熟地黃多糖聯(lián)合同步放療對(duì)鼻咽癌增殖轉(zhuǎn)移的影響研究*

李 哲，劉樹(shù)佳，翁玉玲，陳進(jìn)杰，陳加家

1.廣東省東莞市萬(wàn)江醫(yī)院(東莞523000)，2.廣東省東莞市人民醫(yī)院(東莞523000)

主題詞 鼻咽腫瘤/治療 熟地黃 放射療法

鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma，NPC)是我國(guó)南方局部地區(qū)和東南亞發(fā)病率較高的惡性腫瘤?；颊弑茄示植?多位于鼻咽腔側(cè)壁)表現(xiàn)為細(xì)胞病理學(xué)的改變，從而影響到病變部位的解剖結(jié)構(gòu)，該病患者往往并不適合手術(shù)治療[1-3]。熟地黃多糖(Rehmanniae glutinosa polysaccharide，RGP)是熟地黃的主要有效成分之一，可以影響TNF-α JAK/STATs信號(hào)通路調(diào)控基因，調(diào)控鼻咽癌細(xì)胞TNF-α、STAT3表達(dá)，進(jìn)而展現(xiàn)抗腫瘤活性，促使鼻咽癌細(xì)胞凋亡，下調(diào)其遷移活性的作用[4]。為了探究熟地黃多糖聯(lián)合同步放療對(duì)鼻咽癌增殖轉(zhuǎn)移的影響，特進(jìn)行了臨床對(duì)照研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

對(duì)象與方法

1 研究對(duì)象 2016年8月至2017年11月期間，隨機(jī)抽取門(mén)診中符合研究要求的患者160例。所有患者均已簽署知情同意書(shū)，本研究獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。其診斷、納入和排除標(biāo)準(zhǔn)具體如下。診斷標(biāo)準(zhǔn)：符合中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)制定的鼻咽癌診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者預(yù)期生存期在6個(gè)月以上；年齡18歲以上；患者入院初未接受過(guò)化療、放療；無(wú)精神疾病可積極配合治療有良好依次性；對(duì)治療用藥無(wú)相關(guān)禁忌證、明顯過(guò)敏反應(yīng)；KPS評(píng)分大于等于70分[5-7]。排除標(biāo)準(zhǔn): 經(jīng)檢查發(fā)現(xiàn)、其他惡性腫瘤，曾接受化療、放療、靶向藥物治療，患者病灶出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，女性患者有妊娠、哺乳現(xiàn)象，未簽署知情同意書(shū)，無(wú)法良好配合、依從性差者。排除標(biāo)準(zhǔn)：排除合并有心臟病、心功能障礙或合并有其他消耗性疾病者；排除妊娠或哺乳期患者；已經(jīng)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者；排除合并有其他惡性腫瘤病史的患者；依從性不強(qiáng)，不按照試驗(yàn)要求進(jìn)行治療及病情觀(guān)察者；有嚴(yán)重肝腎功能不全的患者。

2 分組及治療方法 根據(jù)患者入院時(shí)間單雙日進(jìn)行1∶1匹配，均分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組均為80例患者，其具體治療方法如下。①對(duì)照組(順鉑單藥進(jìn)行同步放療)，具體根據(jù)NCCN指南推薦順鉑周方案同步放化療。具體方法如下：入院后使用CT掃描、定位患者放療區(qū)域，結(jié)合MRI影像(或PET-CT)標(biāo)記腫瘤靶區(qū)(GTVnp、頸部淋巴轉(zhuǎn)移灶(GTVnd)、高危臨床靶區(qū)域(CTV1)、低危臨床預(yù)防照射區(qū)(CTV2)。患者取仰臥位，每日1次使用瓦里安生產(chǎn)直線(xiàn)加速器進(jìn)行放射治療，其中腫瘤靶區(qū)劑量為70 Gy，頸部淋巴轉(zhuǎn)移灶劑量為68 Gy，臨床靶區(qū)1、靶區(qū)2 劑量分別為62 Gy、52 G y，4次/周，累積放射30次左右[8-10]。②實(shí)驗(yàn)組(同步放療基礎(chǔ)上使用熟地黃多糖進(jìn)行聯(lián)合治療)：在對(duì)照組中同步放療基礎(chǔ)上使用熟地黃多糖(每天服用熟地黃多糖提取物，劑量為5 g，每次加水中服用)進(jìn)行聯(lián)合治療[11]。

3 觀(guān)察項(xiàng)目 患者入院初進(jìn)行基本情況(性別、臨床分期、病理類(lèi)型、年齡、病程等)的數(shù)據(jù)采集，化療前后進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)，化療后評(píng)估臨床療效，具體內(nèi)容包括如下幾點(diǎn)。①CNE細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率：采用MTT法檢測(cè)CNE細(xì)胞的增殖抑制率，將細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)后按每孔(10×10/ml)細(xì)胞接種于96孔板，每孔加入10 μl MTT試劑(5 mg/ml)繼續(xù)培養(yǎng)4 h后移出。棄上清液，每孔加入160 μl DMSO在微量振蕩器上振蕩大約12 min，直至完全溶解。用酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度，空白組調(diào)零，記錄各組檢測(cè)結(jié)果，按照公式細(xì)胞抑制率(%)=(1-實(shí)驗(yàn)組值A(chǔ)490/對(duì)照組值A(chǔ)490)×100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)5次，取平均值[12-15]。②Bcl-2、Bax、Caspase-3 表達(dá)含量：抽取患者清晨空腹靜脈血，肝素抗凝，PBS 混勻稀釋?zhuān)苽浼?xì)胞裂解液，加入等體積淋巴細(xì)胞分離液，低速離心后輕輕吸取淋巴細(xì)胞層液體， RPMI1640 洗滌5次。加入含10.0%FBS 的RPMI1640 培養(yǎng)液將細(xì)胞重懸，常溫下培養(yǎng)10 h，去除貼壁細(xì)胞。采用熒光分光光度計(jì)分析法檢測(cè)Bcl-2、Bax、Caspase-3含量，檢測(cè)條件為激發(fā)光波長(zhǎng)380 nm，發(fā)射光波長(zhǎng)為430～460 nm[14，16-18]。③淋巴細(xì)胞亞群：采用流式細(xì)胞儀測(cè)定淋巴細(xì)胞亞群，將分離純化后的淋巴細(xì)胞收集并調(diào)整至(5× 106個(gè)/ml)，鋪板后在常溫下進(jìn)行培養(yǎng)。加入等體積PBS溶液培養(yǎng)76 h，流式細(xì)胞儀測(cè)定CD80(+)、CD86(+)百分比。④臨床療效：分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩(wěn)定(SD)及進(jìn)展(PD)，臨床有效=CR+PR。完全緩解，腫瘤減少50.0%以上，用藥治療后癥狀明顯改善，經(jīng)檢查各項(xiàng)生命體征穩(wěn)定；部分緩解，腫瘤減少30%以上，且病癥有改善，各項(xiàng)生命體征檢查趨于平穩(wěn)；穩(wěn)定，腫瘤增加在15%以下或減少30%以下；進(jìn)展，疾病癥狀未改善，病情加重治療無(wú)效[19]。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS l8.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件建立數(shù)據(jù)庫(kù)并分析，多組計(jì)數(shù)資料的比較使用卡方檢驗(yàn)(T<1的情況下使用精確概率)，正態(tài)分布計(jì)量資料的比較使用兩個(gè)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)的方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取0.05，雙側(cè)概率。

結(jié) 果

1 兩組患者基本情況比較 見(jiàn)表1。兩組患者性別、臨床分期、病理類(lèi)型、年齡、病程指標(biāo)差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 兩組患者基本情況比較

2 兩組患者治療前后CNE細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率比較 見(jiàn)表2。兩組患者治療前后CNE細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率的比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，隨著時(shí)間遷移，CNE細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率呈現(xiàn)顯著上升趨勢(shì)。治療前和治療1周后比較，兩組患者CNE細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療4周和治療8周后比較，CNE細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)組CNE細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率顯著高于對(duì)照組。

3 兩組患者治療前后Bcl-2、Bax、Caspase-3 表達(dá)含量比較 見(jiàn)表3。兩組患者治療前后Bcl-2、Bax、Caspase-3 表達(dá)含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，隨著時(shí)間遷移，Bcl-2表達(dá)含量呈現(xiàn)顯著下降趨勢(shì)，Bax、Caspase-3 mRNA表達(dá)含量呈現(xiàn)顯著上升趨勢(shì)。治療前和治療1周后比較，兩組患者Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表達(dá)含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療4周和治療8周后比較，Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表達(dá)含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)組Bcl-2表達(dá)含量顯著低于對(duì)照組，Bax、Caspase-3 mRNA表達(dá)含量顯著高于對(duì)照組。

表2 兩組患者治療前后CNE細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率比較

表3 兩組患者治療前后Bcl-2、Bax、Caspase-3 表達(dá)含量比較 (光密度值)

4 兩組患者治療前后CD80和CD86陽(yáng)性率比較 見(jiàn)表4。兩組患者治療前后CD80和CD86陽(yáng)性率的比較，CD80和CD86陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，隨著時(shí)間遷移，CD80和CD86陽(yáng)性率呈現(xiàn)顯著下降趨勢(shì)。治療前和治療1周后比較，兩組患者CD80和CD86陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療4周和治療8周后比較，CD80和CD86陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組CD80和CD86陽(yáng)性率顯著低于對(duì)照組。

表4 兩組患者治療前后CD80和CD86陽(yáng)性率比較 [例(%)]

5 兩組患者臨床療效比較 見(jiàn)表5。實(shí)驗(yàn)組臨床療效顯著優(yōu)于對(duì)照組(P<0.05)。

表5 兩組患者臨床療效的比較 [例(%)]

討 論

鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma，NPC)是臨床發(fā)病率高、且有地域性差異的惡性腫瘤，廣東中西部地區(qū)是疾病的高發(fā)地區(qū)[11-13]。大量流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明，該疾病其早期癥狀不明顯，發(fā)現(xiàn)確診時(shí)已是晚期，且伴有淋巴系統(tǒng)的轉(zhuǎn)移。目前臨床上，該疾病的治療方式首選為放療。放療可使腫瘤不同程度的縮小，使癌細(xì)胞活力下降，使癌細(xì)胞增殖能力降低，從而控制疾病的發(fā)展，從而提高患者的生存率。但鼻咽癌放療扔存在許多毒副作用，最典型的有口腔黏膜反應(yīng)、骨髓功能抑制等等。因此，有學(xué)者提出，同步放療、化療可減少癌癥的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，減輕腫瘤組織負(fù)荷，改善局部血液循環(huán)，增加放射敏感度，從而提高治療效果，延長(zhǎng)患者壽命[14-16]。

本研究結(jié)果顯示，兩組患者治療前后CNE細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率、Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表達(dá)含量、CD80和CD86陽(yáng)性率差異顯著，并且隨著時(shí)間遷移，CNE細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率、Bax、Caspase-3 mRNA表達(dá)含量呈現(xiàn)顯著上升趨勢(shì)，Bcl-2表達(dá)含量、CD80和CD86陽(yáng)性率也呈現(xiàn)顯著下降趨勢(shì)[17-18]。說(shuō)明鼻咽癌患者采取針對(duì)性的同步放療治療方法，可以有效控制鼻咽癌患者腫瘤細(xì)胞的增殖，可能與同步放療可以影響細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、細(xì)胞周期，從而有效的誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡有關(guān)。

同時(shí)，治療4周和治療8周后比較實(shí)驗(yàn)組CNE細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率、Bax、Caspase-3 mRNA表達(dá)含量顯著高于對(duì)照組。熟地黃被稱(chēng)為“壯水之主，補(bǔ)血之君”，是優(yōu)良的補(bǔ)益延壽中藥，具有滋陰補(bǔ)血、填精益髓的功效。熟地黃多糖(Rehmannnia glutinosa polysaccharide，RGP)作為熟地黃的有效成分之一，具有多方面藥理作用，增強(qiáng)機(jī)體的造血功能、降血壓、降血糖、抗氧化等[19]。有學(xué)者提出，熟地黃多糖對(duì)人體多個(gè)細(xì)胞凋亡的信號(hào)通路具有一定藥理作用，而細(xì)胞凋亡的信號(hào)通路中的線(xiàn)粒體凋亡途徑通常依賴(lài)Caspases家族的活化。比如本研究中的Caspase-3、Bcl-2蛋白對(duì)細(xì)胞凋亡過(guò)程的調(diào)控至關(guān)重要[20]。

研究還發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組患者CD80和CD86陽(yáng)性率顯著低于對(duì)照組，細(xì)胞免疫在腫瘤免疫及其治療過(guò)程中發(fā)揮非常重要的作用。其中CD80、CD86 均是T淋巴細(xì)胞的共刺激分子，CD80與其配體CD28 結(jié)合可誘導(dǎo)T 淋巴細(xì)胞的活化和增殖。還有研究指出，CD 86可以參與到初次B淋巴的細(xì)胞應(yīng)答過(guò)程，具有信號(hào)的傳導(dǎo)作用。綜上，熟地黃多糖聯(lián)合同步放療對(duì)鼻咽癌患者癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移具有明顯的抑制作用，該聯(lián)合治療方式可以為抗鼻咽癌中成藥的開(kāi)發(fā)提供理論基礎(chǔ)。