督脈電針對(duì)脊髓損傷后大鼠運(yùn)動(dòng)功能的影響*

郭全虎 鄭利強(qiáng) 江 維 杜 川△

（1.浙江省義烏市婦幼保健計(jì)劃生育服務(wù)中心，浙江 義烏 322000；2.重慶市第九人民醫(yī)院，重慶 400700）

脊髓損傷（SCI）是一種由于外力等作用導(dǎo)致患者運(yùn)動(dòng)功能障礙的嚴(yán)重致殘性疾病，年發(fā)病率（20～40）/100萬(wàn)[1]。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，交通、勞動(dòng)和運(yùn)動(dòng)意外事故等迅猛增長(zhǎng)，SCI發(fā)病率也不斷升高。SCI后，由于外力的直接性損傷和缺血、缺氧等引起的繼發(fā)性損傷，導(dǎo)致患者的運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)難度加大，給患者的家庭及社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)，造成巨大的醫(yī)療壓力，因此，SCI一直是有待解決的世界性醫(yī)療難題之一。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者針對(duì)SCI的損傷機(jī)理、治療手段等研究不斷深入。與此同時(shí)，許多學(xué)者開(kāi)始探索針刺對(duì)SCI的醫(yī)療效果。眾所周知，針刺是中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的精粹，督脈電針更是一種常見(jiàn)的治療神經(jīng)損傷的方法[2]，在損傷的神經(jīng)功能恢復(fù)方面具有良好的治療效果[3]，也在一定程度上避免了藥物副作用。本研究擬通過(guò)對(duì)SCI的大鼠進(jìn)行督脈電針治療，統(tǒng)計(jì)分析不同時(shí)間點(diǎn)的大鼠BBB評(píng)分、斜板實(shí)驗(yàn)及運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位的情況，觀察電針對(duì)SCI后運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的影響?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 90只成年健康的雌性Sprague-Daw ley大鼠，體質(zhì)量（200±20）g，由第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院動(dòng)物房提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（渝）2012-0005。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 漢醫(yī)牌無(wú)菌針灸針（0.18 mm×13 mm，長(zhǎng)春愛(ài)康醫(yī)療器械有效公司），SDZ-Ⅱ型電子針治療儀 （蘇州醫(yī)療用品有限公司），Ponemah多道生理記錄儀（北京拜安吉科技有限公司）。

1.3 造模與分組 將SD大鼠先隨機(jī)抽取30只作為假手術(shù)組，對(duì)剩余大鼠進(jìn)行造模，后隨機(jī)分為損傷組和電針組各30例。根據(jù)觀察時(shí)間的不同，在各分組內(nèi)各設(shè)7、14、28 d為3個(gè)亞組。1）備皮：將上述大鼠稱重后，以1%的戊巴比妥鈉（40 mg/kg）腹腔注射麻醉后，在背部脫毛、俯臥位固定，并常規(guī)消毒。2）暴露術(shù)野：以T10棘突為中心，切開(kāi)長(zhǎng)約2 cm切口，依次分離皮下筋膜、剔除椎骨上肌肉、切開(kāi)椎板，暴露T10脊髓。3）打擊損傷：采用Allen打擊裝置，打擊強(qiáng)度：10 g×25 mm（假手術(shù)組僅固定），見(jiàn)大鼠雙后肢回縮撲動(dòng)，鼠尾痙攣性擺動(dòng)，證明造模成功（造模失敗大鼠剔除并補(bǔ)入），逐層縫合皮膚。4）術(shù)后養(yǎng)護(hù)：術(shù)后將大鼠置于干燥、潔凈墊料上，自由飲水、進(jìn)食，溫度和濕度適宜；予肌注青霉素，2×104U/d，連續(xù) 3 d，預(yù)防感染；擠壓膀胱排尿3次/d，直至其自主排尿功能恢復(fù)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 電針組于術(shù)后1 h采用柔軟的實(shí)驗(yàn)大鼠固定器固定，參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》的針刺方法及取穴標(biāo)準(zhǔn)，用一次性無(wú)菌針針刺大鼠“大椎”“命門(mén)”，進(jìn)針深度約5 mm，連接電針儀接頭，參數(shù)：連續(xù)波。頻率：100 Hz，強(qiáng)度以大鼠皮膚開(kāi)始振動(dòng)為宜，每次30 min，每日1次，每周6次。假手術(shù)組和損傷組術(shù)后1 h僅固定30 min。

1.5 觀察項(xiàng)目 1）Basso-Beattie-Bresnahan （BBB）功能評(píng)分。模型制備成功后，分別于7、14、28 d從每組隨機(jī)抽取10只大鼠，觀察其在曠場(chǎng)內(nèi)活動(dòng)，評(píng)估其后肢功能，觀察時(shí)間不少于5 min。其中，1名未參與本實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)人員抽取大鼠，另外2名熟悉評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行BBB評(píng)分。2）斜板實(shí)驗(yàn)。模型制備成功后分別于7、14、28 d，由1名未參與本實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)人員從每組隨機(jī)抽取10只大鼠；另2名熟悉本實(shí)驗(yàn)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)的且非本組實(shí)驗(yàn)人員以盲評(píng)的方式進(jìn)行斜板實(shí)驗(yàn)，獨(dú)立觀察記錄。實(shí)驗(yàn)過(guò)程：首先將抽取的大鼠頭朝左、橫放在與縱軸垂直的木板上；然后從水平位置（0°）起逐漸增大斜板角度，平板每次增大5°，以大鼠在木板上停留5 s且不跌落的最大角度作為評(píng)分值；重復(fù)上述過(guò)程3次，并取其平均值。3）運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位（MEP）。分別在用術(shù)后7、14、28 d，從每組隨機(jī)取10只大鼠進(jìn)行神經(jīng)誘發(fā)電位測(cè)定。麻醉，備皮，固定，消毒。切開(kāi)頭皮，暴露頭骨，正中矢狀縫向左1 mm，左側(cè)皮層冠狀縫后3 mm的相交點(diǎn)處打孔，直徑約3 mm。分別在椎旁肌、右側(cè)坐骨神經(jīng)處各插1枚、2枚銀針。皮層處于MEP刺激電極正極，記錄電極為右側(cè)坐骨神經(jīng)，負(fù)極置于頭皮下，參考電極連接椎旁肌。數(shù)據(jù)采集前，啟動(dòng)Ponemah多道生理記錄儀，設(shè)置刺激參數(shù)：采樣頻率4 Hz，波寬0.2 ms，強(qiáng)度3 MA，數(shù)據(jù)經(jīng)Scopev3.7.1進(jìn)行分析，分析參數(shù)，平均疊加256次，采樣間隔0.4 ms，分析時(shí)間 200 ms，頻率 10～3000 Hz，靈敏度 20 μV。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，采用單因素方差分析。顯著性水平α=0.05。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)BBB評(píng)分比較 見(jiàn)表1。7 d時(shí)，損傷組與電針組大鼠后肢功能恢復(fù)均很慢，且兩組大鼠BBB評(píng)分波動(dòng)在1～3分之間；14、28 d損傷組及電針組大鼠后肢功能恢復(fù)較快，BBB評(píng)分升高迅速；14、28 d電針組大鼠BBB評(píng)分明顯高于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的損傷組大鼠（P＜0.05）。

表1 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)BBB評(píng)分比較（分，±s）

表1 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)BBB評(píng)分比較（分，±s）

與假手術(shù)組比較，*P＜0.05；與損傷組比較，△P＜0.05。 下同

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2.2 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)斜板傾斜度評(píng)分比較 見(jiàn)表2。術(shù)后7、14、28 d，損傷組與相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的假手術(shù)組比較，斜板傾斜度顯著降低；7、14、28 d電針組較相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的損傷組斜板傾斜度明顯升高，且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)斜板傾斜度評(píng)分比較（分，±s）

表2 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)斜板傾斜度評(píng)分比較（分，±s）

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2.3 各組大鼠不同時(shí)段MEP的N1波峰潛時(shí)和波幅比較 見(jiàn)表3。運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位顯示：術(shù)后7、14、28 d，損傷組與假手術(shù)組比較，峰潛時(shí)明顯延長(zhǎng)，波幅明顯降低；相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的電針組與損傷組相比，電針組峰潛時(shí)縮短，波幅提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表3 各組大鼠不同時(shí)段MEP的N1波峰潛時(shí)和波幅比較（±s）

表3 各組大鼠不同時(shí)段MEP的N1波峰潛時(shí)和波幅比較（±s）

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3 討 論

近年來(lái)，SCI逐漸成為醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。到目前為止，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)SCI的治療主要局限于長(zhǎng)時(shí)間的皮質(zhì)醇激素的治療，但長(zhǎng)期服用激素類(lèi)藥物易導(dǎo)致患者抵抗力下降、感染加重等不良反應(yīng)。SCI具有高致殘性，導(dǎo)致患者長(zhǎng)期臥床后會(huì)繼發(fā)褥瘡、肺炎、肌肉萎縮等繼發(fā)性疾病，嚴(yán)重影響SCI患者運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)，給患者、家屬及社會(huì)造成巨大的負(fù)擔(dān)。

鑒于上述原因，近年來(lái)，人們逐漸將SCI的治療策略轉(zhuǎn)向中醫(yī)學(xué)——中醫(yī)針刺療法治療SCI，以期對(duì)SCI的治療提供新途徑。SCI損傷的是脊髓，其解剖位置恰好與中醫(yī)經(jīng)絡(luò)理論當(dāng)中的督脈吻合。中醫(yī)經(jīng)絡(luò)理論認(rèn)為，“督脈者，起于下極之俞，并于脊里，上至風(fēng)府，入屬于腦”，“起于少腹以下骨中央，女子入系廷孔，其孔溺孔之端也；其絡(luò)循陰器，合篡間繞篡后，別繞臀，至少陰，與巨陽(yáng)中絡(luò)者，合少陰上股內(nèi)后廉，貫脊屬腎”。故督脈為“陽(yáng)脈之海”，總督周身之陽(yáng)，手足三陽(yáng)經(jīng)與其交會(huì)，督脈損傷后，氣血外溢，陽(yáng)氣不能通達(dá)于肢體，患者可出現(xiàn)肢體麻木不仁，功能障礙；合并足太陽(yáng)膀胱經(jīng)損傷時(shí)，可出現(xiàn)泌尿系統(tǒng)功能障礙，與SCI相類(lèi)似。大椎是人體三陽(yáng)交匯之所，命門(mén)是人體陽(yáng)氣之根本，二者并用，具有補(bǔ)腎益氣壯陽(yáng)、接續(xù)督脈氣血的作用。已有研究表明[4]：督脈電針能降低SCI后的硫酸軟骨素蛋白聚糖的表達(dá)，對(duì)其運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)可能有一定的作用，但其治療效果尚不清楚，有待進(jìn)一步研究。

SCI后的康復(fù)治療主要側(cè)重于運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)[5]，在評(píng)價(jià)運(yùn)動(dòng)功能中最常用的方法是BBB評(píng)分及斜板實(shí)驗(yàn)。本研究結(jié)果顯示：經(jīng)督脈電針治療后，在14、28 d時(shí)，電針組大鼠運(yùn)動(dòng)功能較損傷組有所恢復(fù)，這與既往研究結(jié)果相一致[6]。相對(duì)于BBB評(píng)分及斜板實(shí)驗(yàn)而言，運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位在判斷神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能的預(yù)后及評(píng)價(jià)癱瘓程度方面具有很大的作用[12]，能直接反映運(yùn)動(dòng)傳導(dǎo)功能[13]。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位結(jié)果顯示：相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的損傷組及電針組與假手術(shù)組相比，峰潛時(shí)明顯延長(zhǎng)，波幅明顯降低，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的電針組與損傷組相比，電針組峰潛時(shí)縮短，波幅提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這表明SCI后，電針治療能有效降低峰潛時(shí)的延長(zhǎng)，提高波幅，促進(jìn)神經(jīng)傳導(dǎo)。也就是說(shuō)，電針治療對(duì)SCI后大鼠的運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)具有一定的促進(jìn)作用。

眾所周知，每一個(gè)運(yùn)動(dòng)的完成都離不開(kāi)神經(jīng)的支配。神經(jīng)的傳導(dǎo)依賴于神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)及其功能狀態(tài)，是機(jī)體神經(jīng)反應(yīng)速度快慢的根本原因[10]。神經(jīng)傳導(dǎo)速度在一定程度上可以反映機(jī)體神經(jīng)損傷情況，對(duì)損傷后的功能恢復(fù)有很好的指導(dǎo)作用[11]。有研究認(rèn)為，電針刺激足三里及環(huán)跳等穴位，對(duì)周?chē)窠?jīng)的功能恢復(fù)有很好的促進(jìn)作用[14]，可能促進(jìn)受損神經(jīng)元中營(yíng)養(yǎng)因子的高表達(dá)[15]，使神經(jīng)纖維跨越損傷部位，保持結(jié)構(gòu)的相對(duì)完整性，促進(jìn)神經(jīng)軸突的再生[16]。髓鞘是包繞在軸突外的一層膜，對(duì)神經(jīng)的傳導(dǎo)起關(guān)鍵作用，有研究表明，SCI后會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的脫髓鞘病變[7]，導(dǎo)致神經(jīng)傳導(dǎo)速度減慢，引發(fā)傳導(dǎo)阻滯[8-9]，嚴(yán)重影響其運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)。硫酸軟骨素蛋白聚糖是構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)的重要組成部分，對(duì)軸突延伸及生長(zhǎng)有明顯的抑制作用[17]。SCI后，電針能使損傷部位硫酸軟骨素蛋白聚糖呈低表達(dá)狀態(tài)[18]，進(jìn)而對(duì)軸突的抑制作用明顯減弱，軸突生長(zhǎng)明顯[19]，運(yùn)動(dòng)功能得以恢復(fù)[20]。督脈電針對(duì)SCI后運(yùn)動(dòng)功能有一定的恢復(fù)作用，可能是由于促進(jìn)軸突再生、改善神經(jīng)傳導(dǎo)功能。

綜上所述，督脈電針能有效提高SCI后的神經(jīng)傳導(dǎo)速度，對(duì)其運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)有一定的促進(jìn)作用，可能是由于促進(jìn)損傷軸突的再生，這為督脈電針?lè)乐蜸CI后的脊髓繼發(fā)性病理?yè)p害提供了新的治療思路，為今后臨床應(yīng)用督脈針刺治療脊髓損傷成為可能，但其具體作用機(jī)理尚不清楚，有待進(jìn)一步研究。