泉州洛江區(qū)雞沙門氏菌的分離鑒定及藥敏試驗

張阿娥 泉州市洛江區(qū)動物疾病預(yù)防控制中心 福建泉州 362011

沙門氏菌屬是一群寄生于人和動物腸道內(nèi)的無芽孢革蘭氏陰性桿菌[1]，雞的沙門氏菌?。ˋvian Salmonellosis）是由多種沙門氏菌引起的一類傳染病的總稱。主要有雞白痢沙門氏菌、雞傷寒沙門氏菌[2]，雞源沙門氏菌能在雞群中垂直感染，造成被感染成年雞產(chǎn)蛋性能下降、雛雞大批死亡，已成為危害養(yǎng)禽業(yè)的首要傳染病之一[3]?？咕幍膽?yīng)用，對控制和預(yù)防沙門氏菌病發(fā)揮了巨大作用，但因使用不當(dāng)或濫用，沙門氏菌的耐藥性有上升趨勢[4]，致使該病的治療難度越來越大。加強對該菌耐藥性的監(jiān)測，以減少養(yǎng)殖損失，已迫在眉睫。本文從洛江區(qū)部分養(yǎng)殖場發(fā)病雞中分離鑒定沙門氏菌，并分析分離菌株對多種藥物的敏感性，為預(yù)防控制洛江區(qū)當(dāng)前流行的沙門氏菌，在臨床合理科學(xué)選擇用藥上提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料 來自洛江區(qū)4個養(yǎng)雞場，從2018年3月至2018年4月疑似患沙門氏菌病的發(fā)病雞，采集剖檢后的內(nèi)臟。

1.1.2 培養(yǎng)基 營養(yǎng)瓊脂、SS瓊脂、三糖鐵瓊脂（TSI）培養(yǎng)基均購自青島海博生物技術(shù)有限公司。

1.1.3 HBI沙門氏菌生化鑒定條 （GB） 購自青島海博生物技術(shù)有限公司。

1.1.4 沙門氏菌屬診斷血清 沙門氏菌A～F群“O”多價診斷血清購自蘭州生物制品研究所。

1.1.5 藥敏紙片 購自杭州微生物試劑有限公司。1.2 方法

1.2.1 分離、純化 將剖檢采集的雞心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟組織，劃線接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、SS瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24 h觀察，挑取直徑約0.5 mm單菌落進行革蘭氏染色，將革蘭氏陰性短桿菌接種于TSI。

1.2.2 血清型鑒定 挑取TSI中呈陽性的菌落進行沙門氏菌A～F群“O”診斷血清玻片凝集試驗，設(shè)生理鹽水對照。

1.2.3 生化鑒定 取一內(nèi)盛2 mL無菌水或無菌生理鹽水試管，用接種針從平板上挑取單個菌落至無菌生理鹽水中研磨制成均一細菌懸液，在HBI沙門氏菌生化鑒定條的每孔加入100 μL菌懸液，其中衛(wèi)矛醇半固體采用穿剌接種，賴氨酸和氨基酸對照加滅菌石蠟覆蓋液面，37℃培養(yǎng)18～48 h，觀察生化指標(biāo)測定結(jié)果。

1.2.4 藥敏試驗 采用Kirby-Bauer紙片法，挑取單個菌落接種于營養(yǎng)培養(yǎng)液中，37℃培養(yǎng)24 h；用無菌生理鹽水稀釋制成0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)的菌懸液，吸取適量菌液于營養(yǎng)瓊脂平板內(nèi)，在其表面均勻涂布，蓋上平板，室溫放置5 min，用無菌小鑷子夾取各種藥敏紙片，平貼于瓊脂表面，然后倒置于37℃培養(yǎng)16～18 h。觀察測量藥敏紙片周圍抑菌圈直徑（d），d＞15 mm為高度敏感，10.1 mm＜d≤15 mm為中度敏感，d≤10 mm為耐藥。

2 結(jié) 果

2.1 分離培養(yǎng)特性 在營養(yǎng)瓊脂平板上，菌落呈針尖大小“露珠狀”，圓形、微隆起、光滑濕潤、半透明或灰白色、邊緣整齊；在SS營養(yǎng)瓊脂平板上，菌落透明、邊緣灰白、中心為黑色；三糖鐵培養(yǎng)基斜面為紅色，底層產(chǎn)硫化氫為黑色；取單個菌落涂片，革蘭氏染色鏡檢，可見菌體呈紅色、兩端鈍圓、短桿狀，單個、成對或成叢排列。以上分離菌株的選擇性培養(yǎng)特性均符合沙門氏菌特征。

2.2 玻片凝聚試驗 將分離菌株與沙門氏菌 A～F多價血清進行玻片凝集反應(yīng)，有6株呈現(xiàn)強陽性。

2.3 生化特性 從生化反應(yīng)結(jié)果可以看出 （見表1），分離的菌株能分解山梨醇、甘露醇，不發(fā)酵水楊苷和衛(wèi)矛醇；不能利用丙二酸鹽，不能分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚，不分解尿素，在氰化鉀培養(yǎng)基上不生長，具有賴氨酸脫羧酶，ONPG反應(yīng)陰性。以上生化試驗結(jié)果均符合沙門氏菌特性。

表1 分離菌株的生化反應(yīng)結(jié)果

表2 12株沙門氏菌藥敏試驗結(jié)果

2.4 藥物敏感性試驗 從表2可以看出，沙門氏菌對不同藥物的敏感度不同。其中，對恩諾沙星、阿米卡星最敏感，敏感率分別為100%、91.7%；其次為頭孢克洛，敏感率為83.3%；對氟苯尼考、林可霉素、慶大霉素、泰妙菌素、替米考星、阿莫西林的敏感率范圍較寬，在8.3%～41.7%；對強力霉素、阿奇霉素、青霉素、氨芐西林敏感率為零，產(chǎn)生耐藥性。

3 討 論

3.1 細菌分離鑒定 從洛江區(qū)部分養(yǎng)殖場發(fā)病雞的內(nèi)臟進行細菌分離，通過在選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)、細菌學(xué)形態(tài)觀察、細菌生化試驗及血清學(xué)鑒定，結(jié)果顯示分離的細菌各項指標(biāo)符合雞沙門氏菌特性。同時，結(jié)合發(fā)病雞出現(xiàn)的排漿糊狀糞便、“糊肛”及剖檢時觀察到肝臟有灰白色針尖狀壞死點等特征，也符合雞感染沙門氏菌的臨床表現(xiàn)，確定洛江區(qū)部分養(yǎng)殖場發(fā)病雞內(nèi)臟分離出的細菌為雞沙門氏菌。

3.2 科學(xué)有效用藥 一直以來，抗生素都是用于治療沙門氏菌病的首選方法，由于飼料中抗生素含量過高和臨床上長期盲目使用同一種抗生素等因素，導(dǎo)致沙門氏菌對部分藥物敏感性下降、產(chǎn)生了耐藥性。從藥物敏感試驗結(jié)果可以看出，從洛江區(qū)不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)分離出的雞沙門氏菌，對藥物的敏感率從0到100%不等，值得關(guān)注的是，分離的細菌對強力霉素、青霉素、氨芐西林和阿奇霉素產(chǎn)生了耐藥，與De O-liveira等報道的結(jié)果基本一致[6]。因此，在洛江區(qū)臨床上不應(yīng)再選擇前述4種藥物用于治療雞沙門氏菌病，可將恩諾沙星、阿米卡星作為預(yù)防和治療該病的首選藥物。

4 結(jié) 論

臨床上選擇藥物用于治療沙門氏菌病，宜先進行藥敏試驗，選出敏感藥物后再進行有效治療，同時，要注意定期進行交叉和輪換用藥，避免產(chǎn)生耐藥性。此外，因雞沙門氏菌可垂直傳播，杜絕雞群發(fā)生雞沙門氏菌病最直接、最有效的辦法，還是要建立健全檢疫制度，堅決嚴格淘汰帶菌雞，建立無菌雞群，消滅傳染源，切斷垂直傳播鏈條，以徹底消滅雞沙門氏菌病。同時，在日常的養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中，應(yīng)注重做好雞沙門氏菌病的預(yù)防控制工作，定期做好雞舍消毒，加強溫度、濕度、通風(fēng)等飼養(yǎng)條件的管控，不斷改善飼養(yǎng)環(huán)境，提高雞群健康水平，減少用藥，減輕對沙門氏菌的選擇性壓力，延緩細菌產(chǎn)生耐藥性的進程，降低細菌產(chǎn)生耐藥性幾率。