口腔鱗狀細(xì)胞癌中VEGF與Ki-67的表達(dá)及意義

安義 張椽

（1貴州醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院口腔科 貴州 凱里 556000）

（2貴州醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院病理科 貴州 凱里 556000）

口腔鱗狀細(xì)胞癌（Oral Squamous Cell Carcinoma，OSCC）是口腔頜面部最常見的惡性腫瘤之一，約占口腔癌總數(shù)的80%以上。由于口腔癌具有早期廣泛淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的特點,而且約有60%的患者處于癌癥的第Ⅲ和Ⅳ期,其生存率很低，目前的臨床診斷和先進(jìn)的治療方法均不能有效地提高患者的生存率，其5年生存率并不理想，影響患者的生活質(zhì)量和健康[1-2]。探討OSCC的發(fā)病機(jī)制，對腫瘤標(biāo)記物的研究，可以有助于早期診斷與防治，但在OSCC中這兩種因子的表達(dá)和意義鮮有報道。本研究采用EnVision法檢測VEGF與Ki-67在OSCC中的表達(dá)情況，旨在探討其在OSCC中發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)性及與病理組織學(xué)分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在之間的關(guān)系，探討兩因子之間的相關(guān)性，為OSCC的診斷和治療提供幫助。

1.材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

收集貴州醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院2015—2018年間手術(shù)切除的30例口腔鱗癌組織存檔蠟塊及20例正常粘膜組織標(biāo)本。男性19例，女性11例；年齡31～83歲，中位年齡60歲；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移10例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例。標(biāo)本均為首次病例，參照WHO《頭頸部腫瘤病理學(xué)和遺傳學(xué)》（2006年版）中對口腔鱗狀細(xì)胞癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]進(jìn)行復(fù)閱、診斷并分組。術(shù)前均未接受化療或放療等治療。

1.2 試劑與方法

兔抗人VEGF單克隆抗體（ZA-0580）、兔抗人Ki-67單克隆抗體（ZA-0502）、PV-6001免疫組化檢測試劑盒(兔kit)、DAB顯色試劑盒和APES膠均采自北京中杉金橋生物有限公司。實驗方法簡述如下：每例標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)組織切片4μm厚，采用免疫組化EnVision法，按照試劑盒說明書操作步驟進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判定

VEGF中細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒者判定為陽性細(xì)胞，Ki-67中細(xì)胞核呈棕黃色顆粒者判定為陽性細(xì)胞。陽性結(jié)果判定根據(jù)Bee-sley和Mclaren分級方法[4]，按陽性細(xì)胞所占百分比并參考著色強度確定分級。用PBS作空白對照，用已知陽性O(shè)SCC切片作陽性對照。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析及處理

采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析處理，率用卡方檢驗，兩者之間的相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義判斷。

2.結(jié)果

本組30例OSCC，男性病例中VEGF表達(dá)陽性13（68.4%）例，Ki-67陽性表達(dá)14（73.7%）例；女性病例中VEGF表達(dá)陽性8（72.7%）例，Ki-67陽性表達(dá)9（81.8%）例。以中位年齡為界，分為“≤60歲組”和“＞60歲組”兩組。≤60歲組有15例，VEGF表達(dá)陽性10（66.7%）例，Ki-67陽性表達(dá)12（80.0%）例；＞60歲組有15例，VEGF表達(dá)陽性12（80.0%）例，Ki-67陽性表達(dá)11（73.3%）例。按組織分化程度分組，高分化組14例，中、低分化組16例，VEGF陽性率分別為42.9%（6/14）和75.0%（12/16），而高分化組和中低分化組Ki-67的陽性表達(dá)率分別為50.0%(7/14)和81.3%（13/16）。按是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，其中10例發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的OSCC組織7例VEGF表達(dá)陽性，8例Ki-67表達(dá)陽性，陽性率分別為70.0%和80.0%；而20例未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的OSCC組織中，VEGF和Ki-67表達(dá)陽性病例分別為12例和15例，陽性率分別為60.0%和75.0%。（表）

3.討論

VEGF是一種高度特異性的有絲分裂原，刺激血管生成，導(dǎo)致纖維蛋白的降解，其作用非常廣泛，與腫瘤的生長、浸潤、轉(zhuǎn)移和預(yù)后之間具有密切的關(guān)系。目前發(fā)現(xiàn)的主要受體有VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3。普遍共識是VEGF以旁分泌的方式調(diào)節(jié)腫瘤的血管形成，但也有證據(jù)表明，可能存在VEGF的自分泌機(jī)制，從而對腫瘤細(xì)胞分化產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用，對腫瘤細(xì)胞的凋亡發(fā)揮抑制作用，腫瘤細(xì)胞生成增多，由它介導(dǎo)的腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞增殖和腫瘤微血管的生成促進(jìn)了腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[5]。肖欣[6]研究VEGF和MMP-9在口腔扁平苔蘚（OLP）和OSCC中的表達(dá)情況，明顯高于在NOM中的表達(dá)，且在OSCC中表達(dá)更高，呈現(xiàn)逐漸增高的趨勢,提示VEGF可能與OLP的癌變存在密切聯(lián)系。顧玉州等[7]研究結(jié)果表明，VEGF在OSCC中表達(dá)率為71.25%,其陽性表達(dá)與腫瘤的頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及五年生存率有關(guān)(P＜0.05)。本研究中，VEGF在OSCC中的表達(dá)率為70%，與有關(guān)文獻(xiàn)基本一致，且提示OSCC組織中腫瘤血管明顯增多，以滿足腫瘤過度增生的需要[8-9]。Ki-67是Gerders等從霍杰金氏病L-428細(xì)胞株的粗提核成分接種小鼠制備而來的單克隆抗體，其功能目前認(rèn)為與細(xì)胞有絲分裂有關(guān)[10-11]，其表達(dá)水平與腫瘤惡性程度之間關(guān)系密切，可反映腫瘤細(xì)胞的增殖活性，與腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后高度相關(guān)。何偉[12]等研究Ki-67在NOM和OSCC中的陽性表達(dá)率分別為30.0%和79.2%，其在口腔鱗癌組織中的表達(dá)與腫瘤的臨床分期、分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。在本研究中Ki-67的陽性表達(dá)率為75.0%，其表達(dá)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），這與文獻(xiàn)報道的表達(dá)情況基本一致。本研究發(fā)現(xiàn)兩者之間無顯著性差異，這與Valkovic等的研究結(jié)果相符合，表明腫瘤新生血管形成和腫瘤細(xì)胞增殖并不是一直相互依賴的兩個過程。李培等[13]研究了Ki-67、VEGF和P16蛋白表達(dá)強度同PYM誘導(dǎo)化療敏感性的關(guān)系發(fā)現(xiàn)其均呈現(xiàn)高表達(dá)，表達(dá)程度越高，其細(xì)胞增殖越活躍，處于增殖狀態(tài)的細(xì)胞越多，因此對放療越敏感，PYM誘導(dǎo)化療的療效越好。

綜合分析本實驗研究，VEGF和Ki-67表達(dá)陽性的狀態(tài)與腫瘤的分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移因素密切相關(guān)，兩者表達(dá)具有正相關(guān)性。通過檢測VEGF和Ki-67的表達(dá)，對臨床治療與預(yù)后有間接指導(dǎo)意義，但VEGF和Ki-67之間相互促進(jìn)的關(guān)系及機(jī)制有待于進(jìn)一步研究證實。

表 OSCC中VEGF和Ki-67的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系