血清ICAM-1、IL-6檢測(cè)聯(lián)合免疫熒光染色檢查對(duì)PPROM合并羊膜腔感染的預(yù)測(cè)意義

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(1.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院，陜西 西安 710061；2.陜西省榆林市第一醫(yī)院，陜西 榆林 719000)

未足月胎膜早破(preterm premature rupture of membrane，PPROM)是指孕婦在孕28～36+6周胎膜在產(chǎn)前出現(xiàn)自發(fā)性破裂[1]。早產(chǎn)是PPROM最為常見(jiàn)的并發(fā)癥[2-3]。在早期階段，患者臨床癥狀較輕，可能會(huì)出現(xiàn)肺炎、敗血癥，嚴(yán)重時(shí)新生兒將會(huì)出現(xiàn)神經(jīng)發(fā)育遲緩、腦性癱瘓等癥狀。有研究表明，15%～25%的PPROM患者將會(huì)出現(xiàn)羊膜腔感染，孕周越小時(shí)，患者出現(xiàn)羊膜腔感染的可能性更高[4-5]。因此，有必要尋找一些可有效預(yù)測(cè)PPROM合并羊膜腔感染患者病情的指標(biāo)，有助于改善孕婦的妊娠結(jié)局。細(xì)胞間黏附分子-1(inter-cellular adhesion molecule-1，ICAM-1)可介導(dǎo)細(xì)胞與外基質(zhì)互相黏附的糖蛋白，與免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)緊密相關(guān)[6]。白介素-6(interleukin-6，IL-6)是一種炎癥因子，可有效監(jiān)測(cè)孕婦的感染情況[7]。為此，本次研究探討血清ICAM-1、IL-6檢測(cè)聯(lián)合陰道分泌物免疫熒光染色對(duì)PPROM合并羊膜腔感染的預(yù)測(cè)意義，為臨床治療提供理論依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇陜西省榆林市第一醫(yī)院2016年2月到2017年2月期間收治的60例PPROM患者，作為為觀察組，年齡22～34歲，平均年齡為(26.1±2.8)歲，孕周為28～36+6周，均為單胎孕婦。選擇同期入院的正常孕婦60例，為對(duì)照組，年齡為23～35歲，平均年齡為(25.4±2.9)歲，孕周為29～36+6周，均為單胎孕婦。兩組患者的年齡、孕周等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本次研究均獲得患者及家屬知情同意后進(jìn)行。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn)

PPROM標(biāo)準(zhǔn)：①患者自覺(jué)有陰道流液；②窺器查看陰道后穹窿處存在液池或羊水從宮頸口流出；③流出液偏堿性；④陰道液干燥片經(jīng)檢查后出現(xiàn)羊齒狀結(jié)晶。以上癥狀具備第1項(xiàng)或者②～④項(xiàng)中的任一項(xiàng)確診。

羊膜腔感染標(biāo)準(zhǔn)：①產(chǎn)前或者產(chǎn)時(shí)的體溫連續(xù)兩次均超過(guò)37.5℃，并排除其他感染；②脈搏連續(xù)兩次超過(guò)100次/分，排除心臟病等其他病史；③胎心率基線較快，超過(guò)每分160次；④陰道分泌物出現(xiàn)膿性并存在異味；⑤子宮出現(xiàn)壓痛；⑥白細(xì)胞計(jì)數(shù)超過(guò)1.5×109/L，中性不低于0.9；⑦血沉超過(guò)65mm/h。以上1～3項(xiàng)和4～7項(xiàng)中各有一項(xiàng)出現(xiàn)陽(yáng)性確診?；颊呔螾PROM合并羊膜腔感染診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.2排除標(biāo)準(zhǔn)

排除標(biāo)準(zhǔn)如下：①患者具有妊娠并發(fā)癥、原發(fā)性高血壓、冠心病及糖尿病等病史；②近兩周內(nèi)患者具有發(fā)熱病史，體溫>37.5℃；③孕期尿液檢查后出現(xiàn)細(xì)菌性尿路感染，即清潔中段尿培養(yǎng)桿菌定量不低于105/mL或者球菌不低于104/mL，尿路出現(xiàn)刺激征、發(fā)熱、菌血癥等，患者出現(xiàn)膿尿。

1.3方法

觀察組患者在入院后破膜6h以內(nèi)、分娩時(shí)各抽取5mL的靜脈血。對(duì)照組患者在入院后、分娩時(shí)各抽取5mL靜脈血。兩組待檢血液經(jīng)3 000r/min離心，時(shí)間為15min，取其血清進(jìn)行檢測(cè)。觀察組患者在分娩后對(duì)胎盤(pán)胎膜進(jìn)行病理檢查，確定孕婦是否出現(xiàn)羊膜腔感染，之后取距離破口5cm處2cm×2cm全層胎膜組織，同時(shí)取胎盤(pán)周邊、中央胎盤(pán)各3cm×3cm組織，再通過(guò)10%福爾馬林進(jìn)行固定、病檢。應(yīng)用ELISA法對(duì)血液標(biāo)本中ICAM-1(EK0370，武漢博士德生物工程有限公司)、IL-6(ARB14012，北京百奧萊博科技有限公司)進(jìn)行檢測(cè)。以無(wú)菌棉拭子采集陰道4cm處內(nèi)側(cè)壁或者穹隆處分泌物，慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)數(shù)秒，將其放入采樣管后進(jìn)行檢驗(yàn)。

1.4觀察指標(biāo)

①I(mǎi)L-6>7.9ng/L時(shí)，判斷為陽(yáng)性；②ICAM-1≥112.6ng/mL判斷為陽(yáng)性，<112.6ng/mL為陰性；③陰道分泌物采用免疫熒光染色檢測(cè)，加德納菌、沙眼衣原體、白色念菌珠、淋病奈瑟球菌及滴蟲(chóng)的檢測(cè)方法及陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)參考試劑盒(深圳市邁科龍生物技術(shù)有限公司)說(shuō)明。聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，三項(xiàng)中有一項(xiàng)的診斷結(jié)果為陽(yáng)性即判斷為陽(yáng)性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1血清ICAM-1、IL-6水平及陰道分泌物免疫熒光染色陽(yáng)性率結(jié)果對(duì)比

與對(duì)照組相比，觀察組患者的ICAM-1、IL-6水平明顯更高，差異顯著(t值分別為10.346、10.595，均P<0.05)，觀察組陰道分泌物免疫熒光染色陽(yáng)性率較對(duì)照組高，差異顯著(χ2=43.621，P<0.05)，見(jiàn)表1。

組別例數(shù)(n)ICAM-1(ng/mL)IL-6(ng/L)免疫熒光染色陽(yáng)性率對(duì)照組60673.32±267.436.48±2.184(6.7)觀察組601 223.34±313.1214.23±5.2341(68.3)t/χ210.34610.59543.621P0.0000.0000.000

2.2兩組患者的陰道分泌物免疫熒光染色結(jié)果

觀察組患者的免疫熒光染色陰道感染情況較對(duì)照組更加嚴(yán)重，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(u=7.864，P<0.05)，見(jiàn)表2。

2.3觀察組羊膜腔感染與非感染者ICAM-1、IL-6水平和陰道分泌物免疫熒光染色陽(yáng)性率比較

在觀察組中，羊膜腔感染者的ICAM-1、IL-6水平顯著高于非感染者(t值分別為8.888、7.759，均P<0.05)，羊膜腔感染者的陰道分泌物免疫熒光染色陽(yáng)性率明顯高于非感染者，差異顯著(χ2=21.430，P<0.05)，見(jiàn)表3。

表2 兩組患者的免疫熒光染色結(jié)果[n(%)]

Table 3 Comparison of ICAM-1 and IL-6 levels and positive rates of immunofluorescence staining between amniotic cavity infection and non-infected

2.4血清ICAM-1、IL-6檢測(cè)聯(lián)合陰道分泌物免疫熒光染色預(yù)測(cè)PPROM合并羊膜腔感染的各項(xiàng)指標(biāo)

血清ICAM-1、IL-6檢測(cè)及陰道分泌物免疫熒光染色單獨(dú)預(yù)測(cè)PPROM合并羊膜腔感染的特異性、陽(yáng)性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)率及陰性預(yù)測(cè)率對(duì)比后差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為0.480、0.760、0.571、0.492，0.892、0.882、0.902、0.802，0.782、0.802、0.693，均P>0.05)。聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)PPROM合并羊膜腔感染的特異性、陽(yáng)性及陰性預(yù)測(cè)值高于單一指標(biāo)，差異顯著(χ2值分別為6.340、8.290、4.480，均P<0.05)，而敏感性與單一指標(biāo)相比差異不顯著(均P>0.05)，見(jiàn)表4。

表4血清ICAM-1、IL-6檢測(cè)聯(lián)合陰道分泌物免疫熒光染色預(yù)測(cè)PPROM合并羊膜腔感染的各項(xiàng)指標(biāo)[n(%)]

Table 4 Indexes of serum ICAM-1 and IL-6 test combined with immunofluorescence staining for predicting PPROM with amniotic cavity infection[n(%)]

3討論

3.1 PPROM及羊膜腔感染

羊膜腔感染是PPROM的常見(jiàn)并發(fā)癥，嚴(yán)重影響母嬰的生命健康[8-9]。因此，有必要及時(shí)診斷PPROM合并羊膜腔感染患者，改善孕婦的妊娠結(jié)局。目前，關(guān)于羊膜腔感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)主要有母體心率≥100次/min，胎兒心率≥160次/min，母體發(fā)熱≥38℃、羊水惡臭等[10-11]，但是多數(shù)患者的臨床特征并不明顯，難以早期及時(shí)診斷。羊水穿刺抽取羊水進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)可準(zhǔn)確診斷，但是羊水穿刺是一種侵入性操作，且結(jié)果等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，一般不易于被患者接受。胎盤(pán)胎膜病理檢查需要在孕婦分娩后方可進(jìn)行，難以有效預(yù)測(cè)。因此，需要尋找一種快速、準(zhǔn)確、非侵入性的指標(biāo)來(lái)預(yù)測(cè)PPROM合并羊膜腔感染。

3.2血清ICAM-1、IL-6及陰道分泌物免疫熒光染色與感染預(yù)測(cè)

IL-6是一種常見(jiàn)的免疫調(diào)節(jié)因子。在孕婦正常妊娠時(shí)，羊水中的IL-6水平較低。當(dāng)孕婦出現(xiàn)子宮內(nèi)感染時(shí)，IL-6水平會(huì)明顯升高[12]。ICAM-1含有505個(gè)氨基酸，廣泛分布在造血、非造血細(xì)胞中。ICAM-1可通過(guò)結(jié)合配體，促進(jìn)T細(xì)胞活化，并將白細(xì)胞從血管內(nèi)向炎癥部位進(jìn)行浸潤(rùn)，在炎癥及免疫反應(yīng)中具有重要的作用。目前，胎膜早破會(huì)造成產(chǎn)婦陰道內(nèi)環(huán)境發(fā)生變化，使得大量致病菌逆行而上，造成PPROM合并羊膜腔感染的發(fā)生[13]，因此對(duì)產(chǎn)婦陰道的病原體檢測(cè)有利于感染的監(jiān)測(cè)。

3.3血清ICAM-1、IL-6聯(lián)合陰道分泌物免疫熒光染色與PPROM合并羊膜腔感染預(yù)測(cè)

在本次研究中，對(duì)照組ICAM-1、IL-6水平及免疫熒光染色陽(yáng)性率均顯著低于觀察組，羊膜腔感染者ICAM-1、IL-6水平和免疫熒光染色陽(yáng)性率均顯著高于非羊膜腔感染患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。當(dāng)出現(xiàn)羊膜腔感染時(shí)，IL-6將大量進(jìn)入孕婦的羊水及母體血液中，造成羊水、血液中的IL-6水平升高。同時(shí)受炎性因子刺激之后，孕婦羊水中的ICAM-1明顯升高，且炎癥會(huì)提高組織、血管及胎盤(pán)絨毛血管屏障的通透性，造成ICAM-1進(jìn)入母體血流中。研究發(fā)現(xiàn)，血清ICAM-1濃度高低只與孕婦是否感染相關(guān)，而孕齡、分娩發(fā)動(dòng)均不會(huì)對(duì)血清ICAM-1濃度產(chǎn)生影響[14]，表明血清ICAM-1濃度是診斷PPROM合并羊膜腔感染的較好指標(biāo)。

在本次研究中，三項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)預(yù)測(cè)PPROM合并羊膜腔感染的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)PPROM合并羊膜腔感染的特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值高于單一指標(biāo)，差異顯著(均P<0.05)，而敏感性與單一指標(biāo)相比差異不顯著(P>0.05)。當(dāng)機(jī)體感染病原菌后，炎癥反應(yīng)會(huì)促進(jìn)羊膜上的溶酶體釋放磷脂酶A2，誘導(dǎo)宮縮，增加早產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)，當(dāng)病原體入侵造成羊膜腔感染時(shí)，將會(huì)激活單核巨噬細(xì)胞，釋放生物活性物質(zhì)，如IL-6、IL-8、干擾素等[15]，大量表達(dá)ICAM-1，使得羊水中的ICAM-1濃度升高，同時(shí)炎癥因子會(huì)提高組織、胎盤(pán)絨毛血管的通透性，導(dǎo)致ICAM-1進(jìn)入母體血液。由此可知，本文檢測(cè)結(jié)果提示三者聯(lián)合檢測(cè)可有效診斷PPROM合并羊膜腔感染。

總之，血清ICAM-1、IL-6檢測(cè)聯(lián)合陰道分泌物免疫熒光染色對(duì)PPROM合并羊膜腔感染預(yù)測(cè)的敏感性、特異性均較高，且可用于診斷PPRPOM合并羊膜腔感染，指導(dǎo)臨床治療。