幾種牛結(jié)核病檢疫方法在結(jié)核污染牛群中的應(yīng)用研究的認(rèn)識(shí)

吳肅

摘 要：文章主要針對(duì)幾種牛結(jié)核病檢疫方法在結(jié)核污染牛群中的應(yīng)用進(jìn)行分析，結(jié)合當(dāng)下牛結(jié)核病檢疫方法發(fā)展現(xiàn)狀，從實(shí)驗(yàn)材料與方法、研究結(jié)果、研究分析方面進(jìn)行深入研究與探索，更好的推動(dòng)牛結(jié)核病檢疫方法的發(fā)展與進(jìn)步。

關(guān)鍵詞：牛結(jié)核病；檢疫方法；結(jié)核污染

隨著我國(guó)畜牧業(yè)的快速發(fā)展，牛結(jié)核病情在我國(guó)的蔓延程度也逐漸加快，使得人們對(duì)于其檢疫方法逐漸重視，并通過科學(xué)方法實(shí)現(xiàn)對(duì)牛結(jié)核病的預(yù)防與控制。但當(dāng)前我國(guó)經(jīng)常使用的方法為皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)，而對(duì)其的運(yùn)用也缺少相應(yīng)的成熟性。一些發(fā)達(dá)國(guó)家則長(zhǎng)使用皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)與γ-干擾素等試驗(yàn)方法，進(jìn)而在其良好的檢測(cè)效果影響下，使得其受到了人們的廣泛關(guān)注與認(rèn)同。

一、研究材料與方法

1.研究材料。首先，準(zhǔn)備較為完善的單純牛型提純結(jié)核菌素（PPD）與像一個(gè)的試劑盒。其中變態(tài)反應(yīng)試劑主要分為進(jìn)口牛型提純的PPD與禽型提純的PPD，同時(shí)還配備良好的牛結(jié)核分枝桿菌，即γ-干擾素檢測(cè)試劑盒。其次，研究使用的牛群主要為我國(guó)某地區(qū)2880頭活牛。

2.研究方法。其一，牛結(jié)核皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)。其主要結(jié)合我國(guó)有關(guān)部門制定的《動(dòng)物結(jié)核并診斷技術(shù)》標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行科學(xué)的研究與處理。其二，歐美對(duì)比變態(tài)反應(yīng)。其與牛結(jié)核變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)具有較強(qiáng)的相似性，也就是在對(duì)PPD注射的基礎(chǔ)上，在牛境位置的其他位置（最好為另一側(cè)）一同注射注射進(jìn)口牛型與禽型PPD，而兩者之間的間隔應(yīng)為12厘米至15厘米之間，注射計(jì)量為每頭牛3000IU與2500IU。其中注射前后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果檢測(cè)應(yīng)有同一人完成。其三，γ-干擾素檢測(cè)。這種實(shí)驗(yàn)可分兩個(gè)方面：一方面為抗原刺激。對(duì)每頭牛都采集5mL肝素抗凝血液，并在室溫環(huán)境下30小時(shí)內(nèi)運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)位置。接著將各抗凝血提取1.5mL防止在3個(gè)孔洞中，在使用100μL牛型PPD、禽型PPD、陰性對(duì)照；磷鹽酸緩沖液等添加至抗凝全血中，在均勻攪拌后放置時(shí)在二氧化碳含量為5%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16小時(shí)，其中培養(yǎng)箱溫度為37℃。同時(shí)在使用移液器對(duì)培養(yǎng)的上清液進(jìn)行吸取，并將其防止在0.5mL離心管中，這就是刺激形成的γ-干擾素上清。對(duì)其可第一時(shí)間使用相應(yīng)的設(shè)備進(jìn)行檢測(cè)或進(jìn)行冷凍存儲(chǔ)，在條件與時(shí)間等允許時(shí)在進(jìn)行檢測(cè)。另一方面為γ-干擾素酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)。即在單抗包被板上的各個(gè)孔洞中添加50μL樣品稀釋液，接著在加入50μL待檢測(cè)樣品，在混合后放置在室溫環(huán)境中一小時(shí)左右，這時(shí)在各孔洞中加入100μL酶標(biāo)抗體。并在背光的室溫環(huán)境下放置30min后添加終止液，步步高對(duì)其OD值進(jìn)行檢測(cè)。若牛型PPD刺激上清OD值大于0.1，則明證其為陽(yáng)性，若小于則為陰性。其四，頸部變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)。對(duì)該實(shí)驗(yàn)附近各散戶牛群共13587頭活畜進(jìn)行國(guó)內(nèi)的單純頸部變態(tài)反應(yīng)檢疫處理。其五，歐盟比較變態(tài)反應(yīng)。對(duì)在進(jìn)行頸部變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)后檢測(cè)為陽(yáng)性的牛進(jìn)行比較變態(tài)反應(yīng)研究、γ-干擾素檢測(cè)以及病理解刨檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)，并通過實(shí)驗(yàn)數(shù)發(fā)展，這幾種牛結(jié)核病檢疫方法的陽(yáng)性符合率。

二、研究結(jié)果

對(duì)該研究地區(qū)附近共13587頭活畜進(jìn)行頸部變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)后，檢測(cè)為陽(yáng)性的數(shù)量為45頭。以此為基礎(chǔ)進(jìn)行比較試驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)，通過比較變態(tài)反應(yīng)研究的牛型與禽型PPD分為20頭與6頭、γ-干擾素檢測(cè)發(fā)現(xiàn)牛型與禽型PPD分為28頭與3頭，而通過病理解剖發(fā)現(xiàn)具有病變數(shù)量為24頭。

三、研究分析

1.牛結(jié)核活禽檢疫方法的選擇。當(dāng)前對(duì)于牛結(jié)核病的診斷措施通常為病原學(xué)診斷與免疫學(xué)診斷，其中病原學(xué)診斷可分為細(xì)菌學(xué)檢測(cè)與分子生物學(xué)檢測(cè)兩種技術(shù)。而在發(fā)達(dá)國(guó)家中經(jīng)常使用細(xì)菌學(xué)診斷方法，但因其分枝桿菌的生長(zhǎng)較為緩慢，使得這種方法在使用時(shí)需要消耗大量的時(shí)間。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)揮，一些研究人員創(chuàng)建了PCR對(duì)牛結(jié)核病進(jìn)行診斷，各種試驗(yàn)結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)其敏感性相對(duì)較弱，其原因可能與體內(nèi)分支桿菌的繁殖特性具有一定的關(guān)聯(lián)。同時(shí)這些方法需要對(duì)死亡家禽病料進(jìn)行收集，所以病原學(xué)檢測(cè)不太符合活禽檢疫需求。另外免疫學(xué)檢測(cè)方法可分為抗體檢測(cè)與細(xì)胞免疫檢測(cè)兩種方法，而其牛結(jié)核的免疫主要以免疫細(xì)胞為基礎(chǔ)，這也使得抗體檢測(cè)敏感度相對(duì)較小，所以當(dāng)前在牛結(jié)核臨床診斷期間，細(xì)胞免疫學(xué)診斷方法有著較為廣泛的使用。

2.干擾素實(shí)驗(yàn)分析。當(dāng)前牛γ-干擾素實(shí)驗(yàn)檢測(cè)有著有著較為廣泛的使用與寬闊的發(fā)展空間，并逐漸成為發(fā)達(dá)國(guó)家主要的牛結(jié)核并檢疫方法。其中γ-干擾素試驗(yàn)與進(jìn)口比較變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)都有著較強(qiáng)的符合率，同時(shí)還可在實(shí)驗(yàn)中對(duì)直接進(jìn)行這一試驗(yàn)，使其判斷結(jié)果具有較強(qiáng)的客觀性，與皮試試驗(yàn)相比較，試驗(yàn)所需要使用的時(shí)間也相對(duì)較短。若在特殊條件下以γ-干擾素試驗(yàn)為基礎(chǔ)與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)檢疫結(jié)果為陽(yáng)性的牛進(jìn)行撲殺時(shí)，會(huì)有效的降低牛不殺數(shù)量，避免養(yǎng)殖人員出現(xiàn)不必要的經(jīng)濟(jì)損失。與此同時(shí)，這種方法還可與布病檢疫進(jìn)行有機(jī)結(jié)合，即在進(jìn)行一次抽血后可對(duì)兩種病疫進(jìn)行科學(xué)的檢測(cè)。所以這也使得γ-干擾素試驗(yàn)在牛結(jié)核病檢疫中有著較為廣闊的發(fā)展空間。同樣這一方法也存在著相應(yīng)的不足與缺陷，其中檢測(cè)成本較高以及需要在具有較強(qiáng)水平實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行檢測(cè)是其主要的問題之一。

3.比較變態(tài)反應(yīng)分析?，F(xiàn)階段，各發(fā)達(dá)國(guó)家主要以比較變態(tài)反應(yīng)為基礎(chǔ)對(duì)結(jié)核檢測(cè)為陽(yáng)性牛群進(jìn)行捕殺。我國(guó)相關(guān)研究實(shí)驗(yàn)也證明了，比較變態(tài)反應(yīng)可較好對(duì)一些禽類PPD陽(yáng)性牛進(jìn)行清除，但卻認(rèn)為禽型PPD陽(yáng)性主要是由禽分支桿菌引發(fā)的非特異反應(yīng)。在該次實(shí)驗(yàn)中，這種檢測(cè)方法的陽(yáng)性符合率約為47.8%，與γ-干擾素試驗(yàn)的陽(yáng)性符合率66.7%相比較小。而其禽型檢出率卻遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于γ-干擾素試驗(yàn)，其主主要原可能為人們操作以及主觀分析判斷期間相關(guān)因素所導(dǎo)致。

4.病理解剖檢測(cè)。對(duì)病牛尸體進(jìn)行解剖，進(jìn)而較為直觀的分析與觀測(cè)結(jié)核病位置，這也是得該方法具有較強(qiáng)的直觀性。在該次研究期間，病理解刨與常規(guī)的PPD變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)的符合率都相對(duì)較小，而比較變態(tài)試驗(yàn)與γ-干擾素試驗(yàn)的符合率則相對(duì)較高，這也在一定程度上表明了存在禽類結(jié)核的干擾，并充分的證明了γ-干擾素試驗(yàn)與比較變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)具有較強(qiáng)的精準(zhǔn)性。與此同時(shí)，在病理解刨期間若沒有發(fā)現(xiàn)結(jié)核病灶時(shí)，也不可證明其沒有感染結(jié)核病癥，其中病理解剖還有著相應(yīng)的危險(xiǎn)性，因此在臨床普查中的推廣受到阻礙。

四、結(jié)語(yǔ)

綜上所述，通過實(shí)際分析與研究后可以發(fā)現(xiàn)，國(guó)產(chǎn)PPD檢測(cè)仍屬于我國(guó)當(dāng)前進(jìn)行牛結(jié)核病檢疫期間，需要不斷進(jìn)行推廣與優(yōu)化的主要技術(shù)與方法。該方法可較為良好的檢測(cè)出結(jié)核剛性牛，同時(shí)在輔助其他方法可更好的實(shí)現(xiàn)其發(fā)展與進(jìn)步。

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