HPLC法分析土壤中烯丙苯噻唑

段亞玲，楊 浪，李景壯，何 鈺，楊鴻波，譚 紅

（貴州省分析測試研究院，貴陽 550000）

烯丙苯噻唑是由日本明治制果株式會社研究開發(fā)的苯并噻唑類化合物，最初作為殺菌劑應用。20世紀末期，隨著活化酯的上市應用，抗病激活劑的理論也隨之誕生。烯丙苯噻唑通過激發(fā)作物系統(tǒng)獲得抗性，抵御病原菌侵害，實現防病效果[1]。烯丙苯噻唑用于防治水稻稻瘟病，由于其低毒，對水稻安全，已經成為東南亞稻區(qū)使用面積最廣的抗病激活劑[2]。烯丙苯噻唑的相關研究主要集中在合成[1,3]、對稻瘟病的防治效果等[4-9]。關于烯丙苯噻唑殘留的液相色譜分析方法報道較少，其殘留分析主要采用氣相色譜法[10-13]。氣相色譜檢測法雖然檢測限低，但樣品前處理較復雜，耗時多，且成本高。為評價烯丙苯噻唑在土壤環(huán)境中的安全性，本試驗以3種具有代表性的土壤（黑土、水稻土和紅壤）為研究材料，建立液相色譜法測定烯丙苯噻唑在土壤中的殘留。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Waters e2695高效液相色譜儀，美國Waters公司；超聲波清洗器，上?？茖С晝x器有限公司；LT1002T電子天平，常熟市天量儀器有限責任公司；XSE105DU電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；移液槍，德國Eppendorf股份公司。

烯丙苯噻唑標準品（99%），國家農藥產品質量監(jiān)督檢驗中心；乙腈（色譜純），德國Merck公司；甲醇（色譜純），美國Honeywell公司。

1.2 試驗材料

本試驗以黑土、水稻土、紅壤為試驗土樣，其中黑土采集于吉林省集安市，水稻土采集于貴州省關嶺縣稻田，紅壤采集于云南省宣威市。土壤樣品采集后，揀出碎石、砂礫及植物殘體等，風干后，研磨使其過2 mm篩，于4℃冰箱保存?zhèn)溆?。土壤的理化性質見表1。

表1 土壤理化性質

1.3 試驗方法

1.3.1 樣品處理

稱取20.0 g土壤（黑土、紅壤和水稻土）于250mL具塞三角瓶中，加入50 mL乙腈，將其置于超聲波中水浴超聲提取10 min，靜置后取上清液過0.45 μm有機濾膜，HPLC定量分析。

1.3.2 儀器條件

色譜柱：Shim-pack CLC-ODS（M）（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：V（乙腈）∶V（水）=70∶30；柱溫：25℃；流速：1.0 mL/min；檢測器：PAD；檢測波長：210 nm；進樣體積：10 μL。

2 結果與討論

2.1 檢測波長的選擇

采用Waters e2695高效液相色譜儀-二極管陣列檢測器對烯丙苯噻唑的標樣溶液進行波長掃描。結果顯示，在210 nm波長附近，烯丙苯噻唑吸收峰最大，且土壤樣品在此波長下無干擾峰，靈敏度滿足分析的要求。因此，烯丙苯噻唑的檢測以210 nm為檢測波長。

2.2 色譜柱的選擇

烯丙苯噻唑色譜分析方法的報道相對較少，而關于其液相色譜分析方法的報道更少。試驗比較了填料為C18和ODS的色譜柱在液相色譜儀上的分離情況。結果表明，填料為ODS的色譜柱分離效果較好，峰形對稱，出峰時間快。因此，選用Shim-pack CLC-ODS（M）色譜柱分析土壤中的烯丙苯噻唑。烯丙苯噻唑標準品色譜圖見圖1。

圖1 烯丙苯噻唑標準品色譜圖

2.3 提取溶劑的選擇

烯丙苯噻唑在丙酮、乙腈、甲醇中均具有較好的溶解性。姜忠濤等[11]在提取糙米中的烯丙苯噻唑時，先加入水超聲振蕩混勻10 min，再加入丙酮振蕩提取。劉照清等[13]提取土壤中烯丙苯噻唑時，加入10 g NaCl、100 mL乙腈于振蕩器上振蕩提取2 h。2種溶劑均具有較高的回收率，為85.8%～99.1%。本試驗比較了乙腈和甲醇對烯丙苯噻唑的提取效率。結果表明：烯丙苯噻唑在乙腈和甲醇中的平均回收率分別為97.1%和83.7%，滿足農藥殘留分析的要求。相對而言，乙腈的提取效率更高。因此，提取土壤中烯丙苯噻唑選擇乙腈為提取溶劑。

2.4 提取方式的選擇

試驗比較了超聲和振蕩2種方式下烯丙苯噻唑的提取回收率。結果表明，超聲10 min、20 min和30 min時的提取回收率無顯著差異，且與振蕩30 min的回收率相當，均超過95%。考慮時間等因素，故采用超聲10 min的方式來提取土壤中的烯丙苯噻唑。

2.5 標準曲線與線性范圍

準確稱取0.105 3 g（準確至0.1 mg）烯丙苯噻唑（質量分數為95%）于稱量瓶中，用乙腈少量多次溶解，轉移至100 mL容量瓶中，定容，搖勻制得1 000 mg/L烯丙苯噻唑母液，冷藏備用。分別移取不同體積的母液，配制成質量濃度分別為0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 mg/L的系列標樣溶液。以烯丙苯噻唑的質量濃度為橫坐標（x），響應峰面積為縱坐標（y），進行線性回歸，見圖2。

圖2 烯丙苯噻唑標準曲線

結果表明，烯丙苯噻唑的峰面積與質量濃度具有良好的線性相關性，線性方程為y=84 055 x＋884.79，R2=1.00。此條件下土壤中烯丙苯噻唑的保留時間約為4.0 min。

2.6 儀器的精密度

在1.3.2儀器條件下，待儀器基線穩(wěn)定后連續(xù)對同一質量濃度的烯丙苯噻唑標樣溶液（5.0 mg/L）進行6次平行測定，進樣量為10 μL，結果見表2。

表2 儀器精密度試驗

峰面積的變異系數（RSD）為0.67%，保留時間的RSD為0.09%。該方法重現性好，儀器精密度高。

2.7 方法的準確度和精密度

方法的準確度和精密度通過添加回收率和變異系數來表示[14]。在3種土壤中分別加入0.20 mL質量濃度為100.0、1 000.0 mg/L的烯丙苯噻唑標樣溶液，使添加質量分數分別為1.0、10.0 mg/kg，每組設5個平行試樣。土壤樣品經處理后，HPLC測定3種土壤中烯丙苯噻唑殘留量，結果見表3。由表3可以看出，烯丙苯噻唑在黑土、水稻土和紅壤中的平均添加回收率分別為96.2%～98.4%、98.0%～98.2%和96.4%～97.1%，RSD分別為1.3%～1.4%、0.8%～1.3%和1.1%～1.7%。方法的準確度和精密度均滿足農藥殘留分析要求[15]。烯丙苯噻唑在土壤中的添加色譜圖見圖3。

表3 烯丙苯噻唑在3種土壤中的平均添加回收率

圖3 烯丙苯噻唑在土壤中的添加回收譜圖（a—黑土、b—水稻土、c—紅壤）

2.8 最小檢出量和最低檢測濃度

以S/N=3和S/N=10計算最小檢出量（LOD）和最低檢測質量濃度（LOQ）。本方法中烯丙苯噻唑的LOD為1.0×10-9g，LOQ為0.2 mg/L。

3 結論

本文建立了一種液相色譜分析方法測定土壤中烯丙苯噻唑的殘留量。土壤樣品經乙腈超聲提取，靜置后過有機濾膜，HPLC-PAD直接測定。當添加質量分數為1.0～10.0 mg/kg時，烯丙苯噻唑在3種土壤中的平均添加回收率為96.2%～98.4%，RSD為0.8%～1.7%。方法最小檢出量為1.0×10-9g，最低檢測質量濃度為0.2 mg/L。方法分析速度較快，前處理簡單，準確度、精密度及靈敏度均滿足農藥殘留分析的要求，可用于土壤中烯丙苯噻唑殘留量的檢測。