文/宮春波 王朝霞 董峰光

我國淡水產(chǎn)品中副溶血弧菌污染現(xiàn)狀及其研究展望 // 副溶血弧菌作為常見的食源性致病菌之一，主要侵染海產(chǎn)品而導(dǎo)致食源性疾病發(fā)生。近年來監(jiān)測表明，淡水產(chǎn)品中副溶血弧菌污染率一直維持在較高的水平，并呈現(xiàn)上升趨勢。為了強(qiáng)化淡水產(chǎn)品中副溶血性弧菌的監(jiān)管和監(jiān)測，了解污染途徑和追溯污染源，構(gòu)建安全管理體系，分析了近10年來我國淡水產(chǎn)品中副溶血弧菌的污染現(xiàn)狀，探討了其可能污染原因，闡述了陽性菌株優(yōu)勢血清型、耐藥性以及毒力基因特點(diǎn)，并展望了未來研究趨勢，以期為了更好地控制淡水產(chǎn)品中副溶血性弧菌污染及減低其引發(fā)的食源性疾病提供借鑒。

食源性疾病為我國較為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題之一[1]，其主要誘因?yàn)橹虏∩镆蜃忧秩臼称匪隆，F(xiàn)階段病原微生物污染防控是食品安全的剛性需求，食品不合格的主因是微生物污染，也是導(dǎo)致食物中毒的主要原因[2]。細(xì)菌是我國食源性疾病的發(fā)生的主要致病菌，非傷寒沙門氏菌、副溶血性弧菌（Vibrio parahemolyticus，VP）和志賀氏菌(Shigella spp)是主要的3類食源性致病菌[1]，VP則是近20年來我國食源性疾病爆發(fā)的最常見的病原菌[3]，往往導(dǎo)致腹瀉、腹痛、惡心、嘔吐等典型腸胃炎現(xiàn)象。嚴(yán)重時(shí)會引起脫水和其它并發(fā)癥，甚至引起死亡[4]，海產(chǎn)品是VP首要的致病食品和媒介食品[1,5]。

1 近十年來文獻(xiàn)報(bào)道不同省份淡水產(chǎn)品中VP的污染狀況[9-14]

副溶血性弧菌嗜鹽畏酸，在無鹽培養(yǎng)基上，不能生長，3%～6%食鹽水繁殖迅速，屬于弧菌屬，G-的菌棒狀、弧狀、卵圓狀無芽孢菌，嗜鹽性是其主要特征，廣泛分布在海洋環(huán)境如海水、海底沉積物、海產(chǎn)品及鹽漬食品中[4,6]。然而，近年來研究表明淡水產(chǎn)品中VP污染率一直維持在較高的水平，并呈現(xiàn)上升趨勢，且陽性菌株血清型、耐藥性以及毒力基因呈現(xiàn)多樣化，污染水產(chǎn)品種類不斷拓寬。為了強(qiáng)化淡水產(chǎn)品中副溶血性弧菌的監(jiān)管和監(jiān)測，追溯污染源和污染途徑，以期降低或杜絕淡水產(chǎn)品中副溶血弧菌導(dǎo)致的食源性疾病的暴發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，筆者分析了近10年來我國淡水產(chǎn)品中VP的污染現(xiàn)狀，探討了其可能污染原因，展望了未來研究趨勢，希望能拋磚引玉，為了更好地控制淡水產(chǎn)品中VP污染及減低其引發(fā)的食源性疾病提供借鑒。

2 近十年來文獻(xiàn)報(bào)道不同城市（地級）淡水產(chǎn)品中VP的污染狀況[10,12,15-29]

我國淡水產(chǎn)品中VP污染具有普遍性

由于VP的嗜鹽特性，海產(chǎn)品中VP的污染狀況監(jiān)測以及菌株耐藥性、血清型、毒力基因等研究較多，表明海產(chǎn)品中VP污染較為嚴(yán)重，污染率25%～40%不等，最高到達(dá)80%[7]。對于淡水產(chǎn)品VP的調(diào)查，多為監(jiān)督抽檢，專項(xiàng)監(jiān)測始于2014年在6個(gè)省(自治區(qū))的內(nèi)陸地市開展的常見嗜鹽性弧菌的調(diào)查，表明淡水魚中存在VP污染，檢出率12.47%且養(yǎng)殖和存養(yǎng)水體均存在VP污染[8]。圖1是近十年（2005～2016年）來，各?。ㄊ校﹫?bào)道的淡水產(chǎn)品中VP污染水平，污染率數(shù)值范圍4.7%～41.4%，同省份按年度比較，山東、浙江具有逐年升高的趨勢，沿海與內(nèi)陸省份不存在明顯差異。具體到不同地級市調(diào)查報(bào)告[10,12,15-29]，圖2表明淡水產(chǎn)品中VP的污染率數(shù)值范圍1.39%～80.07%，與報(bào)道的海產(chǎn)品中污染率數(shù)值范圍較一致，說明VP是水產(chǎn)品中常見食源性致病菌。沿海和內(nèi)陸城市淡水產(chǎn)品中VP中的污染率沒有顯著差異，筆者認(rèn)為一方面與水產(chǎn)品跨區(qū)流通銷售交叉污染相關(guān)，另一方面淡水產(chǎn)品水體環(huán)境的變化導(dǎo)致VP生境改變，導(dǎo)致VP在淡水水體以及淡水產(chǎn)品中存活和生長。

考慮到年度不同，監(jiān)測樣本數(shù)量、樣本種類以及采樣環(huán)節(jié)的差異，導(dǎo)致各省份、各地市中淡水產(chǎn)品VP污染率的差異；但沿海、內(nèi)陸省份淡水產(chǎn)品中VP普遍檢出，尤其不同城市間淡水產(chǎn)品中VP檢出率普遍較高，且沿海與內(nèi)陸城市中淡水產(chǎn)品VP污染率無明顯差異，說明淡水產(chǎn)品中可能存在VP侵染的特定途徑及生長環(huán)境，與其嗜鹽性相悖，故需要針對淡水產(chǎn)品中VP污染水平、生化特征、血清分型、耐藥性、毒力基因以及分子水平分型和溯源等進(jìn)行連續(xù)、系統(tǒng)的研究，明確其污染途徑、污染源以及菌株特征和消長規(guī)律，制定防控措施，阻斷其侵染，降低其致病風(fēng)險(xiǎn)。

流通環(huán)節(jié)、餐飲環(huán)節(jié)淡水產(chǎn)品中VP污染較高

目前，調(diào)查分析表明流通環(huán)節(jié)淡水產(chǎn)品中VP污染率偏高，間接印證了交叉污染是淡水產(chǎn)品VP污染途徑之一。裴曉燕等調(diào)查發(fā)現(xiàn)，流通環(huán)節(jié)、餐飲環(huán)節(jié)淡水魚及其存養(yǎng)水體中VP檢出率遠(yuǎn)高于養(yǎng)殖環(huán)節(jié)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，淡水養(yǎng)殖場VP檢出率依次為淡水魚 5.81%、存養(yǎng)水體1.89%、水底沉積物1.50%[8]，考慮到養(yǎng)殖場中魚體、水體以及沉積物中VP存在與交叉污染無關(guān)，說明淡水產(chǎn)品中VP存在其他特定污染途徑，需要進(jìn)一步研究確認(rèn)。李海麟等也發(fā)現(xiàn)2006～2015年，廣州市超市、肉菜市場、零售店、批發(fā)市場中樣本VP檢出最高，其次為餐飲環(huán)節(jié)[19,29]，與李葉青等報(bào)道結(jié)果一致[20]，而農(nóng)貿(mào)市場高于超市，推斷農(nóng)貿(mào)市場攤位密集、擺放隨意，交叉污染嚴(yán)重于超市；餐飲單位VP較高污染，可能與加工流程和人員有關(guān)。同時(shí)考慮到海產(chǎn)品和淡水產(chǎn)品中VP污染水平因地域不同而差異較大，荊門市淡水產(chǎn)品和海水產(chǎn)品中VP檢出率均最高，分別為20.6%和 48.3%，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.001)，發(fā)現(xiàn)在淡水產(chǎn)品有較嚴(yán)重的弧菌污染情況[31]，而湖州市冰鮮保存淡水產(chǎn)品與鮮活保存海產(chǎn)品中VP檢出率最高，分別為66.67%、 37.50%[26]。表明淡水產(chǎn)品中VP污染途徑多樣，故針對流通環(huán)節(jié)、餐飲環(huán)節(jié)開展VP專項(xiàng)監(jiān)測，掌握VP污染途徑，以期阻斷其侵染降低風(fēng)險(xiǎn)，為當(dāng)前急需解決的問題。

第三季度（7～9月份）淡水產(chǎn)品中VP污染嚴(yán)重

副溶血弧菌生長溫度范圍為5.5℃～47.3℃，最適生長溫度為34.6℃[32]，因此溫度是VP生長的主要因子之一，加之我國7～9月份平均溫度最高分別為21～30℃、20～30℃、16～26℃，利于VP增殖，故7～9月份是淡水產(chǎn)品中VP高污染的時(shí)間節(jié)點(diǎn)。研究報(bào)道，2014～2016年湖州市VP檢出率在2～6月的檢出率相對較低，7～10月的檢出率相對較高，9月最高達(dá)55%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0. 001)[26]；2009～ 2014年 廣州市第3季度VP檢出率最高，為18.48%，其次為第2、1、4季度[19]；2011～2013年防城港市7～9月VP檢出率高于5月、6月、10月，因?yàn)橄那锛竟?jié)溫度適合VP大量增殖[20]；2015年浦東新區(qū)則是8月VP平污染率最高達(dá)到45.2%，1月份最低為20%[28]。

淡水產(chǎn)品中VP血清型、毒力基因型、耐藥性研究現(xiàn)狀

副溶血弧菌的血清型、毒力基因型以及耐藥性是其生物學(xué)特征，對于VP致病防控具有主要意義。尤其是VP分為致病菌株和非致病菌株，溶血素是VP致病的主要因素，包括：致熱性溶血素( thermostable direct hemolysin，TDH) 、 類溶血毒（thermo stable direct hemolysinrelated hemolysin，TRH)、不耐熱溶血素（Thermolabi lehemolysin，TLH），具有溶血活性、腸毒素和致死作用[33,34]，其毒力基因分別為Tdh、Trh。盡管淡水產(chǎn)品中VP生物學(xué)特征報(bào)道較少，但也表明O群為其主要血清型，毒力基因以Tdh-、Trh-、Tlh+為主，存在耐藥菌株（包括多重耐藥）。湖州市水產(chǎn)品中VP的血清型以O(shè)3血清型為主，其次為O4血清型,毒力基因型分以Tdh-、Trh-為 主， 占 42.08%[26]。 吳 青等報(bào)道分離80株VP，均為Tlh+、Trh-，1株Tdh+，O抗原分型率達(dá)到97.5%，主要為O2、O1、O5群，O2群為最主要占35%[12]；姚雪婷等分離到O1為優(yōu)勢血清型，其次O10，毒菌株則為O1和O3[13]。近十年來，淡水產(chǎn)品中分離的VP往往Tdh+攜帶率偏低[14,35]，且絕大部分是Tdh-、Trh-[10,14,18,23,35]；表明多為非致病菌株。耐藥性方面，張秀麗等報(bào)道分離80株VP同時(shí)耐鏈霉素、氨芐西林的有13株，耐復(fù)方新諾明、甲氧芐啶、鏈霉素有3 株[9]。

淡水產(chǎn)品中VP研究趨勢與展望

近十年來研究表明，我國淡水產(chǎn)品中VP污染率處在較高的水平，且分布廣泛，地域間污染率差異較大；流通環(huán)節(jié)中淡水產(chǎn)品的VP污染水平高，可能與交叉污染有關(guān)，但不排除淡水產(chǎn)品中VP有特定的污染途徑；第三季度是淡水產(chǎn)品中VP高污染的時(shí)間節(jié)點(diǎn)；淡水產(chǎn)品中分離的VP菌株多為O抗原群，Tdh-、Trh-、Tlh+菌株，非致病菌株占絕大多數(shù)，Tdh+菌株所占比例較低。盡管淡水產(chǎn)品VP研究時(shí)有報(bào)道，但卻未針對VP在淡水產(chǎn)品中消長規(guī)律、生物學(xué)特征、分子分型、溯源分析以及防控措施等方面進(jìn)行系統(tǒng)研究。

筆者認(rèn)為今后研究重點(diǎn)為，其一，借助于國家食源性致病菌監(jiān)測平臺開展淡水產(chǎn)品中VP專項(xiàng)監(jiān)測。將淡水產(chǎn)品中VP監(jiān)測納入國家監(jiān)測計(jì)劃，全國范圍開展專項(xiàng)監(jiān)測，涵蓋養(yǎng)殖環(huán)節(jié)、流通環(huán)節(jié)和餐飲環(huán)節(jié)，監(jiān)測樣本包含80%及以上淡水產(chǎn)品類別且包含環(huán)境樣本，進(jìn)行VP定量檢測，分析其污染特征及污染規(guī)律，明確污染源、污染途徑，陽性分離菌株進(jìn)行生化鑒定、血清分型、耐藥試驗(yàn)、分子分型、毒力基因以及與食源性疾病監(jiān)測VP菌株進(jìn)行溯源分析；其二，推進(jìn)水產(chǎn)品中VP快速檢測技術(shù)的研究，尤其是基于核酸指紋技術(shù)的敏感、高效、快速、可靠快檢技術(shù)的研發(fā)；其三，基于預(yù)測微生物學(xué)研究方法，尤其分子生物技術(shù)的應(yīng)用，構(gòu)建模型；探索淡水產(chǎn)品中VP在養(yǎng)殖、貯運(yùn)、銷售以及餐飲加工環(huán)節(jié)消長規(guī)律，尤其致病菌株生長規(guī)律，并結(jié)合地域膳食特點(diǎn)推進(jìn)食源性致病菌風(fēng)險(xiǎn)評估體系的建設(shè)；其四，針對水產(chǎn)品中食源性致病菌污染特征和消長規(guī)律，推進(jìn)防控措施的探索，積極推進(jìn)水產(chǎn)品養(yǎng)殖、貯運(yùn)、生產(chǎn)加工、銷售等環(huán)節(jié)的安全管理體系建設(shè)和應(yīng)用，實(shí)現(xiàn)對食源性污染的有效控制，降低食源性疾病發(fā)生。 ■