明膠空心膠囊中鉻含量檢驗方法研究

李文云

（山東步長神州制藥有限公司，山東菏澤274039）

0 引言

明膠空心膠囊是由明膠加輔料制成的空心硬膠囊，膠囊用明膠為動物的皮、骨、腱與韌帶中膠原蛋白經(jīng)適度水解后（酸法、堿法、酸堿混合法或酶法）純化得到的制品，或為上述不同明膠制品的混合物。2012年央視《每周質(zhì)量報告》報道，由廢舊皮革等制成的工業(yè)明膠膠囊流入修正藥業(yè)、海外藥業(yè)等九大藥企，樣品被檢出鉻含量嚴(yán)重超標(biāo)，最高鉻含量超標(biāo)達(dá)90余倍，涉及13個鉻超標(biāo)產(chǎn)品。鉻不僅會對肝臟、腎臟等器官產(chǎn)生危害，還會對血液系統(tǒng)及細(xì)胞造成破壞，導(dǎo)致骨骼方面的疾病，對神經(jīng)系統(tǒng)也有影響，并有致癌隱患，甚至還會影響人的遺傳基因DNA。因此，國家食藥監(jiān)局強(qiáng)調(diào)對于明膠空心膠囊鉻的檢驗，要求企業(yè)必須具備明膠空心膠囊鉻檢驗的能力，不能委托檢驗。企業(yè)必須保證使用的明膠空心膠囊的鉻含量合格，如所抽樣品鉻含量檢測不合格，將對其立案查處。

我司產(chǎn)品輔料均含有明膠空心膠囊，檢驗產(chǎn)品所用明膠空心膠囊中的鉻含量成為企業(yè)的一項重大任務(wù)。我司在鉻檢驗過程中，通過多次試驗，研究出了快速、準(zhǔn)確、操作簡單的樣品消解及鉻含量檢測方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器

FA2004N電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；WX-8000微波消解儀（上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司）；DKQ-1000智能控溫電加熱器（上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司）；240ZAA安捷倫石墨爐原子吸收儀（安捷倫公司）。

1.2 材料

硝酸（優(yōu)級純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 試驗用儀器的清洗

試驗用燒杯、容量瓶、滴定管、刻度吸管先用鹽酸溶液（濃鹽酸∶水=1∶1）浸泡1 h，后用硝酸溶液（濃硝酸∶水=1∶1）浸泡1 h，最后用超純水沖洗干凈。

原子吸收儀上的進(jìn)樣杯先放入盛有10%硝酸的燒杯中超聲30 min，后用超純水沖洗干凈。

消解罐使用前先用20%的硝酸浸泡24 h，后用超純水清洗干凈、晾干，備用。

2.2 明膠空心膠囊樣品的制備

精密稱取0.3 g明膠空心膠囊（康婦炎膠囊、消乳散結(jié)膠囊、宮瘤消膠囊）分別放入0～7號消解罐內(nèi)，用刻度吸管加入硝酸8 mL。另外，8、9號消解罐內(nèi)直接加硝酸8 mL，作為樣品空白。

把0～9號消解罐放入100℃水浴鍋中預(yù)消解30 min。預(yù)消解后取出，0號消解罐用帶有溫度和壓力傳感器的蓋子蓋好，安裝到框架中，放入消解儀內(nèi)的0號位置，并插入溫度探針和用于擰緊壓力傳感器導(dǎo)氣管的接頭。1～9號消解罐按上述步驟對應(yīng)裝入消解儀內(nèi)。

微波消解程序設(shè)置如表1所示。

對樣品進(jìn)行消解，消解結(jié)束后，確認(rèn)反應(yīng)罐體降溫到安全溫度（≤80℃）后將安全門打開，將標(biāo)準(zhǔn)罐（1～9號消解罐）移至通風(fēng)櫥內(nèi)；在消解爐腔內(nèi)將控制罐（0號消解罐）的導(dǎo)氣管接頭擰松，等壓力降到零，再將控制罐移至通風(fēng)櫥內(nèi)。從框架中取出套筒和內(nèi)罐，打開消解罐罐蓋，用少量的超純水將消解罐罐蓋上殘留的樣品洗入消解罐內(nèi)，將消解罐放入智能控溫電加熱器（設(shè)置溫度150℃）上趕酸，直至紅棕色蒸汽揮盡并剩余樣品1～2 mL時，用2%的硝酸轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，并用2%的硝酸定容，混勻，即得供試品溶液。

2.3 對照品溶液的制備

精密量取鉻單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液50μL，加入2%的硝酸溶液稀釋成50 mL，搖勻，再精密量取8～100 mL至容量瓶中，用2%的硝酸溶液稀釋，混勻，即得含鉻80 ng/mL的對照品溶液。

2.4 石墨爐原子吸收儀的調(diào)試

開機(jī)順序：打開高純氬氣瓶的開關(guān)，打開冷卻系統(tǒng)的開關(guān)（溫度要求，夏天25℃、冬天20℃），打開石墨爐儀器的開關(guān)，打開計算機(jī)上的石墨爐軟件，調(diào)節(jié)氬氣壓力至0.2 MPa，按要求安上鉻元素?zé)簟?/p>

將自動進(jìn)樣器取下，把石墨爐爐體搬出，優(yōu)化元素?zé)?，調(diào)節(jié)元素?zé)舻奈恢?，使光通量達(dá)到最大；把石墨爐爐體放回原來的位置，調(diào)節(jié)爐體位置，保證通過的光最多；把自動進(jìn)樣器放回原位置，調(diào)節(jié)自動進(jìn)樣器，保證進(jìn)樣針能準(zhǔn)確到達(dá)樣品杯的中心和石墨管的中心位置。

2.5 鉻含量測定方法的建立

使用石墨爐原子吸收儀測定明膠空心膠囊中的鉻含量時，打開石墨爐工作站軟件，設(shè)定下列相應(yīng)參數(shù)：

2.5.1 類型/模式

類型：Zeeman；元素：Cr；進(jìn)樣模式：自動配置。

2.5.2 測量

測量模式：峰高；校正模式：濃度；讀數(shù)次數(shù)：標(biāo)樣3次、樣品3次。

2.5.3 光學(xué)參數(shù)

燈電流：7.0 mA；波長：357.9 nm；狹縫：0.2 nm；扣背景：扣背景開。

2.5.4 石墨爐

石墨爐軟件程序升溫過程參數(shù)如表2所示。

2.5.5 標(biāo)樣

各標(biāo)樣濃度如表3所示。

有效下線濃度：0.000 0μg/L；有效上線濃度：40.000 0 μg/L；濃度小數(shù)位：2。

2.5.6 校正

曲線擬合法：新合理；曲線重校頻率：20；重置斜率頻率：20；重置斜率標(biāo)樣點：2。

表1 微波消解程序設(shè)置

表2 石墨爐軟件程序升溫過程參數(shù)

表3 各標(biāo)樣濃度

2.5.7 進(jìn)樣器

進(jìn)樣器程序參數(shù)如表4所示。

母液位置：51；制備液位置：52；母液濃度：80.000 0μg/L。

2.6 明膠空心膠囊鉻的石墨爐原子吸收進(jìn)樣

在母液位置51放80μg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的進(jìn)樣杯，在制備液位置52放2%硝酸的進(jìn)樣杯，樣品杯（1～10）位置依次放0～9號消解罐內(nèi)的樣品。

點開軟件上的石墨爐實用工具，對石墨爐高溫加熱進(jìn)行老化兩次，點“開始”圖標(biāo)開始進(jìn)樣。

2.7 明膠空心膠囊的鉻結(jié)果分析

明膠空心膠囊的鉻結(jié)果分析如表5所示。

表4 進(jìn)樣器程序參數(shù)

表5 明膠空心膠囊的鉻結(jié)果分析

根據(jù)2015版《中國藥典》規(guī)定，藥用膠囊中鉻的含量不得超過百萬分之二，即2 mg/kg。從表5可以看出，試驗所用3個品種的明膠空心膠囊中的鉻含量均低于2 mg/kg，符合國家規(guī)定。

3 結(jié)語

本文通過以上微波消解程序的設(shè)置，樣品消解時間大約在1 h左右，樣品不需要浸泡過夜，大幅節(jié)約了樣品處理所需的時間，同時減少了環(huán)境污染。此外，通過對石墨爐原子吸收儀硬件的優(yōu)化和軟件進(jìn)樣程序的研究，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)系數(shù)r=1.000 0，表明鉻濃度在0～80 ng/mL之間具有良好的線性關(guān)系，能準(zhǔn)確檢測處理好的樣品鉻含量，得到相對準(zhǔn)確的實驗結(jié)果。該測量方法操作性強(qiáng)，適用于明膠空心膠囊鉻元素的定量檢測。