46條序列按照4個(gè)AhDGAT的亞家族聚類成不同的分支?；蚪Y(jié)構(gòu)和跨膜區(qū)分析表明，4個(gè)AhDGAT亞家族具有明顯不同的跨膜區(qū)和外顯子數(shù)目，說明不同亞家族間的DNA和蛋白序列相似性較低。AhDGAT1、AhDGAT2和AhDGAT3是?；D(zhuǎn)移酶，而AhWSD/DGAT是蠟質(zhì)合酶，進(jìn)化樹分析說明AhDGAT1、AhDGAT2和AhDGAT3具有較近的親緣關(guān)系，與AhWSD/DGAT的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)?？梢?，它們的序列差異導(dǎo)致了其功能的明顯不同。

AhWSD/DGAT是進(jìn)化較快的一個(gè)亞家族，其基因數(shù)目占整個(gè)AhDGAT家族的一半以上，可能在進(jìn)化中發(fā)生了基因加倍事件。而正是由于該家族進(jìn)化中產(chǎn)生的變異，該亞家族保守結(jié)構(gòu)域的序列一致性也較差。但是所有的序列都保留了HHXXXDG基序，該序列被認(rèn)為在蠟質(zhì)合成和TAG合成中至關(guān)重要[25]。

表達(dá)模式分析對(duì)于研究基因的功能至關(guān)重要，4個(gè)亞家族基因的表達(dá)模式也存在明顯差異。AhDGAT1和AhDGAT2在種子中的表達(dá)水平大于根和葉，而AhDGAT3和AhWSD/DGAT卻相反，這種表達(dá)模式與玉米和大豆的DGAT相似。玉米中DGAT1主要在胚乳中表達(dá)，ZmDGAT1.1在花藥中也有較高的表達(dá)水平；ZmDGAT2表達(dá)范圍較廣，ZmDGAT2.1在節(jié)間和莖表達(dá)較高，而ZmDGAT2.2在胚和整粒種子中有較高的表達(dá)水平；ZmDGAT3的表達(dá)主要集中在葉片，在胚乳和胚等部位表達(dá)較低[8]。大豆中DGAT1主要在莖端分生組織和綠色果莢中表達(dá)，DGAT3主要在根中表達(dá)，而DGAT2表達(dá)范圍最廣，主要在根瘤、葉、花和綠色果莢中表達(dá)[9]。李蘭等[26]對(duì)花生種子發(fā)育中的脂肪酸含量進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)不同的脂肪酸在種子中積累的時(shí)間不一致，在果針入土20多天時(shí)大部分脂肪酸都開始快速積累，脂肪酸總量在成熟后期有所下降，正是由于AhDGAT1和AhDGAT2在發(fā)育種子中高表達(dá)，導(dǎo)致種子中的TAG不斷積累。

還有研究發(fā)現(xiàn)，DGAT的表達(dá)與環(huán)境脅迫有關(guān)。大豆和花生DGAT2的表達(dá)受溫度脅迫和生物脅迫的誘導(dǎo)[21，27]。這些現(xiàn)象啟示我們，DGAT可能在植物適應(yīng)脅迫中發(fā)揮著重要作用。 可變剪接作為一種轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控機(jī)制，對(duì)植物的許多生命進(jìn)程都起到重要的調(diào)節(jié)作用。前人已經(jīng)對(duì)擬南芥、水稻和玉米等植物中基因的可變剪接進(jìn)行了分析[13， 28-35]，但是在花生中僅有一篇關(guān)于可變剪接的報(bào)道，通過對(duì)AhDGAT的可變剪接分析發(fā)現(xiàn)，AhDGAT中存在大量的可變剪接現(xiàn)象，而且種子發(fā)育的中后期可變剪接情況最多[20]。種子發(fā)育中后期的油脂大量合成，AhDGAT大量表達(dá)，這一時(shí)期可變剪接的頻繁發(fā)生可能對(duì)DGAT的油脂合成功起調(diào)控作用。研究表明植物體內(nèi)基因轉(zhuǎn)錄水平的變化是植物抵御非生物脅迫和生物脅迫的重要方式，轉(zhuǎn)錄水平變化包含可變剪接的變化。熱激蛋白HsfA2基因在內(nèi)含子區(qū)剪接出一個(gè)31 bp的外顯子序列HsfA2 Ⅱ，在熱脅迫下HsfA2的表達(dá)量是HsfA2 Ⅱ的17%，但是HsfA2 Ⅱ是沒有活性的RNA，通過NMD途徑降解[36]。水稻中DREB2B是溫度響應(yīng)基因，有不同的可變剪接形式，脅迫誘導(dǎo)下可變剪接情況的變化是其抵御脅迫的一種方式。在正常環(huán)境下，Os-DREB2B1的表達(dá)量是Os-DREB2B2的5倍，在脅迫條件下兩者表達(dá)量都增加，但是Os-DREB2B2增加顯著，表達(dá)量與Os-DREB2B1相當(dāng)或者較高[37]。由此可見，深入研究可變剪接調(diào)控基因功能的作用機(jī)制具有重要意義。下一步我們將針對(duì)逆境脅迫下AhDGAT的可變剪接情況變化進(jìn)行分析，揭示AhDGAT與花生抗逆的相關(guān)性。

參 考 文 獻(xiàn)：

[1] 唐桂英， 柳展基， 單雷. 二?；视王；D(zhuǎn)移酶（DGAT） 研究進(jìn)展[J]. 中國油料作物學(xué)報(bào)， 2010， 32（2

）：320-328.

[2] Andrianov V， Borisjuk N， Pogrebnyak N， et al. Tobacco as a production platform for biofuel： overexpression of Arabidopsis DGAT and LEC2 genes increases accumulation and shifts the composition of lipids in green biomass[J]. Plant Biotechnology Journal， 2010， 8（3）：277-287.

[3] Zou J， Wei Y D， Jako C， et al. The Arabidopsis thaliana TAG1 mutant has a mutation in a diacylglycerol acyltransferase gene[J]. Plant Journal， 1999， 19：645-653.

[4] Poirier Y， Ventre G， Caldelari D. Increased flow of fatty acids toward beta-oxidation in developing seeds of Arabidopsis deficient in diacylglycerol acyltransferase activity or synthesizing medium-chain-length fatty acids[J]. Plant Physiology， 1999， 121（4）：1359-1366.

[5] Lardizabal K， Effertz R， Levering C， et al. Expression of Umbelopsis ramanniana DGAT2A in seed increases oil in soybean[J]. Plant Physiology， 2008， 148：89-96.

[6] Burgal J， Shockey J， Lu C， et al. Metabolic engineering of hydroxy fatty acid production in plants： RcDGAT2 drives dramatic increases in ricinoleate levels in seed oil[J]. Plant Biotechnology Journal， 2008， 6（8）：819-831.

[7] He X， Turner C， Chen G Q， et al. Cloning and characterization of a cDNA encoding diacylglycerol acyltransferase from castor bean[J]. Lipids， 2004， 39：311-318.

[8] 李書霞， 劉偉， 李威， 等. 玉米DGAT基因家族的全基因組分析[J]. 核農(nóng)學(xué)報(bào)， 2015， 29（4）：643-650.

[9] 劉貴芹， 邵群， 黃榮峰， 等. 大豆DGAT基因家族的鑒定和表達(dá)分析[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào)， 2013， 29（12）：55-61.

[10]Florea L， Song L， Salzberg S L. Thousands of exon skipping events differentiate among splicing patterns in sixteen human tissues[J]. F1000Research， 2013， 2：188.

[11]Fontana G A， Rigamonti A， Lenzken S C， et al. Oxidative stress controls the choice of alternative last exons via a Brahma-BRCA1-CstF pathway[J]. Nucleic Acids Research， 2017， 45（2）：902-914.

[12]Zhang Q， Zhang X， Wang S， et al. Involvement of alternative splicing in barley deed germination[J]. PLoS One， 2016， 11（3）：e0152824.

[13]Thatcher S R， Danilevskaya O N， Meng X， et al. Genome-wide analysis of alternative splicing during development and drought stress in maize[J]. Plant Physiol.， 2016， 170（1）：586-599.

[14]Saminathan T， Nimmakayala P， Manohar S， et al. Differential gene expression and alternative splicing between diploid and tetraploid watermelon[J]. Journal of Experimental Botany， 2015， 66（5）：1369-1385.

[15]Potenza E， Racchi M L， Sterck L， et al. Exploration of alternative splicing events in ten different grapevine cultivars[J]. BMC Genomics， 2015， 16：706.

[16]Min X J， Powell B， Braessler J， et al. Genome-wide cataloging and analysis of alternatively spliced genes in cereal crops[J]. BMC Genomics， 2015， 16：721.

[17]Mandadi K K， Scholthof K B. Genome-wide analysis of alternative splicing landscapes modulated during plant-virus interactions in Brachypodium distachyon[J]. Plant Cell， 2015， 27（1）：71-85.

[18]Vitulo N， Forcato C， Carpinelli E C， et al. A deep survey of alternative splicing in grape reveals changes in the splicing machinery related to tissue， stress condition and genotype[J]. BMC Plant Biology， 2014， 14：99.

[19]Thatcher S R， Zhou W， Leonard A， et al. Genome-wide analysis of alternative splicing in Zea mays： landscape and genetic regulation[J]. The Plant Cell， 2014， 26：3472-3487.

[20]Zheng L， Shockey J， Guo F， et al. Discovery of a new mechanism for regulation of plant triacylglycerol metabolism： The peanut diacylglycerol acyltransferase-1 gene family transcriptome is highly enriched in alternative splicing variants[J]. Journal of Plant Physiology， 2017， 219：62-70.

[21]Chi X， Hu R， Zhang X， et al. Cloning and functional analysis of three diacylglycerol acyltransferase genes from peanut （Arachis hypogaea L.） [J]. PLoS One， 2014， 9（9）：e105834.

[22]Peng Z， Li L， Yang L， et al. Overexpression of peanut diacylglycerol acyltransferase 2 in Escherichia coli[J]. PLoS One， 2013， 8（4）：e61363.

[23]Zheng L， Shockey J， Bian F， et al. Variant amino acid residues alter the enzyme activity of peanut type 2 diacylglycerol acyltransferases[J]. Frontiers in Plant Science， 2017， 8：1751.

[24]Saha S， Enugutti B， Rajakumari S， et al. Cytosolic triacylglycerol biosynthetic pathway in oilseeds. Molecular cloning and expression of peanut cytosolic diacylglycerol acyltransferase[J]. Plant Physiology， 2006， 141：1533-1543.

[25]Kalscheuer R， Steinbüchel A. A novel bifunctional wax ester synthase/acyl-coa： diacylglycerol acyltransferase mediates wax ester and triacylglycerol biosynthesis in Acinetobacter calcoaceticus ADP1[J]. J. Biol. Chem.， 2003， 278（10）：8075-8082.

[26]李蘭， 彭振英， 陳高， 等. 花生種子發(fā)育過程中脂肪酸積累規(guī)律的研究[J]. 華北農(nóng)學(xué)報(bào)， 2012， 27（1）：173-177.

[27]Chen B， Wang J， Zhang G， et al. Two types of soybean diacylglycerol acyltransferases are differentially involved in triacylglycerol biosynthesis and response to environmental stresses and hormones[J]. Scientific Reports， 2016， 6：28541.

[28]Xu P， Kong Y， Song D， et al. Conservation and functional influence of alternative splicing in wood formation of Populus and Eucalyptus[J]. BMC Genomics， 2014， 15：780.

[29]Yan K， Liu P， Wu C A， et al. Stress-induced alternative splicing provides a mechanism for the regulation of microRNA processing in Arabidopsis thaliana[J]. Molecular Cell， 2012， 48（4）：521-531.

[30]Seo P J， Park M J， Lim M H， et al. A self-regulatory circuit of CIRCADIAN CLOCK-ASSOCIATED1 underlies the circadian clock regulation of temperature responses in Arabidopsis[J]. Plant Cell， 2012， 24：2427-2442.

[31]Remy E， Cabrito T R， Batista R A， et al. Intron retention in the 5′UTR of the novel ZIF2 transporter enhances translation to promote zinc tolerance in Arabidopsis[J]. PLoS Genetics， 2014， 10（5）：e1004375.

[32]Marquez Y， Brown J W， Simpson C， et al. Transcriptome survey reveals increased complexity of the alternative splicing landscape in Arabidopsis[J]. Genome Res.， 2012， 22（6）：1184-1195.

[33]Kalyna M， Simpson C G， Syed N H， et al. Alternative splicing and nonsense-mediated decay modulate expression of important regulatory genes in Arabidopsis[J]. Nucleic Acids Research， 2012， 40（6）：2454-2469.

[34]Filichkin S A， Priest H D， Givan S A， et al. Genome-wide mapping of alternative splicing in Arabidopsis thaliana[J]. Genome Res.， 2010， 20（1）：45-58.

[35]Kitagawa N， Washio T， Kosugi S， et al. Computational analysis suggests that alternative first exons are involved in tissue-specific transcription in rice （Oryza sativa） [J]. Bioinformatics， 2005， 21（9）：1758-1763.

[36]Sugio A， Dreos R， Aparicio F， et al. The cytosolic protein response as a subcomponent of the wider heat shock response in Arabidopsis[J]. The Plant Cell， 2009， 21：642-654.

[37]Matsukura S， Mizoi J， Yoshida T， et al. Comprehensive analysis of rice DREB2-type genes that encode transcription factors involved in the expression of abiotic stress-responsive genes[J]. Molecular Genetics & Genomics， 2010， 283：185-196.