不同染色配方下脂肪染色效果的比較

康 凌 金 燁 楊萬年

(華中師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 武漢 430079)

1 前言

“檢測生物組織中的脂肪”實(shí)驗(yàn)是人教版高中生物學(xué)必修1《分子與細(xì)胞》第2章第1節(jié)中的驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)。同時也是生物科學(xué)、生物技術(shù)專業(yè)大一年級學(xué)生植物學(xué)實(shí)驗(yàn)課程中的重要實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。在不同教材中都提供相應(yīng)的蘇丹Ⅲ或Ⅳ染料的配方，但在實(shí)際教學(xué)中，效果不甚理想，在顯微鏡下并未看到較清晰的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和明顯的橘黃色脂肪顆粒。這一現(xiàn)象可能受到以下因素的影響： ①染料的配方和配制操作過程出現(xiàn)問題；②由于徒手切片技能較差，導(dǎo)致切片較厚；③染色時間較短。

針對這些原因，對該實(shí)驗(yàn)操作進(jìn)行適當(dāng)簡化調(diào)整；同時以花生種子為材料，選擇了6組蘇丹Ⅲ或Ⅳ染色液配方進(jìn)行脂肪染色效果比較研究，篩選出染色效果良好且適用于課堂教學(xué)與學(xué)生操作的蘇丹染料配方。

2 實(shí)驗(yàn)材料與方法

2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑 實(shí)驗(yàn)材料為花生種子；主要試劑有蘇丹Ⅲ粉末、蘇丹Ⅳ粉末、95%乙醇、無水乙醇、甘油、丙酮、蒸餾水。

2.2 試劑配方 挑選現(xiàn)今較為成熟、便于配制的6組蘇丹Ⅲ染色液配方(表1)。

表1 6組蘇丹Ⅲ或Ⅳ染色液配方

(注： 除去第6組配方，其余5組配方試劑在加入95%乙醇后，均進(jìn)行過濾處理)

2.3 實(shí)驗(yàn)方法 參照人教版高中生物教材中“檢測生物組織中的脂肪”的實(shí)驗(yàn)操作步驟，略作修改。

(1) 制片 為使學(xué)生能夠獲得較薄的花生種子組織切片，在切片時操作略作改動： 首先，取溫水浸泡3～4h的花生種子，撕去種皮，分開兩瓣子葉；其次，取刀片，用刀片在子葉內(nèi)側(cè)輕輕一刮；最后，用鑷子夾住切開部位，小心撕取，可得到較薄的薄膜，置于滴有蒸餾水的載玻片上，并用鑷子小心攤平。

(2) 染色 延長染色時間，染色10min后，用50%的酒精洗去浮色。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

用顯微鏡觀察6組不同配方蘇丹染料染色的花生種子臨時切片，發(fā)現(xiàn)使用不同配方染料，染色效果存在差異(表1)。配方1、配方2染色效果較佳，花生種子切片中可觀察到大面積且分布均勻的橘黃/紅色顆粒；配方6雖然染色效果較好，但細(xì)胞中仍存在部分脂肪顆粒未被染色；配方3染料染色效果一般，花生種子切片中可觀察明顯的橘黃色顆粒，但有較多區(qū)域細(xì)胞中脂肪顆粒未被染色；配方4、配方5染料組在顯微鏡下可看到花生種子切片整體呈深褐色，僅在極少數(shù)細(xì)胞中找到零星幾顆橘黃色脂肪顆粒，且大多分布在切片邊緣細(xì)胞中，說明染料效果差。

6組配方染料染色效果從好到差依次為： 配方1/配方2、配方6、配方3、配方4和5。

表2 不同配方蘇丹Ⅲ或Ⅳ染色液對花生種子

4 結(jié)論

基于上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，使用配方1(0.1g蘇丹Ⅲ干粉+20mL 95%乙醇)與配方2(0.1g蘇丹Ⅲ干粉+20mL 95%乙醇+5mL甘油)染色液對花生種子臨時切片的染色效果最佳，均可觀察到細(xì)胞中含有大量明顯的橘黃色脂肪顆粒，且不需要添加丙酮等揮發(fā)性有毒試劑，對人體傷害較小。其中配方1不含甘油，消耗原材料較少、操作簡單，更為適合用于課堂教學(xué)。

(*通信作者)