3株紫花苜蓿內(nèi)生根瘤菌功能差異性分析

康文娟，師尚禮,2,3,4，王澤一，陳建綱,2，苗陽陽

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)學(xué)院，甘肅 蘭州 730070； 2.草業(yè)生態(tài)系統(tǒng)教育部重點實驗室，甘肅 蘭州 730070;3.甘肅省草業(yè)工程實驗室，甘肅 蘭州 730070； 4.中-美草地畜牧業(yè)可持續(xù)研究中心，甘肅 蘭州 730070)

植物內(nèi)生菌(endophyte)是指在某一生活階段或整個生活史生存于健康植物組織器官內(nèi)部或細胞間隙，與宿主植物互惠共生而不引起病癥的細菌或真菌[1-3]。隨著根瘤菌在非豆科植物組織中被發(fā)現(xiàn)分離后，又被發(fā)現(xiàn)存在于豆科植物的莖和種子中[4-5]，根瘤菌也被劃入內(nèi)生菌的范疇。近年來，有關(guān)內(nèi)生菌的研究主要包括植物內(nèi)生細菌的分離和鑒定、生物學(xué)功能分析、定殖過程的探索以及菌種的利用。Subramanian等[6]報道指出，植物內(nèi)生細菌與促生菌(PGPR)同時接種對豆科植物結(jié)瘤和固氮效率有促進作用。

關(guān)于苜蓿(Medicago)根瘤菌的研究已有很多報道，然而這些報道主要是從苜蓿根瘤、土壤或者種子中分離根瘤菌，對除種子外植物組織內(nèi)生根瘤菌的研究報道則主要集中在其促生能力、生物多樣性[7]、對生物和非生物逆境的抗性[8-9]、在植株體內(nèi)數(shù)量分布和運移動態(tài)[10-13]等方面，而在根瘤菌株共生固氮能力方面報道較少。本研究通過對3株組織內(nèi)生根瘤菌株抗逆性、促生以及共生能力的研究，旨在比較分析組織內(nèi)生根瘤菌株的功能差異，為紫花苜蓿(Medicagosativa)內(nèi)生根瘤菌的開發(fā)與利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1試驗地概況 試驗于2014年在甘肅省會寧縣東七里鋪和甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)蘭州牧草試驗站內(nèi)進行，樣地基本概況如表1所列。

表1 樣地概況Table 1 General situation of sampled plots

1.1.2苜蓿品種 兩個供試苜蓿品種已生長兩年，分別為甘肅本地品種“隴中”和引進美國的WL168HQ(表1)，植株生長健壯、無病害。選用WL168HQ為接種苜蓿品種，由甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)生態(tài)系統(tǒng)教育部重點實驗室提供種子。

1.1.3培養(yǎng)基和營養(yǎng)液 根瘤菌株培養(yǎng)采用YMA培養(yǎng)基[5]，活化采用TY培養(yǎng)基[14]；溶磷能力測定采用有機磷蛋黃卵磷脂(EYPC)和無機磷Ca3(PO4)2固體培養(yǎng)基[15]。營養(yǎng)液采用Hoagland有氮及無氮營養(yǎng)液[14]。

1.2 指標(biāo)測定及方法

1.2.1內(nèi)生根瘤菌株分離與純化 于初花期在每個苜蓿品種樣地內(nèi)隨機取5株植株，連根挖起裝于自封袋冷藏條件帶回實驗室。清洗植株，晾干表面明水后用無菌剪刀將根分離為根表皮和根中柱，各稱取1 g置于無菌三角瓶內(nèi)，加碘伏(0.45%～0.55%)溶液震蕩滅菌3 min，無菌水沖洗5次，加2 mL無菌水在研缽中研磨均勻。將研磨勻漿轉(zhuǎn)入2 mL離心管離心(4 000 r·min-1,10 min),用無菌水依次配置成10-3、10-4、10-5稀釋液，取0.2 mL稀釋平板法涂抹至含剛果紅的YMA培養(yǎng)基上，28 ℃培養(yǎng)48 h，進行內(nèi)生菌株分離和純化。具體方法參考文獻[11]。

1.2.2內(nèi)生細菌16S rDNA序列分析 用上海生工細菌DNA提取試劑盒(SK8256)提取內(nèi)生菌基因組DNA，方法參見試劑盒說明書。擴增引物采用27F(5′-AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG-3′)和1492R (5′-TAC GGY TAC CTT GTT ACG ACT T-3′)[16]。PCR反應(yīng)體系和擴增條件參考文獻[16]。PCR擴增產(chǎn)物委托上海生工進行測序，測序的16S rDNA序列提交到GenBank數(shù)據(jù)庫。通過EzBioCloud鑒定服務(wù)網(wǎng)站(https:∥www.ezbiocloud.net/)[17]獲得與供試菌株序列同源性最高的模式菌株16S rDNA序列，用MEGA 6.0軟件進行比對，選用Neighbour-joining法進行UPGMA分析構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，Bootstrap法(1 000次重復(fù))檢驗。

1.2.3表型特性測定 以YMA固體平板培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，對3株內(nèi)生根瘤菌進行唯一碳氮源、抗逆性以及生理生化特性測定。唯一碳源測定項目包括蘋果酸、肌醇、肌酸、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、延胡索酸、琥珀酸、D-果糖和乳糖；唯一氮源包括L-色氨酸、甘氨酸、精氨酸、L-組氨酸和苯丙氨酸；染料抗性測定包括溴百里酚藍、甲基紅、甲基綠、溴酚藍、亞甲基紅、中性紅、亞硝酸鈉、孔雀石綠、溴甲基綠和剛果紅；唯一碳氮源利用和染料抗性測定設(shè)定濃度為1%；抗生素敏感性測定包括紅霉素、氯霉素、卡納霉素、氨芐霉素、新霉素、鏈霉素和慶大霉素，設(shè)置濃度梯度為5、50、100和300 μg·mL-1；NaCl的濃度梯度為2%、4%和6%，耐酸堿性測定pH 5、9和11，生長溫度范圍測定包括8、37和40 ℃。

生理生化試驗包括淀粉水解試驗、明膠水解試驗、產(chǎn)硫化氫試驗、VP試驗、吲哚試驗、接觸酶反應(yīng)、檸檬酸鹽試驗、3-酮基乳糖反應(yīng)和BTB產(chǎn)酸產(chǎn)堿反應(yīng)。菌株接種均設(shè)有3個陽性重復(fù)和1個陰性對照，除生長溫度測定試驗在5～7 d后記錄菌體生長狀況外，其余所有菌株接種后均于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24～48 h后記錄菌體生長狀況。所有滅菌均采用121 ℃、26 min條件。具體測定方法參考文獻[18]。

1.2.4溶磷及分泌生長素(IAA)能力測定 參照文獻[19]，采用有機磷蛋黃卵磷脂(EYPC)和無機磷Ca3(PO4)2固體培養(yǎng)基溶磷圈法進行溶磷能力測定，28 ℃培養(yǎng)7 d后測定根瘤菌菌落溶磷透明圈直徑與菌落直徑的比值(D/d)。參照文獻[20]的方法分析菌株分泌IAA的能力。

1.2.5共生結(jié)瘤及固氮能力測定 種子處理和培苗：挑選子粒飽滿、健康的苜蓿種子數(shù)粒，在生物安全柜內(nèi)用碘伏溶液(有效碘含量0.45%～0.55%)震蕩滅菌3 min，用無菌水沖洗5～6次，于清水瓊脂中28 ℃催芽48 h。將河沙洗凈，pH調(diào)至中性后烘干，冷卻，在40 mm×250 mm玻璃試管中裝入河沙至距底100 mm處，棉塞加蓋包扎，121 ℃滅菌26 min。在無菌條件下取出棉塞，每管加入30 mL無菌水。待水完全滲入后，將發(fā)芽種子植入試管，每管10粒，加蓋棉塞，置于光照培養(yǎng)箱中無菌培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為光照度7 000～8 000 lx，光照時間12 h·d-1，有光照時溫度21～25 ℃，無光照時溫度16～20 ℃，相對濕度50%～70%。在第7天澆灌Hoagland有氮營養(yǎng)液4 mL。

根瘤菌菌液制備和接種：將保存的根瘤菌株接入TY平板培養(yǎng)基活化24 h。再轉(zhuǎn)入YMA液體培養(yǎng)基，160 r·min-1、28 ℃搖床培養(yǎng)至光密度值(OD600值)≥0.5時，10 000 r·min-1離心10 min，拋去上清液后用無菌水洗下菌體，搖勻打散后用無菌水將菌液配制成OD600值為0.5的菌懸液。在幼苗生長第15天時，在無菌條件下用移液槍將制備好的菌液加入幼苗根部，每管4 mL，加棉塞無菌培養(yǎng)。以不含根瘤菌的菌液為對照，每個菌株4個試管作為重復(fù)。培養(yǎng)第22和30天，在無菌條件下澆灌Hoagland無氮營養(yǎng)液，30 d后去掉棉塞，然后每隔5 d澆灌一次Hoagland無氮營養(yǎng)液，每管4 mL。

接種效果測定：接種45 d后，收獲苜蓿植株并清洗干凈，用濾紙吸干水分。每管隨機選取3株，測算單株葉片數(shù)、單株根瘤數(shù)和單株有效根瘤重。以第1片對生子葉葉痕處作為劃分地上、地下部分的標(biāo)準(zhǔn)，測定株高和根長；將地上和地下部分剪開后分別包入錫箔紙袋，兩端開口，在105 ℃烘箱中烘15 min，再經(jīng)80 ℃烘干至恒重，分別測定地上和地下干重。將葉片與葉脈分離后稱重，用80%丙酮∶95%乙醇=1∶1提取液法測定葉片葉綠素含量；粗蛋白含量采用連續(xù)流動分析法[21-22]測定；固氮酶活性采用乙炔還原法[23]測定。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS19.0進行統(tǒng)計分析，測定結(jié)果用平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤表示，對不同菌株接種處理分別進行單因素方差分析，采用Duncan法進行多重比較，采用Excel 2010制表。

2 結(jié)果

2.1 內(nèi)生菌的分離及鑒定結(jié)果

在初花期，對兩個苜蓿品種植株上根表皮和根中柱的內(nèi)生細菌進行分離，由16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育分析可知，僅有3株內(nèi)生菌(WLP2、WLG1和LP3)屬于中華根瘤菌(Sinorhizobiummeliloti)，在系統(tǒng)發(fā)育樹上與模式菌株SinorhizobiummelilotiLMG 6133T形成獨立分支(圖1)，序列相似性分別為98.42%、97.63%和97.26%。菌株WLP2、WLG1和LP3分別分離自WL168HQ和隴中苜蓿，分離部位包括根表皮和根中柱，直徑分別為5.5、5.0和4.5 mm，均為半球形突起、乳白色半透明形態(tài)(表2)?，F(xiàn)由甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)生態(tài)系統(tǒng)教育部重點實驗室保存。

表2 供試菌株來源及形態(tài)特征Table 2 Sources and morphological characteristics of tested strains

圖1 16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育分析樹Fig. 1 Phylogenetic tree based on 16S rDNA analysis

2.2 表型特性

3株內(nèi)生根瘤菌均能利用供試的10種碳源以及精氨酸、L-組氨酸和苯丙氨酸，產(chǎn)硫化氫和過氧化氫，不代謝3-酮基乳糖，符合根瘤菌的表型特征描述[23](表3)。72 h之內(nèi)均在YMA培養(yǎng)基上形成直徑≥4 mm的單菌落，BTB反應(yīng)產(chǎn)酸，符合快生型根瘤菌的特征[5]。

在10種供試染料中，3株內(nèi)生根瘤菌均不能耐受溴酚藍(表4)。就耐受抗生素能力而言，3株菌均能耐受≤100 μg·mL-1的紅霉素和慶大霉素以及≥300 μg·mL-1的氯霉素和氨芐霉素。其中菌株WLP2能耐受≥300 μg·mL-1的氯霉素、卡那霉素、氨芐霉素、新霉素和鏈霉素，WLG1能耐受≥300 μg·mL-1的氯霉素和氨芐霉素，LP3能耐受≥300 μg·mL-1的氯霉素、氨芐霉素、新霉素和鏈霉素。表明WLP2菌株抗生素耐受范圍最廣。

表3 菌株唯一碳氮源利用及生理生化特性Table 3 Sole carbon and nitrogen utilization and biochemical characteristics of the strains

+，菌株反應(yīng)陽性；-，菌株反應(yīng)陰性。下同。

+, strains showed positive reaction; -, strains showed negative reaction; similarly for Table 4.

從抗鹽性上看(表4)，菌株WLP2可耐受6%的鹽脅迫，WLG1和LP3僅可耐受4%的鹽脅迫；耐受酸堿性方面，WLP2和WLG1能在pH 5～11的YMA培養(yǎng)基上生長，LP3不能耐受pH 11的環(huán)境；耐受高低溫方面，WLP2和LP3均能在8～40 ℃的溫度下生長，WLG1不能耐受8 ℃的低溫。表明3株菌株中WLP2對鹽、pH和溫度的適應(yīng)范圍最廣，其次為WLG1和LP3。

2.3 菌株溶磷及分泌IAA能力

3株內(nèi)生根瘤菌溶磷和分泌IAA能力不同(表5)。在溶磷方面，菌株WLG1和WLP2能溶解有機磷，D/d值分別為1.21和1.07，前者比后者溶解有機磷能力強；LP3不能溶解有機磷。菌株WLP2能溶解無機磷，D/d值為1.29，溶解無機磷能力比溶解有機磷能力強；WLG1和LP3都不能溶解無機磷。就分泌IAA能力而言，菌株WLP2能夠分泌IAA，菌株WLG1和LP3沒有分泌IAA的能力。綜上所述，菌株WLP2既能溶磷又能分泌IAA，促生能力較強;菌株WLG1溶解有機磷能力最強。

2.4 共生結(jié)瘤及固氮能力

2.4.1結(jié)瘤能力和固氮酶活性 3株內(nèi)生根瘤菌接種，紫花苜蓿植株的結(jié)瘤效果不同(表6)。與對照相比，3株菌株接種對單株結(jié)瘤數(shù)均有促進作用，WLG1結(jié)瘤效果最好(25.67個)，單株結(jié)瘤數(shù)比對照(8.33個)高208.16%，差異顯著(P<0.05)；WLP2(19.67個)和LP3(13.67個)單株結(jié)瘤數(shù)雖然分別比對照高136.13%和64.11%，但與對照差異不顯著(P>0.05)。從單株有效根瘤重看，3株菌株均與對照差異不顯著(P>0.05)，WLG1(15.50 mg)比對照(14.53 mg)增加了6.68%；LP3(10.60 mg)和WLP2(9.73 mg)單株有效根瘤重分別比對照降低了27.05%和33.04%。表明接種WLG1菌株幼苗結(jié)瘤能力最強。

就根瘤固氮酶活性而言(表6)，WLP2效果最好[10.00 μmol·(g·h-1)]，根瘤固氮酶活性比對照[0.31 μmol·(g·h-1)]高3 125.81%，顯著高于其他處理(P<0.05)；菌株WLG1[0.30 μmol·(g·h-1)]和LP3[0.00 μmol·(g·h-1)]分別比對照降低了3.23%和100%，均與對照差異不顯著(P>0.05)。表明菌株WLP2接種根瘤固氮酶活性最強。

2.4.2植株生長和生物量 就株高而言，菌株WLP2(18.43 cm)和LP3(15.17 cm)接種，株高分別比對照(15.00 cm)高22.87%和1.13%，WLG1株高(12.50 cm)比對照低16.67%，三者均與對照差異不顯著(P>0.05)(表7)。就根長而言，雖然菌株LP3(9.67 cm)、WLG1(9.50 cm)和WLP2(9.37 cm)接種，根長分別比對照(8.67 cm)高11.53%、9.57%和8.07%，但與對照差異不顯著(P>0.05)。

3個菌株接種幼苗生物量不同(表7)。就地上干重而言，菌株WLG1(139.43 mg)接種比對照(80.90 mg)高72.35%，差異顯著(P<0.05)；WLP2(124.37 mg)和LP3(102.10 mg)接種分別比對照高53.73%和26.21%，均與對照差異不顯著(P>0.05)。就地下干重而言，菌株WLG1接種(96.87 mg)比對照(43.57 mg)高122.33%，顯著大于其余處理(P<0.05)；WLP2(48.40 mg)接種比對照高9.98%，LP3(27.37 mg)接種比對照低37.18%，二者均與對照差異不顯著(P>0.05)。表明菌株WLG1接種植株生物量最高。

表4 菌株抗逆性Table 4 Tolerances of the strains

表5 菌株溶磷及分泌生長素(IAA)能力Table 5 Abilities of the strains to solubilize phosphate and secrete IAA

D/d，溶磷指數(shù)；D，溶磷圈直徑；d，菌落直徑；+++，菌株能夠分泌IAA。

D/d, phosphate-dissolving index; D, phosphate-dissolving ring diameter; d, colony diameter; +++, strains could secret IAA.

2.4.3單株葉片數(shù)、葉綠素含量和粗蛋白含量 就單株葉片數(shù)而言，菌株WLP2(15.67株)和WLG1(14.33株)接種單株葉片數(shù)分別比對照(9.33株)高67.95%和53.59%，LP3接種單株葉片數(shù)(8.00株)比對照低14.26%，均與對照差異不顯著(P>0.05)(表8)。就葉綠素含量而言，菌株WLP2接種(3.53 mg·g-1)比對照(2.21 mg·g-1)高59.73%，差異顯著(P<0.05)；而WLG1(1.79 mg·g-1)和LP3(1.73 mg·g-1)接種分別比對照低19.00%和21.72%，與對照差異不顯著(P<0.05)。

從粗蛋白含量看，各處理之間差異顯著(P<0.05)。與對照相比，WLP2接種粗蛋白含量最高(13.77%)，其次為LP3(12.21%)，分別比對照(10.88%)高26.56%和12.24%；而WLG1接種粗蛋白含量(9.44%)比對照低13.24%，且顯著低于其他處理(P<0.05)。表明菌株WLP2接種紫花苜蓿單株葉片數(shù)、葉綠素和粗蛋白含量較高(圖2)。

表6 接種不同內(nèi)生根瘤菌的紫花苜蓿單株根瘤數(shù)、有效根瘤重及固氮酶活性Table 6 Nodule number per plant, effective nodule weight and nitrogenase activity of alfalfa plants inoculated with different endophytic rhizobia

同列不同小寫字母表示菌株處理間差異顯著水平(P<0.05)。表7、8同。

Different lowercase letters within the same column indicate significant difference among strain treatments at the 0.05 level; similarly for Table 7 and Table 8.

表7 接種不同內(nèi)生根瘤菌的紫花苜蓿株高、根長、地上干重及地下干重Table 7 Height, root length, and aboveground and belowground dry weight of alfalfa plants inoculated with different endophytic rhizobia

表8 接種不同內(nèi)生根瘤菌的紫花苜蓿單株葉片數(shù)、葉綠素和粗蛋白含量Table 8 Leaf number, Chlorophyll and crude protein content of alfalfa plants inoculated with different endophytic rhizobia

3 討論

土壤鹽堿化是影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和生態(tài)環(huán)境的一個重要因素，溫度是影響根瘤菌生長的重要生態(tài)因子，因此篩選耐鹽堿性強，溫度適應(yīng)范圍廣的苜蓿內(nèi)生根瘤菌有重要意義。有研究表明，種子內(nèi)生根瘤菌有很強的耐鹽性，能適應(yīng)偏酸或偏堿的生長環(huán)境，適應(yīng)pH值范圍很廣泛；能在10～35 ℃之間生長，能耐短時的高溫[24]。供試的組織內(nèi)生根瘤菌株WLP2能在6% NaCl、pH 5～11和8～40 ℃的環(huán)境下生長，菌株WLG1和LP3均能耐受4%NaCl，前者可以在pH 5～11和溫度為37～40 ℃的環(huán)境下生長，后者能在pH 5～9和溫度為8～40 ℃的環(huán)境下生長，與以上研究結(jié)果一致。說明組織內(nèi)生根瘤菌株對鹽、pH和溫度的適應(yīng)范圍廣泛,在抵御外界生物及非生物環(huán)境壓力方面比根際其他微生物更具優(yōu)勢[25]。祁娟和師尚禮[24]研究指出，部分種子內(nèi)生根瘤菌最高耐鹽量達10%，能耐pH為4和12以及4 ℃的低溫環(huán)境，說明對于組織內(nèi)生根瘤菌株在高鹽、強酸堿和極溫環(huán)境下的抗逆性研究意義重大。

圖2 3株內(nèi)生根瘤菌接種紫花苜蓿幼苗Fig. 2 Medicago sativa seedlings after inoculation with three endogenous rhizobia

許多微生物具有將植物難以吸收利用的磷轉(zhuǎn)化為可吸收利用形態(tài)的能力[26]。研究表明不同品種紫花苜蓿種子內(nèi)部根瘤菌溶解有機磷的溶磷圈直徑比在2.567～1.117，只有一株菌(SL01)能夠溶解無機磷[24]。試驗中菌株WLG1和WLP2能形成透明圈，均可分泌一些酸性物質(zhì)，在培養(yǎng)基中擴散后使菌落周圍的磷酸鹽溶解[27]，前者溶解有機磷的直徑比為1.21，溶磷能力中等，后者直徑比為1.07，溶磷能力很弱。就溶解無機磷能力而言，3株菌中僅有菌株WLP2能形成透明圈，直徑比為1.29。不同形態(tài)磷酸鹽的結(jié)構(gòu)和成分存在差異，所有微生物對其溶解程度不同[28]。本研究只對菌株的磷酸鈣-無機磷溶解能力進行了定性測定，為了全面評價菌株溶磷能力，有必要對其他有機或無機磷源進一步測定。

植物生長激素IAA可促進植物根系生長，提高植物對養(yǎng)分的吸收。據(jù)報道大多數(shù)根際微生物[29]和禾本科植物聯(lián)合固氮菌株[28]具有分泌植物激素的能力，祁娟和師尚禮[5]研究也表明73%的種子內(nèi)生根瘤菌株能夠分泌IAA，而本研究中僅有1株組織內(nèi)生根瘤菌WLP2分泌IAA能力強。除菌株本身的因素外，這可能與菌株WLP2具有溶解有機磷和無機磷的能力有關(guān)，而土壤磷素含量的提高有利于提高菌株分泌IAA的能力[30]。

根瘤菌對苜蓿幼苗共生結(jié)瘤、固氮能力的影響與菌株基因型、苜蓿品種和生態(tài)環(huán)境有關(guān)[31]，不同菌株接種效果有差異。與此相似，本研究中根瘤菌對幼苗的影響明顯受到苜蓿品種的影響，如WL168HQ苜蓿接種菌株LP3后，其單株有效根瘤重、根瘤固氮酶活性、地下干重、單株葉片數(shù)和葉綠素含量均低于對照。有研究指出，不能單純依據(jù)固氮酶活性的高低確定根瘤菌的固氮能力，必須綜合考慮有效根瘤數(shù)、結(jié)瘤效率、地上部分干重和環(huán)境因素等指標(biāo)[32]。如本研究在實驗室條件下接種菌株WLP2后，雖然根瘤固氮酶活性、幼苗單株葉片數(shù)、葉綠素含量和粗蛋白含量均顯著高于對照和其他處理，但是單株結(jié)瘤數(shù)、植株株高、根長、地上和地下干重與對照差異不顯著，對苜蓿植株的生長沒有明顯效應(yīng)。菌株WLG1接種雖然固氮酶活性、株高、根長、單株葉片數(shù)和葉綠素含量與對照差異不顯著，但是單株結(jié)瘤數(shù)、地上干重和地下干重顯著高于對照和其他處理，植株生物量最高，表現(xiàn)出良好的接種效果。根瘤菌的固氮效果與土壤密不可分，從土壤中能夠篩選出高效根瘤菌，顯示環(huán)境因素對根瘤菌分布和固氮能力有重要意義[33]。所以有必要通過大田試驗測定菌株的共生結(jié)瘤和固氮能力，并比較組織內(nèi)生根瘤菌與非內(nèi)生根瘤菌的促生能力，以便開發(fā)具有不同功能的根瘤菌株。

4 結(jié)論

綜上所述，內(nèi)生根瘤菌株WLP2抗生素耐性強，能在6% NaCl、pH 5～11和溫度8～40 ℃的環(huán)境下生長，溶磷和分泌IAA能力強。菌株WLG1共生固氮能力強，對WL168HQ苜蓿接種效果最佳，均有很好的開發(fā)潛力。